ABI A46113 PowerTrack SYBR Green Master Mix

PowerTrack SYBR Green Master Mix 是一种预先配制、优化的通用型 2X 预混液,可用于实时荧光定量 PCR 检测,并提供内置的可视的染料–指示剂,用于精确的反应设置。PowerTrack SYBR Green Master Mix 结合用户提供的引物组和模板,设计用于扩增靶标,以进行准确的基因表达分析。

PowerTrack SYBR Green Master Mix 的功能包括:
?内置的可视指示剂有助于反应设置
?较宽的引物 TM 和浓度兼容性使 qPCR 反应设置具有灵活性,并较大限度减少优化
?在较宽的动态范围内,CTs 的特异性和紧密的重现性’
?带有 UNG 和 dUTP,防止残留 PCR 产物污染

内置可视指示剂
PowerTrack SYBR Green Master Mix 包含一个不会干扰实时荧光定量 PCR 的惰性蓝色染料,可在试管或孔中提供更高的可视性。另提供一种独立的样品缓冲液,其中含有一种惰性黄色染料。选用此黄色样品缓冲液,加样后会得到从蓝色变为绿色的反应混合物,有助于避免移液错误。黄色样品缓冲液有助于反应的设置,但 PowerTrack SYBR Green Master Mix 无需获取卓越的结果。

具有较大的特异性和重现性的配方
PowerTrack SYBR Green Master Mix 包含 Taq DNA 聚合酶,并通过抗体介导的热启动机制严格控制,有助于防止聚合酶在低温下出现不需要的过早活性,从而避免非特异性扩增。PowerTrack SYBR Green Master Mix 旨在为您在较具挑战性的实时荧光定量 PCR 应用中提供卓越的性能。

广泛的仪器兼容性
PowerTrack SYBR Green Master Mix 可在标准或快速循环模式下使用,并且兼容所有 Applied Biosystems 实时荧光定量 PCR 仪器。它还兼容 Bio-Rad CFX96?、CFX384?和iQ?5;Roche LightCycler?480和 Agilent MX3005P? 系统。为获得较佳结果,引物浓度应在300–800nm的范围内。

用于残留污染控制的 UNG

在常规运行 PCR 的实验室中,针对残留污染的控制是许多研究人员较关心的问题之一,也是假阳性的主要来源。PowerTrack SYBR Green Master Mix 包含 UNG 和 dUTP,能够降解任何之前扩增的 PCR 产物,并有助于防止后续 qPCR 反应的污染。

规格

浓缩

2X

检测方法

SYBR

产品规格

管装

No. of Reactions

5000 次反应

PCR 方法

qPCR

聚合酶

Taq DNA 聚合酶

反应速度

快速或标准

样品类型

DNA

容量

1 x 50 mL

适用于(设备)

7500 Fast 系统、7500 系统、7900HT Fast 系统、7900HT 系统、QuantStudio 3、QuantStudio 5、QuantStudio 6 Flex、QuantStudio 6 Pro、QuantStudio 7 Flex、QuantStudio 7 Pro、QuantStudio 12K Flex、Bio-Rad CFX Connect?、Bio-Rad CFX384 Touch?、Bio-Rad CFX96 Touch?、BioRad CFX96?、BioRad iCycler iQ、BioRad iQ5、BioRad MyiQ、ViiA? 7 系统、StepOne? 系统、MJ Chromo4、MJ Opticon、StepOnePlus? 系统、Roche LightCycler 480、Stratagene Mx3000P、Stratagene Mx3005P、Stratagene Mx4000

产品线

Applied Biosystems?

产品类型

实时荧光定量 PCR SYBR 预混液

数量

50 mL

运输条件

干冰

储存要求

储存在 -5° 至 -30°C 下

足够用于

5000 次反应

适用于(应用)

基因表达, 病毒检测

内容与储存

?PowerTrack SYBR Green 预混液
?40 X 黄色样本缓冲液

存储在-20±5°C的黑暗中。

ABI A25777 PowerUp SYBR Green 预混液

PowerUp? SYBR? Green 预混液是一种预配制、优化的通用型 2X 预混液,适用于实时荧光定量 PCR 工作流程。与用户提供的引物组和模板相结合,PowerUp? SYBR? Green 预混液设计用于扩增靶标,以实现精确的基因表达分析。

PowerUp? SYBR? Green 预混液的特性包括:
?具有优异特异性的双重热启动机制
? 在广泛动态范围内具有高度可重现的 CT
? 含有 UDG,以帮助防止残留污染
? 预组装反应的稳定性长达72小时
? 与大多数实时 qPCR 仪器兼容

双重热启动机制的出色特异性
特异性是获取 SYBR? Green 反应的高质量数据的关键,在严格的引物结合前,可以通过在较低温度下控制 Taq DNA 聚合酶来增强特异性。PowerUp? SYBR? Green 混合液采用 Dual-Lock? Taq DNA 聚合酶,其结合了两种独特的热启动机制,有助于控制其活性,并防止聚合酶在低温下出现不需要的早期活性。在评估24种不同引物组的实验中,PowerUp? SYBR? Green 预混液生成单熔解曲线100%的时间与高特异性扩增一致

CT 在较宽的动态范围内具有严格的重现性
PowerUp? SYBR? Green 预混液在广泛动态范围内对各种受测靶标表现出了出色的重现性(如图所示)。此外,此预混液还可在6个对数级上样量下实现高效扩增。与其他竞品混合液不同,在动态范围实验中,PowerUp? SYBR? Green 预混液未在高 cDNA 上样量、低相关系数下出现抑制现象,并在全动态范围内维持了稳定的效率,极大限度确保了数据质量的可信度(如图所示)。

