产品名称 |
|
规格 |
|
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 |
|
1kit (30~50 gels) |
|
产品描述
金畔生物的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(SDS-PAGE Gel Preparation Kit)提供了SDS-PAGE凝胶配制所需的各种试剂,用户只需准备制胶器具和蒸馏水,即可配制PAGE胶(聚丙烯酰胺凝胶)。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,还可用于配制Native PAGE凝胶。
本试剂盒约能配制30-50块常规大小的PAGE胶,具体配制的量需根据器具大小来决定。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
组分规格 |
保存方法 |
MP2019-A |
30% Acr-Bis (29:1) |
100ml |
4℃避光 |
MP2019-B |
1.5M Tris-HCl, pH8.8 |
100ml |
室温 |
MP2019-C |
10% SDS |
5ml |
室温 |
MP2019-D |
Ammonium persulfate (APS) |
0.5g |
室温 |
MP2019-E |
TEMED |
2×1ml |
4℃避光 |
MP2019-F |
1M Tris-HCl, pH6.8 |
15ml |
室温 |
保存与运输方法
保存:4℃~室温避光保存,各组分保存详见瓶子标签。1年稳定。
运输:室温运输。
注意事项
1) 过硫酸铵(Ammonium persulfate, APS)配制成10%溶液后,应分装成小份-20℃保存,通常6个月有效。同时尽量减少室温存放时间,防止失效。
2) TEMED容易挥发,使用后请务必拧紧瓶盖。另外,凝胶凝聚的速度与温度和光照关系密切,可适当调节TEMED的用量,控制不同室内环境下凝胶凝聚的速度。
3) TEMED易燃,具腐蚀性,请小心操作,并且注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
4) 配制PAGE胶的过程中,如果室温较低,可以置于37℃加速凝固。
5) 30% Acr-Bis (29:1)具轻微神经毒性,请小心操作,并且注意有效防护以避免直接接触人体。
6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
1) 配制10% APS溶液:直接往0.5g Ammonium persulfate (APS)中加入5ml蒸馏水,充分溶解,分装成小份保存在-20℃,通常6个月内有效。
2) 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围(表1)。
表1 不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
|
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
6% |
50-150 kD |
8% |
30-90 kD |
10% |
20-80 kD |
12% |
12-60 kD |
15% |
10-40 kD |
15% |
10-40 kD |
3) 根据表2配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶。若配制非变性胶,参考下述配方不加10% SDS即可。
表2 配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶
|
分离胶浓度 |
凝胶体积(ml) |
所需各组分体积(单位:ml) |
蒸馏水 |
30% Acr-Bis |
1.5M Tris, pH8.8 |
10% SDS |
10% APS |
TEMED |
6% |
5 |
2.6 |
1.0 |
1.3 |
0.05 |
0.05 |
0.004 |
10 |
5.3 |
2.0 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
0.008 |
15 |
7.9 |
3.0 |
3.8 |
0.15 |
0.15 |
0.012 |
20 |
10.6 |
4.0 |
5.0 |
0.2 |
0.2 |
0.016 |
30 |
15.9 |
6.0 |
7.5 |
0.3 |
0.3 |
0.024 |
50 |
26.5 |
10.0 |
12.5 |
0.5 |
0.5 |
0.04 |
8% |
5 |
2.3 |
1.3 |
1.3 |
0.05 |
0.05 |
0.003 |
10 |
4.6 |
2.7 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
0.006 |
15 |
6.9 |
4.0 |
3.8 |
0.15 |
0.15 |
0.009 |
20 |
9.3 |
5.3 |
5.0 |
0.2 |
0.2 |
0.012 |
30 |
13.9 |
8.0 |
7.5 |
0.3 |
0.3 |
0.018 |
50 |
23.2 |
13.3 |
12.5 |
0.5 |
0.5 |
0.03 |
10% |
5 |
1.9 |
1.7 |
1.3 |
0.05 |
0.05 |
0.002 |
10 |
4.0 |
3.3 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
0.004 |
15 |
5.9 |
5.0 |
3.8 |
