Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method) 碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP或AP)是一类磷酸酯酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化,广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)(Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method))利用的是金属沉淀法来定性检测磷酸酶活性。检测原理是以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物,经碱性磷酸酶水解释放出磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。

产品组成

组分编号             组分名称            产品货号(规格) 保存方式            
MP7504-100ML       MP7504-200ML     
MP7504-A ALP染色液 50ml×1 100ml×1 2-8℃避光保存
MP7504-B 硝酸钴染液 50ml×1 100ml×1 RT避光保存
MP7504-C ALP硫化液 1ml×2 1ml×3 RT避光保存
MP7504-D ALP对照液 10ml×1 20ml×1 2-8℃避光保存

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,6个月稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   ALP染色液、ALP硫化液容易失效,建议开封后根据小份保存,避免重复性开盖使用,影响性能。

2)   ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,操作需小心。

3)   样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。

4)   组织固定需在4℃进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

5)   组织在石蜡包埋时,温度不要超过56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸染,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

6)   石蜡切片脱蜡所用的二甲苯需用AR级以上的,不纯的二甲苯会分解黑色沉淀。

7)   冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

实验前准备材料:蒸馏水,温箱或水浴锅

一、 石蜡切片染色

1.1    石蜡切片脱蜡至蒸馏水;

1.2   切片入ALP染色液,37℃孵育2~12h;

【注意:若需要做阴性对照,可选一切片入ALP对照液,该对照液不含酶的反应底物。】

1.3    流动水清洗2min,入蒸馏水;

1.4    入硝酸钴染液,37℃孵育5min;

1.5    流水洗5min,入蒸馏水;

1.6    准备ALP硫化工作液:取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍,混匀即得到硫化工作液,现配现用。切片放入硫化工作液,孵育1-2min;

1.7    流水洗10min,入蒸馏水;

1.8    (可选)核固红复染细胞核,用蒸馏水洗;

1.9    石蜡切片常规脱水、透明、中性树胶封片。

二、 冰冻切片染色

2.1 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内,4℃固定2-5min;

2.2  切片入ALP染色液,37℃孵育5-15min;

【注意:若需要做阴性对照,可选一切片入ALP对照液,该对照液不含酶的反应底物。】

2.3 流水洗2min,入蒸馏水;

2.4 入硝酸钴染液,37℃孵育5min;

2.5 流水洗5min,入蒸馏水;

2.6 准备ALP硫化工作液:取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍,混匀即得到硫化工作液,现配现用。切片放入硫化工作液,孵育1-2min;

2.7    流水洗10min,入蒸馏水;

2.8    (可选)核固红复染细胞核,用蒸馏水洗;

2.9    冰冻切片用甘油明胶封片剂封片。

三、 染色结果

阳性部位                黑色硫化钴沉淀          
细胞核 红色(核固红)

相关产品

名称 规格
Alkaline Phosphatase from E.Coli 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌 10mg             
Alkaline Phosphatase (Ammonium sulfate suspension) from Calf Intestine   

, Conjugation Grade  小牛肠碱性磷酸酶(硫酸铵悬浮液)

5KU
Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)

碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

100T
Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml
Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml
Neutral Balsam Mounting Medium 中性树胶封片剂 100ml
   4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

Alkaline Phosphatase from Calf Intestine, Molecular Biology Grade 小牛肠碱性磷酸酶(分子生物学级)

  产品名称      规格   
  Alkaline Phosphatase from Calf Intestine,   Molecular Biology Grade 小牛肠碱性磷酸酶(分   子生物学级别)      1KU   

品内容

组分 名称 规格 储存条件
MP0109-A 碱性磷酸酶(30 U/μl) 1000U -20℃保存
MP0109-B 10× 碱性磷酸酶缓冲液 1ml -20℃保存

产品描述

碱性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP,EC 3.1.3.1),是一种含两个相同亚基的二聚体,也是一种约含12%碳水化合物(6%己糖和6%其他中性糖)的糖蛋白,每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。镁离子存在情况下,ALP可达到最高酶活。AP能催化磷酸单酯水解,比如对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

碱性磷酸酶(ALP)常用来偶联抗体和其他蛋白,从而满足ELISA、WB和组织化学检测上的应用。通常用来蛋白的去磷酸化实验,比如酪蛋白和核酸等。当需要高检测灵敏度时也能用来蛋白标记。还可用在DNA或RNA 的5′-末端去磷酸以防止自连。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后,DNA 或 RNA 还可被放射性标记磷酸盐标记(通过 T4 多核苷酸激酶)。