含有 UDG 以实现残留污染控制
在 PowerUp? SYBR? Green 预混液中加入尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG) 和 dUTP,能够降解任何先前扩增的 PCR 产物,有助于防止后续 qPCR 反应污染和可能的假阳性结果

预混反应稳定性
PowerUp? SYBR? Green 预混液中的 Dual-Lock? Taq DNA 聚合酶的严格控制使得反应可以在循环前混合长达72小时而不影响数据(如图所示)。这种一致性使用户能够在许多工作流程方案中可靠、灵活地使用 PowerUP? SYBR? Green 预混液1。

兼容多种仪器

PowerUp? SYBR? Green 预混液可在标准或快速循环模式下使用,并与所有 Applied Biosystems? 实时荧光定量 PCR 仪器兼容2。它还兼容 Bio-Rad IQ?5 和 CFX96? /CFX384? 系统、Roche LightCycler? LC480 和 Stratagene? MX3005P? 系统。为确保获得极佳结果,推荐的引物浓度为 300–800 nM。

规格
检测方法
SYBR
产品规格
管装
PCR 方法
qPCR
聚合酶
Dual-Lock Taq DNA 聚合酶
反应速度
快速或标准
适用于(设备)
7500 Fast 系统、7500 系统、7900HT 系统、QuantStudio? 12k Flex、QuantStudio? 3、QuantStudio? 5、QuantStudio? 6 Flex、QuantStudio 6 Pro、QuantStudio 7 Pro、QuantStudio? 7 Flex、StepOne?、StepOnePlus?、ViiA? 7 系统
产品线
PowerUP?,SYBR?
产品类型
实时荧光定量 PCR SYBR 预混液
数量
5 x 5 mL
运输条件
湿冰
足够用于
2500次 20 μL 反应
适用于(应用)
基因表达
浓度
2X
反应次数
2500 次反应
样品类型
DNA
容量
5 x 5 mL
内容与储存
2x 混合物包含 SYBR Green 染料、双重锁定 Taq DNA 聚合酶、含有 dUTP/dTTP 混合物的 dNTP、热不稳定 UDG、ROX 被动参比染料和优化的缓冲液组分。包含5 X 5 mL 管,足以进行2500次 20-μL 反应(每个反应 10 μL 预混液)。

储存于 2–8°C。

ABI A57156 乾坤白金 SYBR Green 预混液

乾坤? 白金? SYBR? Green 预混液是一种预配制、优化的通用型 2X 预混液,适用于实时荧光定量 PCR 工作流程。与用户提供的引物和模板相结合,设计用于扩增靶标,以实现精确的基因表达分析。该预混液包含 UNG 和 dUTP,能够降解前序反应残留的qPCR产物,并有助于防止后续 qPCR 反应的污染。有效期长达两年,能更好的满足科研实验需求。

乾坤? 白金?SYBR? Green 预混液产品特性:
? 兼顾灵敏度和特异性:保障染料法检测的特异性,同时具有更小的 Ct 值
? 高强度荧光信号:更大的扩增曲线 dRn 值,更高的平台期荧光信号
? 宽动态范围:可在跨 6 log动态范围内进行精准检测,并确保可靠的线性
? 桌面稳定性高:配置好的 qPCR 反应体系可以在室温下稳定保存72小时,便于安排上机时间
? 批间一致性高:生产过程遵循 ISO 9001 质量管理体系,保证数据的稳定性和重复性
? 抗残留污染:采用 UDG 和 dUTP 配方,杜绝残留扩增产物污染造成的假阳性结果

优异特异性和灵敏度的结合
乾坤白金 SYBR Green 预混液含有 Taq DNA 聚合酶,该聚合酶受到抗体介导的热启动机制的严格控制,有助于防止聚合酶在低温下出现不符合预期的早期活性,从而导致非特异性扩增。

乾坤? 白金? SYBR? Green 预混液专为在最具挑战性的实时 PCR 应用(如高 GC 含量,低丰度或长扩增子靶标)中实现卓越性能而设计,具有高灵敏度和特异性。

高强度的荧光信号
乾坤白金 SYBR Green 预混液持续发出强烈的荧光信号,远高于背景,从而产生背景信号更低、更加稳定的结果。扩增曲线平台期的荧光值是其他预混液的2倍以上。

宽动态范围
乾坤白金 SYBR Green 预混液可以产生多达6个动态范围的数据(见图),并且与其他预混液相比,在检测各种目标时显示出等效或更好的动态范围。

台面稳定性高
乾坤白金 SYBR Green 预混液经过设计,可在室温下配置反应体系后,放置72小时仍保持高水平的性能。
图片显示了在制备时(T0)和在室温下放置72小时后(T72)进行的反应稳定性。

批间一致性高
乾坤白金 SYBR Green 预混液遵循 ISO 9001 质量管理体系,这有助于确保生产过程的可追溯性,并建立从原材料采购到产品发布的质量控制点,有助于生产具备更高批次一致性、更高稳定性及更高重复性的预混液(见图)。

抗残留污染
乾坤白金 SYBR Green 预混液中加入了尿嘧啶脱氧核糖核酸糖苷酶 (UDG) 和 dUTP,能够降解任何先前扩增的PCR产物,有助于防止后续 qPCR 反应的污染和可能的假阳性。

?