0.15 |
0.15 |
0.006 |
20 |
7.9 |
6.7 |
5.0 |
0.2 |
0.2 |
0.008 |
30 |
11.9 |
10.0 |
7.5 |
0.3 |
0.3 |
0.012 |
50 |
19.8 |
16.7 |
12.5 |
0.5 |
0.5 |
0.02 |
12% |
5 |
1.6 |
2.0 |
1.3 |
0.05 |
0.05 |
0.002 |
10 |
3.3 |
4.0 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
0.004 |
15 |
4.9 |
6.0 |
3.8 |
0.15 |
0.15 |
0.006 |
20 |
6.6 |
8.0 |
5.0 |
0.2 |
0.2 |
0.008 |
30 |
9.9 |
12.0 |
7.5 |
0.3 |
0.3 |
0.012 |
50 |
16.5 |
20.0 |
12.5 |
0.5 |
0.5 |
0.02 |
15% |
5 |
1.1 |
2.5 |
1.3 |
0.05 |
0.05 |
0.002 |
10 |
2.3 |
5.0 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
0.004 |
15 |
3.4 |
7.5 |
3.8 |
0.15 |
0.15 |
0.006 |
20 |
4.6 |
10.0 |
5.0 |
0.2 |
0.2 |
0.008 |
30 |
6.9 |
15.0 |
7.5 |
0.3 |
0.3 |
0.012 |
50 |
11.5 |
25.0 |
12.5 |
0.5 |
0.5 |
0.02 |
4) 根据表3配制5% SDS-PAGE浓缩胶(也称为上层胶)。
表3 配制5% SDS-PAGE浓缩胶
|
分离胶浓度 |
凝胶体积(ml) |
所需各组分体积(单位:ml) |
蒸馏水 |
30% Acr-Bis |
1M Tris, pH6.8 |
10% SDS |
10% APS |
TEMED |
5% |
2 |
1.4 |
0.33 |
0.25 |
0.02 |
0.02 |
0.002 |
3 |
2.1 |
0.5 |
0.38 |
0.03 |
0.03 |
0.003 |
4 |
2.7 |
0.67 |
0.5 |
0.04 |
0.04 |
0.004 |
6 |
4.1 |
1.0 |
0.75 |
0.06 |
0.06 |
0.006 |
8 |
5.5 |
1.3 |
1.0 |
0.08 |
0.08 |
0.008 |
10 |
6.8 |
1.7 |
1.25 |
0.1 |
0.1 |
0.01 |
5) 电泳:静置,等凝胶聚合后,小心拔出梳子,避免破坏加样孔。加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液(含15-20%
甲醇)。将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合,煮沸5-10min后加入样品孔。将电泳槽置于4℃或冰水浴中电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
相关产品
|
名称 |
规格 |
|
30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺,29:1 |
500ml |
|
30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺,37.5:1 |
500ml |
|
40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺,29:1 |
500ml |
|
40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺,37.5:1 |
500ml |
|
4×Tris-HCl (1.5 M Tris-HCl), pH8.8 |
250ml |
|
4×Tris-HCl (0.5 M Tris-HCl), pH6.8 |
250ml |
|
4×Tris-HCl/SDS (1.5 M Tris-HCl/SDS), pH8.8 |
250ml |
|
4×Tris-HCl/SDS (0.5 M Tris-HCl/SDS), pH6.8 |
250ml |
|
4×Tris-HCl/SDS (0.5 M Tris-HCl/SDS), pH6.8 |
250ml |
|
SDS-PAGE Gel Preparation Kit SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 |
1kit |
|
5×SDS-PAGE Protein Loading Buffer 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 |
2ml |
|
5×SDS-PAGE Protein Loading Buffer 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 |
10×2ml |
|
5×SDS-PAGE Protein Loading Buffer 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 |
2×10ml |
|
10% SDS十二烷基硫酸钠溶液(10%) |
100ml |
|
TEMED四甲基二乙胺 |
100ml |
|
Ammonium Persulfate (APS)过硫酸铵 |
25g |