本品来源于小牛肠(Calf Intestine),与大肠杆菌来源的酶相同,催化所有磷酸单酯的水解,不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。达分子生物学级别,适用于去除载体DNA片段的5′-末端的磷酸基团。

活性定义

在37℃,pH9.8反应条件,每min内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenyl phosphate,pNPP) 生成1 μmol对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

  1. 本品最佳pH 8-10,最佳酶活受底物类型、底物浓度和离子浓度影响。本品正常保存稳定性很高,在螯合剂存在条件下,经65℃,30min加热处理,99%活性不可逆失活(反应条件不同可能会有例外)。建议失活处理时使用苯酚,可使其完全失活。
  2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

Alkaline Phosphatase (Ammonium sulfate suspension) from Calf Intestine, Conjugation Grade 小牛肠碱性磷酸酶(硫酸铵悬浮液)

  产品名称      规格   

  Alkaline Phosphatase from Calf Intestine,   Conjugation Grade  小牛肠碱 性磷酸酶(偶联级别)   

       5KU    

产品描述

碱性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP,EC 3.1.3.1),是一种含两个相同亚基的二聚体,也是一种约含12%碳水化合物(6%己糖和6%其他中性糖)的糖蛋白,每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。镁离子存在情况下,ALP可达到最高酶活。AP能催化磷酸单酯水解,比如对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

碱性磷酸酶(ALP)常用来偶联抗体和其他蛋白,从而满足ELISA、WB和组织化学检测上的应用。通常用来蛋白的去磷酸化实验,比如酪蛋白和核酸等。当需要高检测灵敏度时也能用来蛋白标记。还可用在DNA或RNA 的5′-末端去磷酸以防止自连。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后,DNA 或 RNA 还可被放射性标记磷酸盐标记(通过 T4 多核苷酸激酶)。

本品来源于小牛肠(Calf Intestine),以硫酸铵悬液形式提供,比活力~4500U/mg protein,达偶联级别。

产品特性

1)CAS NO:9001-78-9

2)英文同义名:Phosphatase, Alkaline; Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum); Phosphomonoesterase; Alkaline Phosphomonoesterase;

3)中文同义名:磷酸酶(碱性);碱性磷酸单酯酶;大肠杆菌来源碱性磷酸酶;碱性磷酸酶(大肠杆菌)

4)外观:硫酸铵悬液

5)比活力:3000-6000 units/mg protein

6)活性单位定义:在37℃,pH9.8反应条件,每min内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenyl phosphate,pNPP) 生成1 μmol对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

保存与运输方法

保存:2-8℃冻存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

  1. 本品最佳pH 8-10,最佳酶活受底物类型、底物浓度和离子浓度影响。本品正常保存稳定性很高,在螯合剂存在条件下,经65℃,30min加热处理,99%活性不可逆失活(反应条件不同可能会有例外)。建议失活处理时使用苯酚,可使其完全失活。
  2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

Alkaline Phosphatase from E.Coli 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌

 产品名称    规格  

 Alkaline Phosphatase from E. Coli 

 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌

   10mg

碱性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP,EC 3.1.3.1),是一种含两个相同亚基的二聚体,也是一种约含12%碳水化合物(6%己糖和6%其他中性糖)的糖蛋白,每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。镁离子存在情况下,ALP可达到最高酶活。AP能催化磷酸单酯水解,比如对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

碱性磷酸酶(ALP)常用来偶联抗体和其他蛋白,从而满足ELISA、WB和组织化学检测上的应用。通常用来蛋白的去磷酸化实验,比如酪蛋白和核酸等。当需要高检测灵敏度时也能用来蛋白标记。还可用在DNA或RNA 的5′-末端去磷酸以防止自连。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后,DNA 或 RNA 还可被放射性标记磷酸盐标记(通过 T4 多核苷酸激酶)。

本品为大肠杆菌重组表达纯化所得,以硫酸铵悬液形式提供,比活力≥10U/mg protein。

产品特性

1)CAS NO:9001-78-9

2)英文同义名:Phosphatase, Alkaline; Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum); Phosphomonoesterase; Alkaline Phosphomonoesterase;