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
规格
产品规格

PCR 方法
qPCR
聚合酶
Taq DNA 聚合酶
反应速度
快速,标准
适用于(设备)
7500 Fast System, 7500 System, 7900HT Fast System, 7900HT System, QuantStudio 3, QuantStudio 5, QuantStudio 6 Flex, QuantStudio 6 Pro, QuantStudio 7 Flex, QuantStudio 7 Pro, QuantStudio 12K Flex, ViiA? 7 System, StepOne? System, StepOnePlus? System
标签或染料
SYBR Green
参比荧光染料
ROX(预混)
产品线
Applied Biosystems?
产品类型
实时荧光定量 PCR SYBR 预混液
运输条件
干冰
适用于(应用)
基因表达, 病毒检测
浓度
2X
反应次数
500 次反应
样品类型
DNA、cDNA
容量
5 mL
内容与储存
此 2x 预混液包括:
? SYBR Green 染料
? Taq DNA 聚合酶
? 具有 dUTP/dTTP 混合物的 dNTP
? 热不稳定 UDG
? ROX 惰性参比染料
? 优化的缓冲液

包含 1 X 5 mL 管,可用于500次反应(20 μL反应体系,每次反应用 10 μL)

-20°C存储。
临时存储可在 4°C,最多放置4个月。

ABI A25742 PowerUp SYBR Green 预混液

PowerUp? SYBR? Green 预混液是一种预配制、优化的通用型 2X 预混液,适用于实时 PCR 工作流程。与用户提供的引物组和模板相结合,PowerUp? SYBR? Green 预混液设计用于扩增靶标,以实现精确的基因表达分析。

PowerUp? SYBR? Green 预混液的特性包括:
?双重热启动机制,可实现出色的特异性
?在广泛动态范围内具有高度可重现的 CT
?含有 UDG 以避免残留污染
?持续72小时的预混反应稳定性
?可兼容大多数实时 qPCR 仪器

双重热启动机制提供了出众的特异性
特异性是获取 SYBR? Green 反应高质量数据的关键,而在严格的引物结合前,可在较低温度下通过控制 Taq DNA 聚合酶来提高特异性。PowerUp? SYBR? Green 混合液采用 Dual-Lock? Taq DNA 聚合酶,其结合了两种独特的热启动机制,有助于控制其活性,并防止聚合酶在低温下出现不需要的早期活性。在评估24种不同引物组的实验中,PowerUp? SYBR? Green 预混液生成单熔解曲线100%的时间与高特异性扩增一致

CT 在较宽的动态范围内具有严格的重现性
PowerUp? SYBR? Green 预混液在广泛动态范围内对各种受测靶标表现出了出色的重现性(见图)。此外,此预混液还可在6个对数级样品起始量下实现高效扩增。与其他竞争产品不同,在动态范围实验中,PowerUp? SYBR? Green 预混液未在高 cDNA 起始量、低相关系数下出现抑制现象,并在全动态范围内维持了稳定的效率,较大限度确保了数据质量的可信度(参见图)。

含有 UDG 以实现残留污染控制
在 PowerUp? SYBR? Green 预混液中加入尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG) 和 dUTP,能够降解任何先前扩增的 PCR 产物,有助于防止后续 qPCR 反应污染和可能的假阳性结果

预混反应稳定性
PowerUp? SYBR? Green 预混液中的 Dual-Lock? Taq DNA 聚合酶的严格控制使得反应可以在循环前混合长达72小时而不影响数据(见图)。这种一致性使用户能够在许多工作流程方案中可靠、灵活地使用 PowerUp? SYBR? Green 预混液1。

兼容多种仪器
PowerUp? SYBR? Green 预混液可在标准或快速循环模式下使用,并与所有 Applied Biosystems? 实时 PCR 仪器兼容2。它还兼容 Bio-Rad IQ?5 和 CFX96?/CFX384? 系统、Roche LightCycler? LC480 和 Stratagene? MX3005 P? 系统。为确保获得最佳的结果,推荐的引物浓度为300–800 nM。

了解有关 PowerUp? SYBR? Green 预混液的更多信息 >

1 Pre-PCR 的稳定性不仅受预混液的影响,还受分析的靶标的影响。为确保最佳的可信度,研究人员应验证自身具体靶标的稳定性曲线。
2 为获得较佳性能,建议使用 Applied Biosystems? 7900 系统进行标准循环。

SYBR Green I Nucleic Acid Stain是一种直接与dsDNA结合的荧光染料

SYBR Green I;Evagreen;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);qPCR;

产品信息

产品名称

规格

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)  

100µl

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   500µl

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   1ml

产品描述

SYBR Green I Nucleic Acid Stain是一种直接与dsDNA结合的荧光染料,是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料。定量PCR中,SYBR Green I与dsDNA非特异性结合发出荧光,通过检测反应体系中的荧光强度,进而达到检测PCR产物扩增量的目的。游离状态下SYBR Green I发出微弱荧光,一旦与dsDNA结合后,荧光强度增加1000倍,一个反应发出的荧光信号与dsDNA量成比例,且随扩增产物的增加而增加。因此,通过检测PCR反应液内的荧光信号强度,实现对目的基因的准确定量,同时还能测定扩增DNA片段的熔解温度。本品为10,000×的SYBR Green I核酸染料,达PCR级别。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

配置PCR反应混合液时,将10,000× SYBR Green I加入到PCR反应体系使其终浓度为0.5×(在0.2×~1×之间调整)。以上操作建议冰上进行。

【注意】:1)反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明;2)荧光定量扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明。

【影响荧光定量PCR的一些小细节】:

1) SYBR Green I使用浓度对荧光定量PCR的影响

合适的SYBR Green I使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I浓度过低使得荧光信号的变化降低,这意味着低拷贝样品可能无法检出;而浓度过高,可能会抑制PCR反应,降低PCR反应效率。因此,初次使用SYBR Green I需根据实际情况优化工作浓度,反应终浓度可在0.2×~1×之间调整。

2) 镁离子浓度对荧光定量PCR的影响

提高镁离子浓度能降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。建议用SYBR Green I进行荧光定量PCR反应时,镁离子浓度比不含SYBR Green I的普通PCR体系高出0.5~3mM。 

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产品名称 规格
SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO)核酸凝胶染料 100µl
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料 100µl
GoldView Nucleic Acid Gel Stain (10,000×)核酸染料(10,000×) 1ml
SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   100µl
SYBR Safe DNA Gel Stain  (10,000× in DMSO)  核酸凝胶染料 500µl

 

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)

SYBR Green I;Evagreen;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);qPCR;

SYBR Green I Nucleic Acid Stain是一种直接与dsDNA结合的荧光染料,是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料。定量PCR中,SYBR Green I与dsDNA非特异性结合发出荧光,通过检测反应体系中的荧光强度,进而达到检测PCR产物扩增量的目的。游离状态下SYBR Green I发出微弱荧光,一旦与dsDNA结合后,荧光强度增加1000倍,一个反应发出的荧光信号与dsDNA量成比例,且随扩增产物的增加而增加。因此,通过检测PCR反应液内的荧光信号强度,实现对目的基因的准确定量,同时还能测定扩增DNA片段的熔解温度。本品为10,000×的SYBR Green I核酸染料,达PCR级别。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

配置PCR反应混合液时,将10,000× SYBR Green I加入到PCR反应体系使其终浓度为0.5×(在0.2×~1×之间调整)。以上操作建议冰上进行。

【注意】:1)反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明;2)荧光定量扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明。

【影响荧光定量PCR的一些小细节】:

1) SYBR Green I使用浓度对荧光定量PCR的影响

合适的SYBR Green I使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I浓度过低使得荧光信号的变化降低,这意味着低拷贝样品可能无法检出;而浓度过高,可能会抑制PCR反应,降低PCR反应效率。因此,初次使用SYBR Green I需根据实际情况优化工作浓度,反应终浓度可在0.2×~1×之间调整。

2) 镁离子浓度对荧光定量PCR的影响

提高镁离子浓度能降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。建议用SYBR Green I进行荧光定量PCR反应时,镁离子浓度比不含SYBR Green I的普通PCR体系高出0.5~3mM。 

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SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

SYBR Green II;GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed; GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

SYBR Green II是目前已知电泳凝胶中RNA检测最灵敏的染料之一,在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中最低检到100pg RNA或ssDNA的单一条带(使用254nm紫外反射光源照射,并用宝丽来667黑白胶片和SYBR滤光片拍照)。即使用300nm透射光也能检测到500pg RNA的单一条带。SYBR Green II的灵敏度明显强于溴化乙啶(EB)。标准琼脂糖迷你胶EB最低检出1.5ng单链核酸的单一条带(使用300nm透射光照射并用橙-红明胶滤光片拍照)。

SYBR Green II在变性琼脂糖/甲醛凝胶和聚丙烯酰胺/尿素凝胶中的检测灵敏度有点降低,然而仍优于EB。为了获得最大的检测灵敏度,琼脂糖/甲醛凝胶必须在EB染色前清洗数小时。相反,不做任何的清洗或脱色步骤,用SYBR Green II染色的琼脂糖/甲醛凝胶或聚丙烯酰胺/尿素凝胶能检测到1ng RNA单一条带(254nm反射照明)和4ng RNA单一条带(300nm透射照明)。SYBR Green II在RNA检测具备这一卓越灵敏度的特性归因于几个因素,包括优越的荧光量子产量、结合能力和荧光增强。

本品为溶于DMSO 的10,000×的SYBR Green II RNA核酸染料,可用于:1)Northern Blot、起始位点作图或cDNA制备前对RNA产物的小量分析;2)高分辨率变性梯度凝胶电泳(DGGE)后对5S rRNA迁移方式的观察;3)单链构象多态性(SSCP)中的DNA染色;4)PCR扩增前对DNA染色。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green II 对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。强烈建议处理DMO储存液需戴双层手套。和所有的核酸染料一样,含SYBR Green II RNA核酸染料的溶液需先穿过活性炭再丢弃。活性炭之后必须焚烧来破坏染料。

2)   SYBR Green II可通过乙醇沉淀法从核酸中去除。异丙醇沉淀法去除效果稍差些。正丁醇萃取、氯仿萃取和酚萃取法无法有效去除该染料。

3)   先用EB染色的凝胶可接下来用SYBR Green II染色,根据电泳后染色(post-staining)的标准步骤操作。与直接用SYBR Green II染色相比较可能灵敏度有些降低。

4)   不要在玻璃器皿中稀释SYBR Green II储存液,因其会结合到玻璃上。在聚丙烯器皿中稀释储存液。

5)   SYBR Green II不会干扰酶反应。

6)   当用SYBR Green II染Northern或Southern Blot凝胶,建议在预杂交液和杂交液内加入0.1%-0.3% SDS。

7)   不建议用254nm紫外透射仪对凝胶拍照,因紫外光源的轮廓会出现在照片上。需要使用允许525nm光透过且排斥其他波长光的滤光片。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

