描述
PEI 25K Transfection Reagent
线性化聚乙烯亚胺转染试剂
搜索关键词:
PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;线性化聚乙烯亚胺PEI;PEI转染试剂;PEI 25000;CAS:9002-98-6, 26913-06-4;Polysciences;
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
MX2204-1ML |
1ml |
280 |
PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
MX2204-10ML |
10ml |
880 |
PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
MX2204-50ML |
50ml |
1680 |
【温馨提示】:见我司整理的线性化聚乙烯亚胺PEI 25000/ PEI40000转染试剂专题。
产品描述
线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上,线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观,以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上,线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(Vector carrier),即转染试剂。
线性化聚乙烯亚胺PEI 25000(Polyethylenimine Linear, MW 25000)是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。
本品是PEI25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。按照DNA:PEI25K=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA,或者,6孔板内约做80-160次转染。
保存与运输方法
保存:-20℃保存,1年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
1)收到本品或第一次使用,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量降低反复冻融次数。
2)本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。
3)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
4)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。
5)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。
6)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。
7)推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K,制备转染复合物。
8)转染过程请不要使用抗生素。
9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
一、操作方法(贴壁细胞)
1.1铺板
a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。
【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。
1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)
a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。
b)制备PEI25K-DNA转染复合物(严格按照以下步骤进行):①往300μl无血清培养基(比如:Opti-MEM I)加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入6μl PEI25K(1mg/ml)(DNA/PEI25K=1:3),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。
c)将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。
【注意】:以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积(为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。
1.3 孵育
a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI25K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。
b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。
PEI25K客户使用案例(逐步增加中)
图片描述:以人结肠癌细胞(HCT116)为对象,按照质粒DNA:PEI 2,5000(MX2202-250MG)=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞,36h后于荧光显微镜下观察转染效率(GFP,绿色荧光蛋白)。
【数据来源:厦门大学 于老师】
相关产品
货号 |
名称 |
规格 |
MX2202-250MG |
Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000 |
250mg |
MX2203-250MG |
Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000 |
250mg |
MX2204-1ML |
PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
1ml |
MX2205-1ML |
PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
1ml |
MX2211-0.15ML |
Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂 |
0.15ml |
MX2216-0.5KIT |
CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒 |
0.5kit |