3)中文同义名:磷酸酶(碱性);碱性磷酸单酯酶;大肠杆菌来源碱性磷酸酶;碱性磷酸酶(大肠杆菌)

4)来源:大肠杆菌(E. Coli)

5)纯化方式:盐分馏(Partially purified salt fraction)

6)外观:2.5M硫酸铵悬液,pH 8.0

7)抑制剂:螯合剂和无机磷酸盐

8)最佳pH:8.0

8)比活力:≥10 units/mg protein (25℃, pH 8.0)

9)活性单位定义:在25℃,pH8.0反应条件,每min内水解对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生成1 μmol对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定义为1个活性单位(unit)。 

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)本品稳定性高,反应需Zn2+,Mg2+可提高酶活。在螯合剂存在条件下,100℃加热可导致酶暂时性失活,但恢复至室温酶活会恢复,必须进行苯酚处理,才能引起酶完全失活。本品最适pH约8.0,Tris等醇类化合物可提高酶活。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1 纯化酶产品(硫酸铵悬浮液形式)使用指导

1)当硫酸铵可能会干扰酶反应,操作如下:

1.1 从冰箱内取出酶。【注:硫酸铵悬浮液产品不可冻存!!】

1.2 确保盖子拧紧,然后颠倒混匀数次得到乳白色悬浮液,此过程可能需要一分钟左右。不可涡旋或超声,因如此强烈的处理可能会引起某些酶的变性。

1.3 使用宽口枪头,吸取一部分悬浮液转移到一干净的离心管内。

1.4 约10,000~15,000x g离心10min。若是条件允许,低温(2-8℃)设置下离心。

1.5 小心吸取尽可能透明的上清液,并保留到一干净的离心管内。没有必要完全吸掉所有的硫酸铵溶液。

1.6 用适量的反应缓冲液加入沉淀中并使其溶解。

1.7 对上述得到的上清液,以及用反应缓冲液溶解的酶溶液进行蛋白含量和/或酶活力检测。

【注:具体酶的活力检测方法可见我司官网或与我们联系索取相关资料。】

2)当硫酸铵不会干扰酶反应,操作如下:

2.1 从冰箱内取出酶。【注:硫酸铵悬浮液产品不可冻存!!】

2.2 确保盖子拧紧,然后颠倒混匀数次得到乳白色悬浮液,此过程可能需要一分钟左右。不可涡旋或超声,因如此强烈的处理可能会引起某些酶的变性。

2.3 使用宽口枪头,吸取一部分悬浮液直接加入反应缓冲液中即可。

【注意:对于硫酸铵悬浮液,绝大部分的酶都是以固体形式存在。很有可能仅仅可忽略量的酶以溶于硫酸铵溶液的形式存在。】

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒


描述

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

 

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒      

MP7508-30ML      3×10ml          1262
Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

MP7508-60ML 3×20ml 1862

 

产品描述

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一类磷酸酯酶,在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中分子量从18kD到100kD不等。ACP主要分为两类,一类为抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一类为抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)。 

TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(Osteoclast)和破软骨细胞(Chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的TRAP均在细胞滤泡中,并非释放到血液中。血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞,因此,测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。TRAP在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧产生和铁离子转运等有关。 

本抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI为底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞胞浆中。若细胞内ACP含抗酒石酸活性,则呈阳性反应。本品可用于新鲜血涂片、细胞涂片和冰冻切片染色。

 

产品组成

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式
MP7508-30ML MP7508-60ML
MP7508-A TRAP固定液 25ml×1 50ml×1 2-8℃避光保存
MP7508-B1 AS-BI缓冲液 0.5ml×2 0.5ml×4 -20℃避光保存
MP7508-B2 GBC染色液 0.1ml×1 0.2ml×1 2-8℃避光保存
MP7508-B3 TRAP缓冲液 9ml×1 18ml×1 RT避光保存
于正式实验前,将MP7508-B1:B2:B3按照10:1:90混合,即得到TRAP染色液,需按量现配现用。
MP7508-C 苏木素染色液 10ml×1 20ml×1 RT避光保存

 

保存与运输方法

保存:-20℃~RT保存,各组分保存详见标签,12个月稳定。

运输:冰袋运输。

 