光谱特征

SYBR Green II RNA核酸染料可用常见的紫外反射和透射激发光源,以及手持式紫外灯检测。SYBR Green II的最大激发波长为497nm,但还有一个二级激发峰集中在254nm附近。与RNA结合的SYBR Green II的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green II适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后染色(后染,推荐)

1)在非变性凝胶或变性聚丙烯酰胺/尿素或琼脂/甲醛凝胶上进行电泳。

【注】:其他凝胶基质未做测试,不确定染色效果如何。

2)稀释SYBR Green II储存液:对于非变性凝胶和变性聚丙烯酰胺/尿素凝胶,建议用TBE做1:10,000倍

稀释;对于变性琼脂糖/甲醛凝胶,建议用TBE做1:5,000倍稀释。

【注】:SYBR Green II染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5-

8.0之间(pH8.0更佳)。

3)将凝胶小心的放入合适的容器中,比如聚丙烯容器。缓慢加入足量的SYBR Green II染色工作液浸没凝胶。用铝箔等盖住容器或将容器置于黑暗处使得染料避光。染色前没有必要洗掉凝胶上的尿素或甲醛。

4)室温轻摇凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的最佳染色时间通常为10-40min,琼脂糖凝胶的通常为20-40min。凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。不需要脱色。染色液需保存在暗处(最好是冷藏)和重复使用3-4次。

【注】:用缓冲液制备的染色液置于4℃避光能放置1周或更久,置于室温避光能放3-4天。用水制备的染色液比缓冲液制备的稳定性差很多,建议24h内用完保证最大灵敏度。另外,用缓冲液(pH>8.0或pH<7.5)的缓冲液制备的染色液稳定性差很多,染色效率也会降低。

2.电泳前染色(预染)

1)配制成SYBR Green II预制凝胶

临灌胶前,按照每100ml凝胶中加入3-5µl SYBR Green II储存液(10,000× in DMSO)的比例加量。需注意到SYBR Green II热稳定性较差,不能在过热胶溶液中直接添加,需要等溶液冷却至50℃左右才能加染料。摇晃,震荡或翻转以保证染料充分混匀。

2)按照常规方法进行电泳。

三、观察和凝胶成像

3.1 使用300nm紫外透射光或254nm紫外反射光(灵敏度更高)照射染色凝胶。

3.2 为了最佳灵敏度,建议使用黑白胶片,可用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S7569)拍照。许多其他的黄色或绿色明胶或玻璃纸滤光片也能用来拍照,但绝大多数可能会减低灵敏度。EB染色凝胶拍照用的橙-红滤光片不适合于SYBR Green II染色凝胶。

3.3 用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S-7569)和Polaroid 667黑白胶片对凝胶进行拍照。染色凝胶基本无背景荧光,当检测少量RNA,允许长期胶片曝光。对于300nm透射,通常F-stop设置4.5时曝光1-2s足够。对于254nm反射(特别是手持灯),大约需要曝光1-1.5min以得到最大灵敏度。

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名称 规格         
    SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料 100µl
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料 100µl
GoldView Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) 核酸染料(10,000×) 1ml
MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝胶染料(效果同GelRed) 500µl
MKGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝胶染料(效果同GelGreen)    500µl
Ethidium Bromide (EB)溴化乙锭(EB,粉末) 1g

SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

SYBR Green II;GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed; GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

SYBR Green II是目前已知电泳凝胶中RNA检测最灵敏的染料之一,在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中最低检到100pg RNA或ssDNA的单一条带(使用254nm紫外反射光源照射,并用宝丽来667黑白胶片和SYBR滤光片拍照)。即使用300nm透射光也能检测到500pg RNA的单一条带。SYBR Green II的灵敏度明显强于溴化乙啶(EB)。标准琼脂糖迷你胶EB最低检出1.5ng单链核酸的单一条带(使用300nm透射光照射并用橙-红明胶滤光片拍照)。

SYBR Green II在变性琼脂糖/甲醛凝胶和聚丙烯酰胺/尿素凝胶中的检测灵敏度有点降低,然而仍优于EB。为了获得最大的检测灵敏度,琼脂糖/甲醛凝胶必须在EB染色前清洗数小时。相反,不做任何的清洗或脱色步骤,用SYBR Green II染色的琼脂糖/甲醛凝胶或聚丙烯酰胺/尿素凝胶能检测到1ng RNA单一条带(254nm反射照明)和4ng RNA单一条带(300nm透射照明)。SYBR Green II在RNA检测具备这一卓越灵敏度的特性归因于几个因素,包括优越的荧光量子产量、结合能力和荧光增强。

本品为溶于DMSO 的10,000×的SYBR Green II RNA核酸染料,可用于:1)Northern Blot、起始位点作图或cDNA制备前对RNA产物的小量分析;2)高分辨率变性梯度凝胶电泳(DGGE)后对5S rRNA迁移方式的观察;3)单链构象多态性(SSCP)中的DNA染色;4)PCR扩增前对DNA染色。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green II 对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。强烈建议处理DMO储存液需戴双层手套。和所有的核酸染料一样,含SYBR Green II RNA核酸染料的溶液需先穿过活性炭再丢弃。活性炭之后必须焚烧来破坏染料。

2)   SYBR Green II可通过乙醇沉淀法从核酸中去除。异丙醇沉淀法去除效果稍差些。正丁醇萃取、氯仿萃取和酚萃取法无法有效去除该染料。

3)   先用EB染色的凝胶可接下来用SYBR Green II染色,根据电泳后染色(post-staining)的标准步骤操作。与直接用SYBR Green II染色相比较可能灵敏度有些降低。

