非酒精性脂肪肝NAFLD动物模型的多种饮食诱导方案
非酒精性脂肪肝疾病（NAFLD）和酒精性肝病（ALD）是慢性肝病中最主要的两种。NAFLD包括一系列病变，从肝脂肪变性到炎症，在没有大量饮酒的情况下，伴有或不伴有纤维化。
饮食诱导模型
相似于人类NAFLD的代谢紊乱，以营养过剩为基础的动物模型可以模拟肝脏的组织学特征。饮食诱导的NAFLD动物模型主要基于高脂、高糖等饮食结构，这些动物模型通常包括一种或多种饮食模式组合，可诱发单纯性脂肪变性和脂肪性肝炎。
1.高脂饮食：高脂饮食的脂肪供能占比通常在45-70kcal%，造模周期为8-10周，实验动物包括C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、SD大鼠、Lewis大鼠、Wistar大鼠，其中大鼠更容易被高脂饮食诱导。
高脂饲料诱导大鼠构建NAFLD模型
非酒精性脂肪肝（NAFLD）包含了一系列的疾病发展阶段，从一般脂肪变性进展到脂肪变性与炎症并发的非酒精性脂肪肝炎（NASH），随后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。大多数肥胖的成年人有脂肪肝型态，他们的患病率达到30%以上，因此，NAFLD的患病率会随着肥胖率的升高而升高。
为研究NAFLD的发病机制并找出治疗方法，建立动物模型是至关重要的一步。科研人员大多利用高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型，但近几年建立的NAFLD动物模型所采用的高脂饲料配方、建模周期均不一致，在研究方面具有不同的参考价值。本文对多种高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型的方法进行总结，如有疑问，欢迎与我们的技术团队讨论。
饲养环境
环境是饲养实验动物的必要条件之一，对于实验动物的成活率有着很大的影响，在相关论文中对温度和湿度几乎都有详细叙述，并强调了它的重要性。考虑到NAFLD模型对环境并无特殊要求，所以科研人员一般采取了22±2℃，湿度50%-60%，12小时循环照明的普通饲养环境。
不过值得注意的是，大鼠对于环境的变化很敏感，因此要保证饲养环境各项指标的稳定。同时由于高脂饲料的缘故，大鼠的排泄物异味更重，需要及时更换垫料，饲料和饮水也需要灭菌处理，以免对实验造成不必要的影响。
实验大鼠的选择
作为实验的受体，大鼠的选择十分重要，这不仅关系到实验成本，也决定了建模的质量及周期。
清洁级别
对于大鼠的清洁级别选择，综合多篇参考文献，即便使用普通动物，对实验结果也没有明显影响，但考虑到降低大鼠死亡率和实验成本，清洁级别越高的大鼠无疑是越好的。
种类选择
对于实验大鼠的选择主要有Wistar大鼠和SD大鼠。其中SD大鼠相对发育更快，适应能力更强，更利于建模；缺点是价格较高，性格更凶猛。综合考虑，我们认为SD大鼠仍然是更好的选择，但如果预算较少也可以选择前者。
性别选择
在查阅参考的十多篇文献中，科研人员无一例外的选择了雄性大鼠。由于成年的雌性动物代谢存在着明显的周期性，这可能会对实验造成影响，所以在大部分实验中，科研人员更倾向于选择雄性大鼠进行实验。
体重选择
成年大鼠的体重可达300g，考虑到实验时间一般为8-12周，我们认为选取5-6周，即120g-200g的大鼠比较合适。值得注意的是，大鼠之间的体重差异必须小于10%，以免引入无关的变量，对实验结果造成干扰。
高脂饲料配方
高脂饲料的配方无疑是NAFLD建模最关键的因素之一，合适的高脂饲料可以实现低死亡率低，快速建立模型的目标。以下我们将对于高脂饲料的配方进行详细探讨。
猪油含量
猪油含量是高脂饲料的核心，更高的猪油含量可以快速建立NAFLD模型，但会影响大鼠食欲及死亡率；猪油含量过低则会造成建模周期长，症状不明显。在《高脂血症非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，科研人员虽然采用了42%猪油含量的高脂饲料在第8周建模成功，但个人认为并不可取，因为如此高的猪油含量会大幅度提高大鼠死亡率。我们建议使用10%猪油含量的高脂饲料，可以在12-16周得到症状较明显的NAFLD模型，而且在环境适宜的情况下，通常不会有大鼠死亡。如果要缩短建模周期，可以适当提高猪油含量，但需要加入其它物质来促进吸收。
其它物质
由于高脂饲料在适口性方面不如常规饲料，会导致大鼠采食量下降，在一些实验中甚至出现了实验组大鼠体重低于对照组的情况。所以很多研究人员在高脂饲料中添加了胆盐（1%），以提高大鼠食欲，促进消化吸收。同时也可以在饲料中添加胆固醇（1%-5%），以促进脂肪肝的形成，缩短建模周期。