注意事项

1) TRAP染色液易失效,请务必现配现用。

2) GBC染色液请不要置于-20℃冻存,需2-8℃避光保存。

3) 样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。

4) 对于冰冻切片染色,应尽量减少切片在室温暴露的时间。

5) 对于血液涂片,推荐皮肤穿刺血涂片,晾干后及时染色

6) 本品不建议用于石蜡切片染色。

7) 组织固定需在4℃冰箱进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

操作步骤 

实验前准备材料:蒸馏水,恒温箱,载玻片,光学显微镜 

一、 血液、细胞涂片

1.1 推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载玻片上,推玻片与载玻片保持30°,置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前方滑动置铺满血膜为止。

1.2 自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s~3min,多数情况1min内即可。

1.3 水洗、稍微晾干(不易过分干燥)。

1.4 切片入现配的TRAP染色液,置于37℃温箱,避光浸染45~60min,水洗。

1.5 复染:用苏木素染色液复染3~5min。

1.6 水洗、晾干、镜检。

 

二、 冰冻切片染色 

2.1 冰冻切片回温至37℃,水中浸泡1~2min。

2.2 自然晾干,TRAP固定液4℃固定1~3min

2.3 水洗、稍微晾干(不易过分干燥)。

2.4 切片入现配的TRAP染色液,置于37℃温箱,避光浸染45~60min,水洗。

2.5 复染:用苏木素染色液复染5~8min。

2.6 水洗、晾干、镜检。

 

三、 染色结果

阳性部位(酶活性部位)                             紫红色                                                  
细胞核 蓝色

 

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货号 名称 规格
MP7501-100T 碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法) 100T
MP7502-120T 抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒(显色法)                      120T
MP7504-100ML                    碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法) 2×50ml                             
MP7505-30ML 碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 3×10ml
MP7508-30ML 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒 3×10ml
MM1503-100ML Neutral Balsam Mounting Medium中性树胶封片剂 100ml
MM1504-100ML 4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

 

 

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒


描述

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

 

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒      

MP7508-30ML      3×10ml          1262
Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

MP7508-60ML 3×20ml 1862

 

产品描述

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一类磷酸酯酶,在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中分子量从18kD到100kD不等。ACP主要分为两类,一类为抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一类为抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)。 

TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(Osteoclast)和破软骨细胞(Chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的TRAP均在细胞滤泡中,并非释放到血液中。血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞,因此,测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。TRAP在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧产生和铁离子转运等有关。 

本抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI为底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞胞浆中。若细胞内ACP含抗酒石酸活性,则呈阳性反应。本品可用于新鲜血涂片、细胞涂片和冰冻切片染色。

 

产品组成

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式
MP7508-30ML MP7508-60ML
MP7508-A TRAP固定液 25ml×1 50ml×1 2-8℃避光保存
MP7508-B1 AS-BI缓冲液 0.5ml×2 0.5ml×4 -20℃避光保存
MP7508-B2 GBC染色液 0.1ml×1 0.2ml×1 2-8℃避光保存
MP7508-B3 TRAP缓冲液 9ml×1 18ml×1 RT避光保存
于正式实验前,将MP7508-B1:B2:B3按照10:1:90混合,即得到TRAP染色液,需按量现配现用。
MP7508-C 苏木素染色液 10ml×1 20ml×1 RT避光保存

 

保存与运输方法

保存:-20℃~RT保存,各组分保存详见标签,12个月稳定。

运输:冰袋运输。

 

注意事项

1) TRAP染色液易失效,请务必现配现用。

2) GBC染色液请不要置于-20℃冻存,需2-8℃避光保存。

3) 样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。

4) 对于冰冻切片染色,应尽量减少切片在室温暴露的时间。

5) 对于血液涂片,推荐皮肤穿刺血涂片,晾干后及时染色

6) 本品不建议用于石蜡切片染色。

7) 组织固定需在4℃冰箱进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

操作步骤 

实验前准备材料:蒸馏水,恒温箱,载玻片,光学显微镜 

一、 血液、细胞涂片

1.1 推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载玻片上,推玻片与载玻片保持30°,置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前方滑动置铺满血膜为止。

1.2 自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s~3min,多数情况1min内即可。

1.3 水洗、稍微晾干(不易过分干燥)。

1.4 切片入现配的TRAP染色液,置于37℃温箱,避光浸染45~60min,水洗。

1.5 复染:用苏木素染色液复染3~5min。

1.6 水洗、晾干、镜检。

 