4)   不要在玻璃器皿中稀释SYBR Green II储存液,因其会结合到玻璃上。在聚丙烯器皿中稀释储存液。

5)   SYBR Green II不会干扰酶反应。

6)   当用SYBR Green II染Northern或Southern Blot凝胶,建议在预杂交液和杂交液内加入0.1%-0.3% SDS。

7)   不建议用254nm紫外透射仪对凝胶拍照,因紫外光源的轮廓会出现在照片上。需要使用允许525nm光透过且排斥其他波长光的滤光片。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

光谱特征

SYBR Green II RNA核酸染料可用常见的紫外反射和透射激发光源,以及手持式紫外灯检测。SYBR Green II的最大激发波长为497nm,但还有一个二级激发峰集中在254nm附近。与RNA结合的SYBR Green II的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green II适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后染色(后染,推荐)

1)在非变性凝胶或变性聚丙烯酰胺/尿素或琼脂/甲醛凝胶上进行电泳。

【注】:其他凝胶基质未做测试,不确定染色效果如何。

2)稀释SYBR Green II储存液:对于非变性凝胶和变性聚丙烯酰胺/尿素凝胶,建议用TBE做1:10,000倍

稀释;对于变性琼脂糖/甲醛凝胶,建议用TBE做1:5,000倍稀释。

【注】:SYBR Green II染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5-

8.0之间(pH8.0更佳)。

3)将凝胶小心的放入合适的容器中,比如聚丙烯容器。缓慢加入足量的SYBR Green II染色工作液浸没凝胶。用铝箔等盖住容器或将容器置于黑暗处使得染料避光。染色前没有必要洗掉凝胶上的尿素或甲醛。

4)室温轻摇凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的最佳染色时间通常为10-40min,琼脂糖凝胶的通常为20-40min。凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。不需要脱色。染色液需保存在暗处(最好是冷藏)和重复使用3-4次。

【注】:用缓冲液制备的染色液置于4℃避光能放置1周或更久,置于室温避光能放3-4天。用水制备的染色液比缓冲液制备的稳定性差很多,建议24h内用完保证最大灵敏度。另外,用缓冲液(pH>8.0或pH<7.5)的缓冲液制备的染色液稳定性差很多,染色效率也会降低。

2.电泳前染色(预染)

1)配制成SYBR Green II预制凝胶

临灌胶前,按照每100ml凝胶中加入3-5µl SYBR Green II储存液(10,000× in DMSO)的比例加量。需注意到SYBR Green II热稳定性较差,不能在过热胶溶液中直接添加,需要等溶液冷却至50℃左右才能加染料。摇晃,震荡或翻转以保证染料充分混匀。

2)按照常规方法进行电泳。

三、观察和凝胶成像

3.1 使用300nm紫外透射光或254nm紫外反射光(灵敏度更高)照射染色凝胶。

3.2 为了最佳灵敏度,建议使用黑白胶片,可用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S7569)拍照。许多其他的黄色或绿色明胶或玻璃纸滤光片也能用来拍照,但绝大多数可能会减低灵敏度。EB染色凝胶拍照用的橙-红滤光片不适合于SYBR Green II染色凝胶。

3.3 用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S-7569)和Polaroid 667黑白胶片对凝胶进行拍照。染色凝胶基本无背景荧光,当检测少量RNA,允许长期胶片曝光。对于300nm透射,通常F-stop设置4.5时曝光1-2s足够。对于254nm反射(特别是手持灯),大约需要曝光1-1.5min以得到最大灵敏度。

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名称 规格         
     SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料 100µl
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GoldView Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) 核酸染料(10,000×) 1ml
MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝胶染料(效果同GelRed) 500µl
MKGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝胶染料(效果同GelGreen)    500µl
Ethidium Bromide (EB)溴化乙锭(EB,粉末) 1g

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)


描述

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)

 

产品标签

SYBR Green I;Evagreen;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);qPCR;

产品信息

产品名称

产品编号 规格 价格(元) 促销价(元)

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)  

MF0759-100UL 100µl 780

700

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   MF0759-500UL 500µl 3100

2790

SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   MF0759-1ML 1ml 5400

4860

产品描述

SYBR Green I Nucleic Acid Stain是一种直接与dsDNA结合的荧光染料,是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料。定量PCR中,SYBR Green I与dsDNA非特异性结合发出荧光,通过检测反应体系中的荧光强度,进而达到检测PCR产物扩增量的目的。游离状态下SYBR Green I发出微弱荧光,一旦与dsDNA结合后,荧光强度增加1000倍,一个反应发出的荧光信号与dsDNA量成比例,且随扩增产物的增加而增加。因此,通过检测PCR反应液内的荧光信号强度,实现对目的基因的准确定量,同时还能测定扩增DNA片段的熔解温度。本品为10,000×的SYBR Green I核酸染料,达PCR级别。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

配置PCR反应混合液时,将10,000× SYBR Green I加入到PCR反应体系使其终浓度为0.5×(在0.2×~1×之间调整)。以上操作建议冰上进行。

【注意】:1)反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明;2)荧光定量扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明。

【影响荧光定量PCR的一些小细节】:

1) SYBR Green I使用浓度对荧光定量PCR的影响

合适的SYBR Green I使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I浓度过低使得荧光信号的变化降低,这意味着低拷贝样品可能无法检出;而浓度过高,可能会抑制PCR反应,降低PCR反应效率。因此,初次使用SYBR Green I需根据实际情况优化工作浓度,反应终浓度可在0.2×~1×之间调整。

