TOP10F`；TOP10；F′附加体（F′ episome）；F-TOP10；IPTG；卡那霉素；链霉素；

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 菌株描述

TOP10F`菌株来源于TOP10菌株，除了F′附加体（F′ episome）的引入。F′附加体携带四环素抗性基因，使其能从携带f1复制子的载体中纯化单链DNA。F′附加体还携带lacI<sup>q</sup>抑制子，参与IPTG作为诱导剂对trc，tac和lac启动子的诱导表达。TOP10F`菌株进行蓝白斑筛选，需要IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。适用于高效克隆和质粒扩繁。

TOP10F`菌株基因型：F´{lacIq Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

产品描述

本品是大肠杆菌TOP10F`菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，经pUC19载体检测转化效率＞10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1.1 将TOP10F`感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置25min。

1.2 42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

1.3 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

1.4 低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，37℃至少培养13h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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