二、 冰冻切片染色 

2.1 冰冻切片回温至37℃,水中浸泡1~2min。

2.2 自然晾干,TRAP固定液4℃固定1~3min

2.3 水洗、稍微晾干(不易过分干燥)。

2.4 切片入现配的TRAP染色液,置于37℃温箱,避光浸染45~60min,水洗。

2.5 复染:用苏木素染色液复染5~8min。

2.6 水洗、晾干、镜检。

 

三、 染色结果

阳性部位(酶活性部位)                             紫红色                                                  
细胞核 蓝色

 

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货号 名称 规格
MP7501-100T 碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法) 100T
MP7502-120T 抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒(显色法)                      120T
MP7504-100ML                    碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法) 2×50ml                             
MP7505-30ML 碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 3×10ml
MP7508-30ML 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒 3×10ml
MM1503-100ML Neutral Balsam Mounting Medium中性树胶封片剂 100ml
MM1504-100ML 4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

 

 

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method) 碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)


描述

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)  

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)    

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

MP7505-30ML     3×10ml  1242
MP7505-60ML 3×20ml 2082

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP)产品专题。

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒(定量检测)产品专题。

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒(定性,干细胞检测)产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP或AP)是一类磷酸酯酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化,广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)(Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Mehod))利用的是偶氮偶联法来定性检测磷酸酶活性。工作原理是在pH 9.2-9.8的碱性条件下,细胞内ALP可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片等的ALP染色,ALP阳性反应部位呈蓝色,位于胞浆,染色结果比金属盐沉淀法相对可靠些。

产品组成

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式             
MP7505-30ML     MP7505-60ML     
MP7505-A        ALP固定液             10ml 20ml RT避光保存
MP7505-B1 AS-BI染色液 5ml 10ml -20℃避光保存
MP7505-B2 FBB染色液 5ml 10ml 2-8℃避光保存
MP7505-C 核固红染液 10ml 20ml 2-8℃避光保存

保存与运输方法

保存:按照对应组分的要求来保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   血液、骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。

2)   培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。

3)   培养细胞或爬片细胞不建议采用ALP固定液,此ALP固定液适用于血液或骨髓细胞涂片的固定。

4)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 ALP染色液的准备

临用前,取适量的AS-BI染色液(B1)和FBB染色液(B2)按照1:1比例混合,即得到ALP染色液,现配现用。

、 涂片或切片染色

1.1    血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片放入ALP固定液固定3min(注:梯度入水的石蜡切片无需固定),水洗。

1.2    滴加新鲜配制的ALP染色液,放入湿盒,避光孵育15-20min,水洗。

1.3    入核固红染色液复染3-5min。

1.4    水洗、镜检或甘油明胶封片后镜检。

、 贴壁细胞染色

2.1 取6孔板或其他容器培养的细胞,弃培养液,PBS清洗细胞。

2.2 加入4%多聚甲醛固定10-20min,PBS清洗细胞。

2.3 滴加新鲜配制的ALP染色液,放入湿盒,避光孵育15-20min,PBS清洗。

2.4 入核固红染色液复染30s~3min。

2.5    PBS清洗、镜检。

三、染色结果

阳性部位                   蓝色                          
细胞核 红色(核固红)

相关产品

货号 名称 规格
MP0101-10MG Alkaline Phosphatase from E.Coli 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌 10mg             
MP0102-5KU Alkaline Phosphatase (Ammonium sulfate suspension) from Calf Intestine   

, Conjugation Grade  小牛肠碱性磷酸酶(硫酸铵悬浮液)

5KU
MP7501-100T Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)

碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

100T
MP7504-100ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml
MP7505-30ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml
MM1503-100ML Neutral Balsam Mounting Medium 中性树胶封片剂 100ml
MM1504-100ML   4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

 

 

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method) 碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)


描述

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)  

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)    

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

MP7505-30ML     3×10ml  1242
MP7505-60ML 3×20ml 2082

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP)产品专题。

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒(定量检测)产品专题。

【温馨提示】:见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒(定性,干细胞检测)产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP或AP)是一类磷酸酯酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化,广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)(Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Mehod))利用的是偶氮偶联法来定性检测磷酸酶活性。工作原理是在pH 9.2-9.8的碱性条件下,细胞内ALP可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片等的ALP染色,ALP阳性反应部位呈蓝色,位于胞浆,染色结果比金属盐沉淀法相对可靠些。

