Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

EPI400;EC100;CopyCutter Induction Solution;toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA;Epicentre;

货号 产品名称 规格
MF2486-1000UL   Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell     10×100μl   
MF2486-5000UL Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2486-1000UL    MF2486-5000UL   
MF2486-A   Rosetta 2(DE3) Competent Cell   10×100μl 50×100μl
MF2486-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余培养基(液)都应含氯霉素(34μg/ml),以防质粒丢失。
  6. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化后,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用移液枪吹打),冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

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菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余培养基(液)都应含氯霉素(34μg/ml),以防质粒丢失。
  6. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化后,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用移液枪吹打),冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Rosetta-gami;Rosetta (DE3);Origami;表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;毒性蛋白表达;

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菌株描述

Rosetta-gami菌株为Origami衍生菌,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。该菌株补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素,氯霉素,链霉素和四环素抗性,为亮氨酸生长缺陷型菌株。

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+lacIqpro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输方法

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素之外,其他所用培养基、培养液都应含有氯霉素(34μg/ml),以防止质粒丢失。

7)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Rosetta-gami;Rosetta (DE3);Origami;表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;毒性蛋白表达

货号 产品名称 规格
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菌株描述

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DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素,氯霉素,链霉素和四环素抗性,为亮氨酸生长缺陷型菌株。

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+lacIqpro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

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本品是大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输方法

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

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6)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素之外,其他所用培养基、培养液都应含有氯霉素(34μg/ml),以防止质粒丢失。

7)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2341-1000UL Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞    10×100μl
MF2339-1000UL Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2340-1000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2334-1000UL BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 25g
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Rosetta-gami B(DE3);BL21(DE3);TunerTM;Origami;Rosetta;

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MF2340-1000UL

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl

MF2340-5000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

菌株描述

Rosetta-gami B菌株融合了BL21(及其TunerTM衍生菌)、Origami和Rosetta这几大菌株的关键特征,不仅增强真核蛋白的表达,而且促进细菌细胞质内目的蛋白二硫键的形成。

→lacY1赋予其TunerTM菌的特征,半乳糖苷透过酶(lacY)突变使得IPTG均一化进入群体内的所有细胞,产生浓度依赖和匀质化的诱导水平。

→pRARE赋予其Rosetta菌的特征,补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

→gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌的特征,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta-gami B(DE3)菌株具有卡那霉素,氯霉素,和四环素抗性。兼容于具氨苄或壮观霉素抗性的载体。

Rosetta-gami B(DE3)菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)

产品包装

组分编号

组分名 货号(规格)
MF2340-1000UL MF2340-5000UL
MF2340-A Rosetta-gami B(DE3)Competent Cell 10×100μl

50×100μl

MF2340-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl

10μl

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞,插入冰内8min内加入目的DNA,不可在冰上放置过长,否则转化效率会降低。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低

6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

7) 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间、温度、IPTG浓度(0.1~2mM)都需进行优化。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
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MF2340-1000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2334-1000UL BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 Rosetta-gami B菌株融合了BL21

Rosetta-gami B(DE3);BL21(DE3);TunerTM;Origami;Rosetta;

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MF2340-1000UL

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl

MF2340-5000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

菌株描述

Rosetta-gami B菌株融合了BL21(及其TunerTM衍生菌)、Origami和Rosetta这几大菌株的关键特征,不仅增强真核蛋白的表达,而且促进细菌细胞质内目的蛋白二硫键的形成。

→lacY1赋予其TunerTM菌的特征,半乳糖苷透过酶(lacY)突变使得IPTG均一化进入群体内的所有细胞,产生浓度依赖和匀质化的诱导水平。

→pRARE赋予其Rosetta菌的特征,补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

→gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌的特征,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta-gami B(DE3)菌株具有卡那霉素,氯霉素,和四环素抗性。兼容于具氨苄或壮观霉素抗性的载体。

Rosetta-gami B(DE3)菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)

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组分名 货号(规格)
MF2340-1000UL MF2340-5000UL
MF2340-A Rosetta-gami B(DE3)Competent Cell 10×100μl

50×100μl

MF2340-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl

10μl

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保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞,插入冰内8min内加入目的DNA,不可在冰上放置过长,否则转化效率会降低。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低

6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

7) 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间、温度、IPTG浓度(0.1~2mM)都需进行优化。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
MF2331-1000UL BL21 (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
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MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

Rosetta (DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Rosetta (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;

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货号 产品名称 规格    
MF2333-1000UL     Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    10×100μl        
MF2333-5000UL Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号           组分名称

货号(规格)

MF2333-1000UL        MF2333-5000UL      
MF2333-A Rosetta (DE3) Competent Cell            10×100μl 50×100μl
MF2333-B Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充6种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGG, AGA, AUA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上,正因如此,Rosetta菌株提供“通用型”的翻译特征,而不限于大肠杆菌可利用的密码子。tRNA基因由天然启动子所启动。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

Rosetta (DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pRARE(CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2)   待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴静置30min。

3)   42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)   向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,150 rpm振荡培养45min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)   根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2333-1000UL Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2334-1000UL BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞    10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 25g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

表达感受态细胞、pET表达载体、Rosetta (DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Rosetta (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;

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MF2333-1000UL     Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    10×100μl        
MF2333-5000UL Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号           组分名称

货号(规格)

MF2333-1000UL        MF2333-5000UL      
MF2333-A Rosetta (DE3) Competent Cell            10×100μl 50×100μl
MF2333-B Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充6种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGG, AGA, AUA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上,正因如此,Rosetta菌株提供“通用型”的翻译特征,而不限于大肠杆菌可利用的密码子。tRNA基因由天然启动子所启动。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

Rosetta (DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pRARE(CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2)   待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴静置30min。

3)   42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)   向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,150 rpm振荡培养45min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)   根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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