Cell and Tissue Lysis Buffer细胞和组织裂解液；Nitric Oxide Assay一氧化氮检测用；RIPA裂解液；Carboxy-PTIO一氧化氮清除剂/NO清除剂；DAF-FM DA一氧化氮探针；

基本描述：

一氧化氮分析专用裂解液（Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay）是一款专门开发用于一氧化氮或总一氧化氮检测用的细胞或组织裂解液。使用本品裂解所得的样品，可用金畔生物的一氧化氮检测试剂盒（CAT#：MX4731-500T）或总一氧化氮检测试剂盒（CAT#：MX4732-50T）进行检测。

本品不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，由于添加抑制剂可能会干扰后续的一氧化氮检测。经本品裂解细胞或组织所得的蛋白样品，可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：MP1902-500T）测定总蛋白浓度。

保存与运输方法

保存：-20℃冻存，1年稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。

2） 本品可耐受反复冻融。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 培养的细胞样品

1） 充分融解一氧化氮分析专用裂解液，之后混匀待用。

贴壁细胞：吸除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照六孔板的每孔细胞加入100-200μl裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min，通常裂解液接触细胞1-3秒后，细胞就会被裂解。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。

2） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的一氧化氮或蛋白浓度测定等实验。样品制备后如果当日不能完成检测，可以-20℃保存，但仍建议尽快完成检测。

B， 组织样品

1） 充分融解一氧化氮分析专用裂解液，之后混匀待用。

2） 将组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱冷冻30分钟以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程控制在1-2min内，以减少蛋白的降解。

3） 按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的样品，可适当降低用量。】

 4） 用玻璃匀浆器或组织匀浆器匀浆直至充分裂解。（如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分，之后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。）

5） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的一氧化氮或蛋白浓度测定等实验。样品制备后如果当日不能完成检测，可以-20℃保存，但仍建议尽快完成检测。

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