产品组成

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式             
MP7505-30ML     MP7505-60ML     
MP7505-A        ALP固定液             10ml 20ml RT避光保存
MP7505-B1 AS-BI染色液 5ml 10ml -20℃避光保存
MP7505-B2 FBB染色液 5ml 10ml 2-8℃避光保存
MP7505-C 核固红染液 10ml 20ml 2-8℃避光保存

保存与运输方法

保存:按照对应组分的要求来保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   血液、骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。

2)   培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。

3)   培养细胞或爬片细胞不建议采用ALP固定液,此ALP固定液适用于血液或骨髓细胞涂片的固定。

4)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 ALP染色液的准备

临用前,取适量的AS-BI染色液(B1)和FBB染色液(B2)按照1:1比例混合,即得到ALP染色液,现配现用。

、 涂片或切片染色

1.1    血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片放入ALP固定液固定3min(注:梯度入水的石蜡切片无需固定),水洗。

1.2    滴加新鲜配制的ALP染色液,放入湿盒,避光孵育15-20min,水洗。

1.3    入核固红染色液复染3-5min。

1.4    水洗、镜检或甘油明胶封片后镜检。

、 贴壁细胞染色

2.1 取6孔板或其他容器培养的细胞,弃培养液,PBS清洗细胞。

2.2 加入4%多聚甲醛固定10-20min,PBS清洗细胞。

2.3 滴加新鲜配制的ALP染色液,放入湿盒,避光孵育15-20min,PBS清洗。

2.4 入核固红染色液复染30s~3min。

2.5    PBS清洗、镜检。

三、染色结果

阳性部位                   蓝色                          
细胞核 红色(核固红)

相关产品

货号 名称 规格
MP0101-10MG Alkaline Phosphatase from E.Coli 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌 10mg             
MP0102-5KU Alkaline Phosphatase (Ammonium sulfate suspension) from Calf Intestine   

, Conjugation Grade  小牛肠碱性磷酸酶(硫酸铵悬浮液)

5KU
MP7501-100T Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)

碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

100T
MP7504-100ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml
MP7505-30ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml
MM1503-100ML Neutral Balsam Mounting Medium 中性树胶封片剂 100ml
MM1504-100ML   4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

 

 

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method) 碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)


描述

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)     

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)     

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

MP7504-100ML       2×50ml     752
MP7504-200ML 2×100ml 1492

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【温馨提示】:见我司整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒(定量检测)产品专题。

【温馨提示】:见我司整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒(定性,干细胞检测)产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP,AKP或AP)是一类磷酸酯酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化,广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)(Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method))利用的是金属沉淀法来定性检测磷酸酶活性。检测原理是以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物,经碱性磷酸酶水解释放出磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。

产品组成

组分编号             组分名称            产品货号(规格) 保存方式            
MP7504-100ML       MP7504-200ML     
MP7504-A ALP染色液 50ml×1 100ml×1 2-8℃避光保存
MP7504-B 硝酸钴染液 50ml×1 100ml×1 RT避光保存
MP7504-C ALP硫化液 1ml×2 1ml×3 RT避光保存
MP7504-D ALP对照液 10ml×1 20ml×1 2-8℃避光保存

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,6个月稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   ALP染色液、ALP硫化液容易失效,建议开封后根据小份保存,避免重复性开盖使用,影响性能。

2)   ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,操作需小心。

3)   样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。

4)   组织固定需在4℃进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

5)   组织在石蜡包埋时,温度不要超过56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸染,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

6)   石蜡切片脱蜡所用的二甲苯需用AR级以上的,不纯的二甲苯会分解黑色沉淀。

7)   冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

实验前准备材料:蒸馏水,温箱或水浴锅

一、 石蜡切片染色

1.1    石蜡切片脱蜡至蒸馏水;

1.2   切片入ALP染色液,37℃孵育2~12h;

【注意:若需要做阴性对照,可选一切片入ALP对照液,该对照液不含酶的反应底物。】

1.3    流动水清洗2min,入蒸馏水;

1.4    入硝酸钴染液,37℃孵育5min;

1.5    流水洗5min,入蒸馏水;