建模周期
建模周期和许多因素相关，不能一概而论。例如高脂饲料中的猪油含量对建模周期的影响就非常大。以下我们将讨论使用10%猪油含量饲料前提下所需的建模周期。
在《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，研究人员在8周停止建模，解剖大鼠，表明建模成功，但症状较轻，大部分大鼠处于轻度和中度肝炎。而上文提到的研究中，建模时间长达16周，但症状明显，大部分大鼠处于中度和重度肝炎。综上所述，可以证明12-16周是比较合适的建模周期，具体时间可结合需要选择。
木棒磨牙
在《非酒精性脂肪肝动物模型的建立与思考》中，科研人员考虑到高脂饲料质地偏软，所以为实验组大鼠提供了木棒磨牙，结果确实提高了大鼠存活率，体重也是实验组高于对照组的理想状况。
剔除肥胖基因抵抗大鼠
《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探讨了肥胖抵抗基因大鼠对于建立NAFLD模型的影响。实验结果表明，在同样的饲养条件下，肥胖抵抗基因大鼠的症状确实轻于普通大鼠，这不利于NAFLD模型的建立，所以在实验前应当将其剔除。
总结
高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型，应选择120-200g的雄性SD大鼠，剔除肥胖抵抗基因大鼠；环境温度应控制在22℃左右，湿度50%-60%；喂养10%猪油含量的高脂饲料，可添加胆盐和胆固醇，在12-16周基本可以建模成功。
2.高胆固醇饮食：含1.25%胆固醇和0.5%胆酸盐的饮食可诱导脂肪变性、炎症和纤维化形成；
3.蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）饮食：MCD饮食中蔗糖含量高，脂肪含量适中，但缺乏蛋氨酸和胆碱，它们是肝脏氧化和产生低密度脂蛋白(VLDL)的必要营养素；
蛋氨酸、胆碱联合缺乏饲料(MCD)(MCD: methionine- and choline deficient diet)也称做MCDD,是在脂肪代谢、高脂血症的研究非酒精性脂肪肝病模型,甲基化模型肿瘤模型等疾病模型的造模中经常用到的一款饲料。
蛋氨酸胆碱缺乏模型饲料（AIN-76）
经典MCD饲料
通常我们所见到的没有做特殊说明的MCD饲料都是经典MCD饲料。
这款饲料基于Ain-76标准，10%脂肪含量，蛋氨酸。胆碱不添加，含量基本为0。
一般多用于非酒精性脂肪肝炎(NASH)）及后期的肝纤维化、肝硬化方面的造模。
经典MCD饲料在饲喂大、小鼠时，反应相当剧烈，实验鼠体重会持续下降，且不发生胰岛素抵抗。死亡率大大增加。
这与其它方法诱导的非酒精性脂肪肝（NAFLD)大、小鼠模型有显著的不一样,同时也与人类典型的非酒精性脂肪肝炎(NASH)）患者情况相反，人类的非酒精性脂肪肝炎(NASH)患者不但会产生肥胖而且对胰岛素抵抗。
非酒精性脂肪肝(NAFLD)(不推荐)
造模周期:2-4周
饲喂方式:自由采食
储存方式:4摄氏度冷藏或-20摄氏度冷冻，避光
对照组:MCs (MCD同源配方,增加蛋氨酸和胆碱)
小贴士:部分MCD饲料在储存时没有做冷藏避光处理，会随着时间越来越黑(避光冷藏会减缓》，这是一种称为美拉德反应的效果，实际不影响造模效果。
非酒精性脂肪肝炎(NASH)
造模周期:5-8周
饲喂方式:自由采食
储存方式:4摄氏度冷藏或-20摄氏度冷冻,避光
对照组:McS (MCD同源配方,增加蛋氨酸和胆碱)
小贴士:部分MCD饲料在储存时没有做冷藏避光处理，会随着时间越来越黑(避光冷藏会减缓)，这是一种称为美拉德反应的效果，实际不影响造模效果。
蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）饲料普遍应用于脂肪代谢、高脂血症的研究，是构建非酒精性脂肪肝模型、甲基化模型、肿瘤模型的常用饲料。
适用动物：实验大/小鼠（C57、ICR、BALB/C、SD等常见品系）
适用周龄：3-4周离乳即可（若有特殊实验目的，可根据实际情况选取不同周龄的大/小鼠）
产品形状：棒状颗粒（如有特殊需求可以提供粉料等）
储存方式：4℃冷藏（建议）或常温
建议采购量：小鼠按照5克/只/天计算、大鼠按照25克/只/天计算
4.胆碱缺乏性氨基酸（CDAA）饮食：与MCD饮食相似，因为它们都缺乏胆碱。不同之处在于，L-氨基酸的混合物取代了等价相应的蛋白质。