2) 镁离子浓度对荧光定量PCR的影响

提高镁离子浓度能降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。建议用SYBR Green I进行荧光定量PCR反应时,镁离子浓度比不含SYBR Green I的普通PCR体系高出0.5~3mM。 

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产品编号 产品名称 规格
MF0751-100UL SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO)核酸凝胶染料 100µl
MF0752-100UL SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料 100µl
MF0753-1ML GoldView Nucleic Acid Gel Stain (10,000×)核酸染料(10,000×) 1ml
MF0759-100UL SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)   100µl
MF0761-500UL SYBR Safe DNA Gel Stain  (10,000× in DMSO)  核酸凝胶染料 500µl

 

 

 

SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

产品名称                                                                  

产品编号             规格                  

SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

MF0751-100UL 100µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-500UL 500µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-1ML 1ml

产品描述

SYBR Green I,是目前检测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA最灵敏的染料之一,最低检出限为20pg DNA(254nm紫外发射光),60pg DNA(300nm透射光);还可用于寡核苷酸检测(1-2ng,300nm透射光),比溴化乙锭EB的灵敏度高50-100倍。

SYBR Green I检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因其独特的染料特性:①SYBR Green I具有超强的DNA结合力,与DNA结合后荧光显著增强—至少比EB高出一个数量级;②DNA/SYBR Green I复合物的荧光量子产率(~0.8)比DNA/EB(~0.15)高5倍多;③SYBR Green I在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透,在缺乏DNA时背景荧光可忽略,让染色步骤快速,且成像之前无需脱色。

SYBR Green I因与DNA结合能力强,既能在电泳前(预染),也能在电泳后(后染)对DNA进行染色。还可对毛细管电泳分离的DNA进行染色。SYBR Green I与DNA的结合不会抑制多种常见的限制性内切酶活性,包括Hind III和EcoR I,可直接进行消化或连接。用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA后,还可直接将DNA转移到膜上,进行后续的核酸印迹杂交分析。

本品为溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,电泳级。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1. 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2. SYBR Green I对dsDNA的检测灵敏度非常高(20pg,254nm紫外发射光),但对ssDNA和RNA的灵敏度稍低(100-300pg,254nm紫外发射光),使之成为复杂溶液中检测dsDNA的理想选择。尤其是复杂溶液中的ssDNA和RNA可能会掩盖结果的时候,如凋亡特有的连续梯度条带apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激发波长为497nm,但在~290nm和~380nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green I适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

4. 预染色方法,电泳时间不要超过2h,否则SYBR Green I会从DNA上脱离出来,产生弥散状条带。

5. 紫外照射透视下,与dsDNA结合的SYBR Green I呈绿色荧光。如果胶中含ssDNA,则荧光颜色为橘黄色而不是绿色。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后的DNA染色(后染)

1)在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】:TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染色。

2)用TE、TAE或TBE缓冲液将SYBR Green I储存液进行1:10,000倍稀释。

【注】:

①SYBR Green I染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间(pH8.0更佳)。

②用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定,为确保最大的染色灵敏度,必须在24h内使用。此外,用pH低于7.5或高于8.0的缓冲液配制的染色液也不太稳定,染色效率有所下降。

3)染液要充分覆盖凝胶,室温轻摇孵育10-40min。

【注】:

①推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液,因染料会吸附到玻璃表面。

②染色过程避光进行,建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。

④无需脱色。

⑤染色液可置暗处(最好是冷藏)放置1周或更久,重复使用最多4次。

2.电泳前的DNA染色(预染)

1)配制成SYBR Green I预制凝胶

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中,预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。电泳结束后即可在适合的凝胶成像仪下检测。【预染推荐用此法】

预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限(大约为30-40pg/条带),可能略高于电泳后染色(<20pg/条带)。此外,在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2)作为DNA模板预染标记

一般而言,DNA在电泳前与染料工作液(1:10,000倍稀释)至少孵育15min。

三、凝胶成像(紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射)

可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、从dsDNA中去除SYBR Green I

使用简单的乙醇沉淀能从dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl,加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20min,4℃离心至少10min。去除乙醇,并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发,并用TE重悬双链DNA。

SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

产品信息

产品名称                                                                  

产品编号             规格                  

SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

MF0751-100UL 100µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-500UL 500µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-1ML 1ml

产品描述

SYBR Green I,是目前检测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA最灵敏的染料之一,最低检出限为20pg DNA(254nm紫外发射光),60pg DNA(300nm透射光);还可用于寡核苷酸检测(1-2ng,300nm透射光),比溴化乙锭EB的灵敏度高50-100倍。

SYBR Green I检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因其独特的染料特性:①SYBR Green I具有超强的DNA结合力,与DNA结合后荧光显著增强—至少比EB高出一个数量级;②DNA/SYBR Green I复合物的荧光量子产率(~0.8)比DNA/EB(~0.15)高5倍多;③SYBR Green I在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透,在缺乏DNA时背景荧光可忽略,让染色步骤快速,且成像之前无需脱色。

SYBR Green I因与DNA结合能力强,既能在电泳前(预染),也能在电泳后(后染)对DNA进行染色。还可对毛细管电泳分离的DNA进行染色。SYBR Green I与DNA的结合不会抑制多种常见的限制性内切酶活性,包括Hind III和EcoR I,可直接进行消化或连接。用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA后,还可直接将DNA转移到膜上,进行后续的核酸印迹杂交分析。