1.6    准备ALP硫化工作液:取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍,混匀即得到硫化工作液,现配现用。切片放入硫化工作液,孵育1-2min;

1.7    流水洗10min,入蒸馏水;

1.8    (可选)核固红复染细胞核,用蒸馏水洗;

1.9    石蜡切片常规脱水、透明、中性树胶封片。

二、 冰冻切片染色

2.1 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内,4℃固定2-5min;

2.2  切片入ALP染色液,37℃孵育5-15min;

【注意:若需要做阴性对照,可选一切片入ALP对照液,该对照液不含酶的反应底物。】

2.3 流水洗2min,入蒸馏水;

2.4 入硝酸钴染液,37℃孵育5min;

2.5 流水洗5min,入蒸馏水;

2.6 准备ALP硫化工作液:取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍,混匀即得到硫化工作液,现配现用。切片放入硫化工作液,孵育1-2min;

2.7    流水洗10min,入蒸馏水;

2.8    (可选)核固红复染细胞核,用蒸馏水洗;

2.9    冰冻切片用甘油明胶封片剂封片。

三、 染色结果

阳性部位                黑色硫化钴沉淀          
细胞核 红色(核固红)

相关产品

货号 名称 规格
MP0101-10MG Alkaline Phosphatase from E.Coli 碱性磷酸酶,来自大肠杆菌 10mg             
MP0102-5KU Alkaline Phosphatase (Ammonium sulfate suspension) from Calf Intestine   

, Conjugation Grade  小牛肠碱性磷酸酶(硫酸铵悬浮液)

5KU
MP7501-100T Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)

碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

100T
MP7504-100ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml
MP7505-30ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml
MM1503-100ML Neutral Balsam Mounting Medium 中性树胶封片剂 100ml
MM1504-100ML   4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 100ml

 

 

 

Alkaline Phosphatase Staining Kit 碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)


描述

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell

碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

产品标签:

Phosphatase, Alkaline 碱性磷酸酶;ALP/AKP;对硝基苯酚磷酸盐(pNPP);偶氮偶联法;显色法(定量);染色法(定性);

产品信息

产品名称

产品编号 规格           价格(元)

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

MP7503-50T   50T

1982

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用) MP7503-100T 100T

3852

【温馨提示I】:见碱性磷酸酶产品专题,了解更多相关产品资料;

【温馨提示II】:见碱性磷酸酶染色试剂盒产品专题;

【温馨提示III】:见碱性磷酸酶活性检测试剂盒产品专题;

【温馨提示IV】:见碱性磷酸酶常用生化底物及试剂盒产品;

产品描述

处于未分化状态的胚胎干细胞(ES)和诱导多潜能干细胞(iPS)典型特征是呈高水平的碱性磷酸酶表达,同时结合其他的一些表面标志物,来显示未分化细胞具自我更新的潜能。碱性磷酸酶(ALP,或AP)是一种水解酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化作用。固定ES或iPS用碱性磷酸酶染色试剂盒染色后,未分化细胞呈红/紫色,而分化细胞呈无色。

本碱性磷酸酶染色试剂盒特异性强,灵敏度高,可为ES/iPS细胞分化的表型评估提供可靠的依据。对于其他细胞来说,染色越深,表明细胞内ALP活性越高。以24孔板染色为例,分别可做50次和100次染色。

产品组分

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式           
MP7503-50T     MP7503-100T        
MP7503-A     Fix Solution 固定液          25ml 50ml 2-8℃保存
MP7503-B ALP 染色溶液A 10ml 10ml×2 2-8℃保存
MP7501-C ALP 染色溶液B 10ml 10ml×2 2-8℃保存
MP7501-D ALP 染色溶液C 10ml 10ml×2 2-8℃保存

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,6个月稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(以24孔板染色为例)

  1. 实验前准备材料:PBST缓冲液、PBS缓冲液
  2. 染色工作液准备:按照如下比例【溶液A: 溶液B: 溶液C=1:1:1】,配制适量染色工作液。请务必根据单次实验用量制备染色工作液。为了保证最佳染色结果,需在配制30min内用完染色工作液,多余染色工作液请丢弃。
  3. 染色步骤
  1. 吸出细胞培养液,PBST洗2~3次,用0.5ml固定液室温固定2~5min。【注意】:固定不要超过5min,过度固定会导致ALP失活)。
  2. 吸出固定液,PBST洗2次;
  3. 吸出PBST。加入0.6ml/孔染色工作液覆盖细胞,室温避光放置5~15min;【注意】:染色过程需密切监督颜色变化,当颜色很明亮即可终止反应,否则会引起非特异性染色。
  4. 吸出染色工作液,用PBS洗2次,最后保存于PBS或封片剂内防止干燥,显微镜下观察染色结果。结果判定:未分化细胞染色呈红/紫色,分化细胞染色呈无色。
  5. 将平板保存在4℃。

