本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，能用于多个质粒的共同转化。本试剂盒提供了完整的酵母感受态制备、储存以及转化试剂，每个试剂盒可做200次质粒的转化。

产品组分

保存与运输方法

保存：4ºC保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 酵母转化整个过程请无菌操作。
2. 使用高纯的质粒有助于提高转化效率。
3. 本品适用于酿酒酵母的转化。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、酵母感受态细胞的制备

1. 1. 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
   2. 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线，30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。
   3. 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基，30℃培养过夜。
   4. 第二天转接到含30-50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.4-0.5范围。1000g离心5min收集细胞，去上清。
   5. 用30-50ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。1000g离心5min，去上清。【注意】：若想节省准备时间，也可直接使用一周内的酵母培养产物（4℃保存），取3ml接种到50mlYPDA液体培养基过夜摇菌。之后离心收集细胞，用于下游实验。
   6. 用10ml制备液重悬和洗涤沉淀，1000g离心5min，去上清。
   7. 用0.5-1.0ml冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl分装到1.5-2ml无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。
   8. 按照缓慢冷冻的方法：①将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。【注意】：缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。

二、酵母转化

2.1 按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需360μl的混合液。

1. 1. 取360μl转化混合液加入上述制备好的感受态细胞，用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。
   2. 置于30℃水浴锅孵育40-60min，每10min轻轻混匀一次。对于一些菌种，延长孵育时间能提高转化效率，控制在3h之内。
   3. 3000g离心3min，去掉上清液。
   4. 【推荐】用0.5ml YPD Plus（MS6309-50ML）重悬沉淀，30℃摇床振荡培养30-60min。1000g离心5min，去掉上清液。
   5. 往沉淀内加入400μl无菌去离子水，重新悬浮沉淀。稀释10倍、100倍后分别转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养3-5天直至出现酵母克隆。

相关产品

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

AH109是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ报告基因从而产生AH109。AH109是MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因表达。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, MEL1GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ

基本信息

培养基：YPDA

培养条件：28℃，YPDA，有氧培养

保存方式：30%甘油，-20℃保存

转化方式：PEG/LiAC；电转；

基本应用：酵母双杂交实验

保存与运输方法

保存：-20℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

使用说明

提供的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后，请及时在固体平板上划线培养，挑取单菌落接种到液体培养基中，震荡培养后使用并保存新的甘油菌。

注意事项

1.使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可；也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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描述

Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Pichia pastoris

酵母转化试剂盒（用于毕赤酵母）

产品信息

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品描述

本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是专门针对毕赤酵母开发的，提供了一种简单和有效的方法用于快速制备毕赤酵母感受态细胞，立即使用或冻存后使用皆可。毕赤酵母的转化效率根据菌株的类型和质粒整合入宿主染色体的效率有关。每个试剂盒足够做20次质粒的转化。

产品组分

保存与运输方法

保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他4℃保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 第一次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20ºC储存备用。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。
2. 酵母转化整个过程请无菌操作。
3. 本品适用于毕赤酵母的转化。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 酵母感受态细胞的制备

1. 1. 取-80℃保存的甘油菌在YPD固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
   2. 挑取酵母单菌落接种到10ml YPD液体培养基，30℃培养过夜。
   3. 第二天按1%的接种量将培养物转接到含100ml YPD液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.6-1.0范围。【每10ml菌液用于一次转化】。
   4. 3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
   5. 加入5ml制备液重悬菌体，3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
   6. 加入0.2ml制备液重悬菌体，转移到无菌的1.5ml离心管，可直接用于转化实验或冻存备用。
   7. 按照缓慢冷冻的方法：①将感受态放入程序降温盒内，之后放到-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃保存。之后将感受态取出放到-80℃保存。感受态6个月稳定。

二、酵母转化

2.1取0.1~5μg的质粒DNA和10μl预变性的载体DNA加入到从-80℃取出未融化的感受态细胞，置于30℃水浴，每隔15s颠倒混匀，直至感受态细胞开始融化。

2.2从水浴锅取出，颠倒混匀直至感受完全融化。

2.3加入1.4ml转化液颠倒混匀，30℃水浴60min。

2.4 3000rpm离心3min，收集菌体沉淀，加入1ml重悬液重悬菌体。

2.5 3000rpm离心3min，收集菌体沉淀，加入0.1ml重悬液重悬菌体。将所有的菌体转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养3-5天直至平板出现菌落。

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描述

Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae  

酵母转化试剂盒（用于酿酒酵母）

【通知】：本试剂盒自2024/4月开始升级到第二代，在第一代试剂盒的基础上添加感受态冻存液，一改第一代试剂盒中感受态现做现用的严格要求，用户能更灵活的调整感受态制备和转化的时间，更人性化。同时，维持包装规格的基础上，维持原价格。

产品信息

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品描述

本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，适用菌株广泛，能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。

本品基于第一代试剂盒做出升级，新增感受态冻存液，这样制备好的感受态不用现做现用，能置于-80℃稳定保存6-12个月。

产品组分

保存与运输方法

保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他室温保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 第一次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20ºC保存。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。

2） PEG溶液低温情况下会析出，使用前最好常温温育确保完全溶解才使用。

3） 酵母转化整个过程请无菌操作。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 酵母感受态细胞的制备

1.1 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。

1.2 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线，30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。

1.3 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基，30℃培养过。

1.4 第二天转接到含50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.5-0.8范围。4000rpm离心5min收集细胞，去上清。

1.5 用30ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。4000rpm离心5min，去上清。

1.6 沉淀用1.5ml的100 mM LiAc重悬（100 mM LiAc：150μl 1M LiAc+1350μl 无菌水混匀即可】，之后转移到1.5ml离心管内。4000rpm离心5min，去上清。

1.7 用1.0ml冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl（或100μl）分装到1.5-2ml无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。【注意】：如果进行文库转化，按600μl/管分装。

1.8 按照缓慢冷冻的方法（二选一）：①将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。【注意】：缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。

二、酵母质粒转化

2.1按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需310μl的混合液。

2.2 取310μl转化混合液加入上述制备好的1管感受态细胞（50-100μl/管），用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。

2.3 置于30℃水浴锅孵育30min，每10min轻轻混匀一次。

2.4 置于42℃水浴锅热激30min，每10min轻轻混匀一次。

2.5 12000rpm离心15s，去掉上清液。

2.6 【可选步骤】用1ml YPD plus（MS6309-50ML）重新悬浮沉淀，30℃摇床震荡培养30-60min。12000rpm离心15s，去掉上清液。【注意】：转化产物使用YPD Plus复苏，转化效率可提高50-100%。若想提高现有酵母的转化效率，推荐进行此步操作。

2.7 往沉淀内加入100μl无菌去离子水，重新悬浮沉淀。并转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养2-4天。

三、酵母文库转化

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