EPI400;EC100;CopyCutter Induction Solution;toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA;Epicentre;
货号 | 产品名称 | 规格 | |
MF2486-1000UL | Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell | 10×100μl | |
MF2486-5000UL | Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell | 50×100μl |
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 货号(规格) | |
MF2486-1000UL | MF2486-5000UL | ||
MF2486-A | Rosetta 2(DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2486-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。
DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。
Rosetta 2(DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)
产品描述
本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件
保存:-80℃保存,6个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
- 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
- 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
- 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
- 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
- Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余培养基(液)都应含氯霉素(34μg/ml),以防质粒丢失。
- 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。
- 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
- 将感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化后,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用移液枪吹打),冰浴静置25min。
- 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
- 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
- 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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