相关产品

货号

名称 规格

MP7501-100T   

Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法) 100T

MP7502-120T

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒(显色法) 120T

MP7503-50T

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

50T

MP7504-100ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml

MP7505-30ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml

MP7508-30ML Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

3×10ml

 

Alkaline Phosphatase Staining Kit 碱性磷酸酶染色试剂盒


描述

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell

碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

产品标签:

Phosphatase, Alkaline 碱性磷酸酶;ALP/AKP;对硝基苯酚磷酸盐(pNPP);偶氮偶联法;显色法(定量);染色法(定性);

产品信息

产品名称

产品编号 规格           价格(元)

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

MP7503-50T   50T

1982

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用) MP7503-100T 100T

3852

【温馨提示I】:见碱性磷酸酶产品专题,了解更多相关产品资料;

【温馨提示II】:见碱性磷酸酶染色试剂盒产品专题;

【温馨提示III】:见碱性磷酸酶活性检测试剂盒产品专题;

【温馨提示IV】:见碱性磷酸酶常用生化底物及试剂盒产品;

产品描述

处于未分化状态的胚胎干细胞(ES)和诱导多潜能干细胞(iPS)典型特征是呈高水平的碱性磷酸酶表达,同时结合其他的一些表面标志物,来显示未分化细胞具自我更新的潜能。碱性磷酸酶(ALP,或AP)是一种水解酶,碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化作用。固定ES或iPS用碱性磷酸酶染色试剂盒染色后,未分化细胞呈红/紫色,而分化细胞呈无色。

本碱性磷酸酶染色试剂盒特异性强,灵敏度高,可为ES/iPS细胞分化的表型评估提供可靠的依据。对于其他细胞来说,染色越深,表明细胞内ALP活性越高。以24孔板染色为例,分别可做50次和100次染色。

产品组分

组分编号 组分名称 产品货号(规格) 保存方式           
MP7503-50T     MP7503-100T        
MP7503-A     Fix Solution 固定液          25ml 50ml 2-8℃保存
MP7503-B ALP 染色溶液A 10ml 10ml×2 2-8℃保存
MP7501-C ALP 染色溶液B 10ml 10ml×2 2-8℃保存
MP7501-D ALP 染色溶液C 10ml 10ml×2 2-8℃保存

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,6个月稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(以24孔板染色为例)

  1. 实验前准备材料:PBST缓冲液、PBS缓冲液
  2. 染色工作液准备:按照如下比例【溶液A: 溶液B: 溶液C=1:1:1】,配制适量染色工作液。请务必根据单次实验用量制备染色工作液。为了保证最佳染色结果,需在配制30min内用完染色工作液,多余染色工作液请丢弃。
  3. 染色步骤
  1. 吸出细胞培养液,PBST洗2~3次,用0.5ml固定液室温固定2~5min。【注意】:固定不要超过5min,过度固定会导致ALP失活)。
  2. 吸出固定液,PBST洗2次;
  3. 吸出PBST。加入0.6ml/孔染色工作液覆盖细胞,室温避光放置5~15min;【注意】:染色过程需密切监督颜色变化,当颜色很明亮即可终止反应,否则会引起非特异性染色。
  4. 吸出染色工作液,用PBS洗2次,最后保存于PBS或封片剂内防止干燥,显微镜下观察染色结果。结果判定:未分化细胞染色呈红/紫色,分化细胞染色呈无色。
  5. 将平板保存在4℃。

相关产品

货号

名称 规格

MP7501-100T   

Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法) 100T

MP7502-120T

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Assay Kit (Colorimetric)抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒(显色法) 120T

MP7503-50T

Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell碱性磷酸酶染色试剂盒(干细胞专用)

50T

MP7504-100ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

2×50ml

MP7505-30ML Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

3×10ml

MP7508-30ML Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

3×10ml