ISOPLANT II
DNA 快速提取试剂（植物/酵母/细菌）
ISOPLANT II 是可以迅速地从植物・酵母・细菌提取 DNA 的试剂盒。与旧产品 ISOPLANT 一样，利用 Solution II 的主要成分氯化苄，对细胞壁进行破坏，在表面活性剂的作用下，使其溶解。植物组织的多糖及多酚比植物组织多，提取时常混入 DNA 中。这些物质抑制限制性内切酶反应及 PCR，难以对 DNA 进行定量测定。改良后的新产品 ISOPLANT II，可有效去除多糖及多酚等抑制物质。不仅可以从草本植物提取，还可以从难度较大的木本植物提取，提取到的 DNA 可用于 PCR 及限制性内切酶反应。
◆特点
• 迅速地从植物・酵母・细菌提取基因组 DNA
• 无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品
• 经改良，可有效去除抑制物质（多糖及多酚）
◆产品列表
保存方法
冷蔵保存（2～10°C）
若长时间不使用 RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。除了 RNase A ，其他产品可以室温保存。
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ISOPLANT II （20回分、100回分）
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产品
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容量（20次）
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容量（100次）
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备注
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Wash Buffer
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20 mL × 1
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100 mL × 1
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Solution I
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6 mL × 1
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30 mL × 1
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可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。
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Solution II
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3 mL × 1
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15 mL × 1
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主要成分是氯化苄。氯化苄为危险品，请小心使用。
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Solution III-A
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2 mL × 1
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10 mL × 1
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Solution III-A为白色悬浊液，蒸发后只剩下白色固相，请使用灭菌蒸馏水溶解。
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Solution III-B
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2.5 mL × 1
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12 mL × 1
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TE（pH8.0）
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2 mL × 1
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10 mL × 1
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10 mM Tris-HCl（pH8.0）, 1 mM EDTA
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RNase A
（1 mg/mL）
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20 µL × 1
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100 µL × 1
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若长时间不使用RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。
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◆使用实例
操作流程
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植物
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酵母、细菌
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实验数据
1. 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析
2. 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应
3. 从细菌、酶提取得DNA进行制限性内切酶反应
4. ISOPLANT II与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较
Data 1：使用从植物叶子提取的 DNA 进行 RAPD 分析
分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/100提取到的 DNA ，进行 RAPD 分析。
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RAPD-PC
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PCR Mixture
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PCR条件
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Template DNA
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1 µL
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95°C
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3 min.
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1 cycle
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10×Gene Taq Universal Buffer
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5 µL
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40°C
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5 min.
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dNTP Mixture (2.5 mM each)
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4 µL
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72°C
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1 min.
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Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 µM)
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1 µL
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Gene Taq (5 units/µL)
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0.25 µL
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95°C
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15 sec.
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25 cycles
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H2O
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38.75 µL
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40°C
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2 min.
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Total Volume
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50 µL
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72°C
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1 min.
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72°C
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5 min.
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结果
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lane 1. 西瓜
lane 2. 黄瓜
lane 3. 南瓜
lane 4. 玉米
lane 5. 水稻
lane 6. 葱
lane 7. 豆子
lane 8. 烟草
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lane 9. 菠菜
lane 10. 银杏
lane 11. 苹果
lane 12. 牡蛎
lane 13. 桃
lane 14. 柚子
lane 15. 梅干
lane 16. 梨
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M : Marker 4 (φX174/Hae III)
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Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)
Taq DNA polymerase: Gene Taq
3% Agarose 21
Data 2：使用从植物叶子提取的 DNA 进行制限性内切酶反应
分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/20提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。
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lane 1. 烟草
lane 2. 菠菜
lane 3. 胡萝卜
lane 4. 梨
lane 5. 水稻
lane 6. 茶
lane 7. 柚子
lane 8. 苹果
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M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)
a : intact DNA
b : Hind III digest + RNase A
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0.8% Agarose S
•注意事项 提取DNA时进行 NaBH4 处理，获得上述数据。
Data 3：从细菌、酵母提取的 DNA 进行制限性内切酶反应
分别取 1/20 从 1.5 mL 培养液体提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。
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lane 1. 粘质沙雷氏菌 Serratia marcescens
lane 2. 牛莫拉氏杆菌 Moraxella bovis
lane 3. 流感嗜血杆菌C Haemophilus influenzae c
lane 4. 普通变形杆菌 Proteus vulgaris
lane 5. 裂殖酵母 Shizosaccharomyces pombe
lane 6. 毕赤酵母 Pichia pastoris
lane 7. 酿酒酵母 Sacaomyces cerevisiae
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M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)
a : intact DNA
b : Hind III digest + RNase A
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0.8% Agarose S
Data 4：ISOPLANT II 与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较
使用相同的样本量，分别用 ISOPLANT II 及旧产品（ISOPLANT）从菠菜及苹果叶子提取 DNA，检测吸光度（200～300 nm）
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菠菜
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苹果
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使用 ISOPLANT II 提取 DNA，在 260 nm 有峰值。表明 DNA 不含多糖及多酚等夹杂物，纯度较高。
◆备注
本产品为实验研究用试剂，不可用于医疗或其他用途。
不了解试剂基本知识的人士请不要使用。
