描述
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)
嘌呤霉素盐酸盐(10mg/ml)
产品标签
Puromycin嘌呤霉素;G418 SulfateG418硫酸盐;Geneticin遗传霉素;Puromycin resistance gene (Pac);Blasticidin S杀稻瘟菌素(灭瘟散);Zeocin博莱霉素;CAS:58-58-2
产品信息
产品名称
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产品编号
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规格
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价格(元)
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Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐(10mg/ml)
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MS0011-1ML
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1ml
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280
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Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐(10mg/ml)
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MS0011-5ML
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5×1ml
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1100
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Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐(10mg/ml)
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MS0011-10ML
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10×1ml
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1980
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产品描述
嘌呤霉素(Puromycin),来源于白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)代谢产物的一种氨基糖苷类抗生素,
有效抑制革兰氏阳性菌生长,对抗酸杆菌的抑制活性相对较弱,但对革兰氏阴性菌的抑制活性更弱。还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长,一般2天内能杀死99%的细胞。作用机制在于:嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中,导致肽链合成的永久终止,进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂,用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。
对嘌呤霉素的抗性来自嘌呤霉素产生菌内发现的pac基因,其表达产物嘌呤霉素N-乙酰转移酶(puromycin N-acetyl-transferase)可通过乙酰化嘌呤霉素使其失活。这一特性使得嘌呤霉素常用来筛选和维持培养携带pac基因的哺乳动物细胞株,特别是慢病毒感染的细胞株。现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。某些情况下,也能用来筛选携带pac基因的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因编辑系统中也发挥重要作用。
本品为溶于水的嘌呤霉素盐酸盐溶液,浓度为10mg/ml,经0.2 μm滤膜过滤得到的无菌溶液,直接用培养基稀释到工作浓度即可。真核细胞常用的筛选浓度为1-10µg/ml。
产品特性
1)化学名:3′-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3′-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride
2)同义名:Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;
3)CAS NO:58-58-2
4)分子式:C22H29N7O5·2HCl
5)分子量:544.43 g/mol
6)外观:无菌溶液
7)纯度:>98% (HPLC)
8)化学结构:
保存与运输方法
保存:-20℃干燥保存,至少1年有效。
运输:冰袋运输。
使用方法
- 试剂准备
第一次收到本品,可根据单次用量,将嘌呤霉素(10mg/ml)无菌分装,置于-20℃保存,尽量减少反复冻融次数。
2.建议工作浓度
哺乳动物细胞:1-10 μg/ml,最佳工作浓度使用宿主细胞杀灭实验(杀灭曲线)来确定;
大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株,使用浓度为100-125μg/ml。
【注意】:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身状态影响。
3、杀灭曲线的建立
嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况,以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株,确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve),筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。
1)于24孔板加入500μl/孔制备好的细胞悬液,铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时,细胞达到较高的密度(~60-80%),常用的细胞密度如下:
贴壁细胞:0.8 – 3.0 x 105 cells/ml
悬浮细胞:2.5 – 5.0 x 105 cells/ml
2)准备筛选培养基:含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(比如,设置0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/ml,这11个筛选浓度,每个浓度2个复孔);
3)将孵育过夜的细胞清洗后,更换新鲜制备的梯度筛选培养基;之后置于37℃,5%CO2培养箱内孵育;
4)根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
5)每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度,也就是将用到的最优筛选浓度。
【注意】:如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况,
a)变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号,这些需要更长的筛选时间;
b)若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞,此时需要检测药物是否有效,避免药物的反复冻融(<5)。
注意事项
- 嘌呤霉素为有毒化合物,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
常用筛选抗生素及其使用浓度
名称
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抗性基因
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有效筛选浓度(µg/mL)
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潮霉素B(Hygromycin B)
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大肠杆菌潮霉素抗性基因(hyg,hph)
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哺乳动物细胞:200-500
细菌/植物细胞:100-300
真菌:300-1000
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杀稻瘟菌素S(Blasticidin S)
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蜡样芽孢杆菌的bsr基因
土曲霉的BSD基因
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哺乳动物细胞:1-10
大肠杆菌:25-100
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博莱霉素(Zeocin)
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Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene)
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哺乳动物细胞:50-1000
大肠杆菌:25-50
酵母菌:50-300
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腐草霉素(Phleomycin)
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Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene)
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酵母菌:10
丝状真菌:25-150
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遗传霉素(Geneticin,G418)
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Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因(neo)
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哺乳动物细胞:200-2000
植物细胞:10-100
酵母细胞:500-1000
网柄菌属:10-100
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嘌呤霉素(Puromycin)
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链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(pac)
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哺乳动物细胞:1-10
大肠杆菌:100-125
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相关产品
货号
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名称
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规格
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MS0003-1G
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Hygromycin B潮霉素B(冻干粉)
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1g
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MS0003-20ML
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Hygromycin B (50 mg/ml)潮霉素B(50 mg/ml)
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20ml
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MS0007-1ML
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Blasticidin S (10 mg/ml)杀稻瘟菌素S(灭瘟素)(10 mg/ml)
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1ml
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MS0008-1ML
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Phleomycin (20mg/ml)腐草霉素(20 mg/ml)
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1ml
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MS0009-125MG
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Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)
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125mg
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MS0010-1G
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G418 Sulfate (Geneticin)遗传霉素
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1g
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MS0010-20ML
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G418 Sulfate (Geneticin) (50mg/mL)遗传霉素(50mg/mL)
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20ml
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MS0011-25MG
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Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
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25mg
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MS0011-1ML
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Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐(10mg/ml)
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1ml
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MX2201-1ML
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Polybrene (10mg/ml)聚凝胺(10 mg/ml)
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1ml
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