本品为溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,电泳级。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1. 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2. SYBR Green I对dsDNA的检测灵敏度非常高(20pg,254nm紫外发射光),但对ssDNA和RNA的灵敏度稍低(100-300pg,254nm紫外发射光),使之成为复杂溶液中检测dsDNA的理想选择。尤其是复杂溶液中的ssDNA和RNA可能会掩盖结果的时候,如凋亡特有的连续梯度条带apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激发波长为497nm,但在~290nm和~380nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green I适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

4. 预染色方法,电泳时间不要超过2h,否则SYBR Green I会从DNA上脱离出来,产生弥散状条带。

5. 紫外照射透视下,与dsDNA结合的SYBR Green I呈绿色荧光。如果胶中含ssDNA,则荧光颜色为橘黄色而不是绿色。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后的DNA染色(后染)

1)在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】:TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染色。

2)用TE、TAE或TBE缓冲液将SYBR Green I储存液进行1:10,000倍稀释。

【注】:

①SYBR Green I染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间(pH8.0更佳)。

②用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定,为确保最大的染色灵敏度,必须在24h内使用。此外,用pH低于7.5或高于8.0的缓冲液配制的染色液也不太稳定,染色效率有所下降。

3)染液要充分覆盖凝胶,室温轻摇孵育10-40min。

【注】:

①推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液,因染料会吸附到玻璃表面。

②染色过程避光进行,建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。

④无需脱色。

⑤染色液可置暗处(最好是冷藏)放置1周或更久,重复使用最多4次。

2.电泳前的DNA染色(预染)

1)配制成SYBR Green I预制凝胶

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中,预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。电泳结束后即可在适合的凝胶成像仪下检测。【预染推荐用此法】

预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限(大约为30-40pg/条带),可能略高于电泳后染色(<20pg/条带)。此外,在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2)作为DNA模板预染标记

一般而言,DNA在电泳前与染料工作液(1:10,000倍稀释)至少孵育15min。

三、凝胶成像(紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射)

可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、从dsDNA中去除SYBR Green I

使用简单的乙醇沉淀能从dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl,加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20min,4℃离心至少10min。去除乙醇,并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发,并用TE重悬双链DNA。

SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

产品信息

产品名称                                                                  

产品编号             规格            

SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

MF0751-100UL 100µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-500UL 500µl
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-1ML 1ml

产品描述

SYBR Green I,是目前检测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA最灵敏的染料之一,最低检出限为20pg DNA(254nm紫外发射光),60pg DNA(300nm透射光);还可用于寡核苷酸检测(1-2ng,300nm透射光),比溴化乙锭EB的灵敏度高50-100倍。

SYBR Green I检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因其独特的染料特性:①SYBR Green I具有超强的DNA结合力,与DNA结合后荧光显著增强—至少比EB高出一个数量级;②DNA/SYBR Green I复合物的荧光量子产率(~0.8)比DNA/EB(~0.15)高5倍多;③SYBR Green I在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透,在缺乏DNA时背景荧光可忽略,让染色步骤快速,且成像之前无需脱色。

SYBR Green I因与DNA结合能力强,既能在电泳前(预染),也能在电泳后(后染)对DNA进行染色。还可对毛细管电泳分离的DNA进行染色。SYBR Green I与DNA的结合不会抑制多种常见的限制性内切酶活性,包括Hind III和EcoR I,可直接进行消化或连接。用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA后,还可直接将DNA转移到膜上,进行后续的核酸印迹杂交分析。

本品为溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,电泳级。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1. 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2. SYBR Green I对dsDNA的检测灵敏度非常高(20pg,254nm紫外发射光),但对ssDNA和RNA的灵敏度稍低(100-300pg,254nm紫外发射光),使之成为复杂溶液中检测dsDNA的理想选择。尤其是复杂溶液中的ssDNA和RNA可能会掩盖结果的时候,如凋亡特有的连续梯度条带apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激发波长为497nm,但在~290nm和~380nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green I适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

4. 预染色方法,电泳时间不要超过2h,否则SYBR Green I会从DNA上脱离出来,产生弥散状条带。

5. 紫外照射透视下,与dsDNA结合的SYBR Green I呈绿色荧光。如果胶中含ssDNA,则荧光颜色为橘黄色而不是绿色。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后的DNA染色(后染)

1)在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】:TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染色。

2)用TE、TAE或TBE缓冲液将SYBR Green I储存液进行1:10,000倍稀释。

【注】:

①SYBR Green I染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间(pH8.0更佳)。

②用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定,为确保最大的染色灵敏度,必须在24h内使用。此外,用pH低于7.5或高于8.0的缓冲液配制的染色液也不太稳定,染色效率有所下降。

3)染液要充分覆盖凝胶,室温轻摇孵育10-40min。

【注】:

①推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液,因染料会吸附到玻璃表面。

②染色过程避光进行,建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。

④无需脱色。

⑤染色液可置暗处(最好是冷藏)放置1周或更久,重复使用最多4次。

2.电泳前的DNA染色(预染)

1)配制成SYBR Green I预制凝胶

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中,预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。电泳结束后即可在适合的凝胶成像仪下检测。【预染推荐用此法】

预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限(大约为30-40pg/条带),可能略高于电泳后染色(<20pg/条带)。此外,在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2)作为DNA模板预染标记

一般而言,DNA在电泳前与染料工作液(1:10,000倍稀释)至少孵育15min。

三、凝胶成像(紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射)

可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、从dsDNA中去除SYBR Green I

使用简单的乙醇沉淀能从dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl,加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20min,4℃离心至少10min。去除乙醇,并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发,并用TE重悬双链DNA。