General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)


描述

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

  产品名称 产品编号 规格           价格(元)   
  General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 

  广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
MP1610-10ML      10×1ml 2750
MP1610-50ML 50×1ml 11000
MP1610-100ML 100×1ml 18000

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产品描述

细胞内源蛋白的表达和降解一般维持平衡状态,因此正常生理条件下内源蛋白含量相对稳定。然而体外研究中,蛋白合成过程终止,而细胞裂解得到的粗提物含大量的内源性蛋白酶,依然能发挥蛋白水解活性,影响蛋白得率,进而干扰相关蛋白表达和功能研究。因此,为了防止蛋白纯化过程的蛋白不被这些蛋白酶降解,需要加入蛋白酶抑制剂来抑制其活性。

本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin,广谱抑制来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种蛋白酶活性。本品不含EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),适用于活性中心为金属离子依赖性蛋白的研究。本品兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO储存液的形式提供,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
AEBSF 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆
Aprotinin 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆

Bestatin贝他定(苯丁抑制素)   

氨肽酶(Aminopeptidase),可逆
Leupeptin亮抑酶肽 丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶,可逆
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinase),可逆     
E-64蛋白酶抑制剂 半胱氨酸蛋白酶( cysteine protease),不可逆

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解【注意:DMSO低温下融化较慢,建议25℃下融化】,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加到适量抽提试剂(比如细胞或组织裂解液),混匀,再进行样品蛋白的提取。或根据实验目的以及所培养的特定细胞和组织,对使用比例进行摸索和优化。【注】:按照1:100建议比例,1ml本品可以抑制从20g湿重细胞裂解获得的蛋白酶活性。

注意事项

1)传统蛋白酶抑制剂(比如:AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin)不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(如ATAXIN-3)的功能 【来源文献:Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2)本品具广谱蛋白酶抑制活性,不具有磷酸酶抑制活性。若需要进行磷酸化蛋白研究,请选择广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1612)来满足实验要求。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1. 为什么要用蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)?

本蛋白酶抑制剂混合物属于低毒且全面型的蛋白保护试剂,最大限度保护蛋白使其免于被内源性蛋白酶降解。目前对微量表达蛋白如信号通路蛋白,受体蛋白,使用免疫共沉淀(Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay)等来获取样品,此时蛋白酶抑制剂混合物的加入尤为重要,因其比单一抑制剂(比如PMSF)更为有效。

2. 蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)是否能进一步稀释使用?

蛋白酶活性抑制效果和众多因素有关,比如目标蛋白降解的难易程度,蛋白酶类型和浓度,蛋白酶活性高低,以及抑制剂的浓度都会影响最终的保护效果。本品采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果,建议按照建议比例(1:100)稀释使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制剂混合物,以更低的浓度达到良好的效果,可参照相应比例来进行实验。建议在推荐比例使用上达到理想效果的基础上,可做进一步稀释的摸索和测试。

3. 传统实验常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)与其相比有何优势?

PMSF(苯甲基磺酰氟,CAS:329-98-6)是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛用于细胞裂解纯化蛋白过程。然而,其具有许多明显的缺点,逐步被保护效果更好且更安全的单一蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物所替代。主要缺点1)毒性较高,半致死量为200mg/kg;而其替代物AEBSF,半致死量为2834mg/kg,毒性远低于PMSF十四倍多,同时保持相当的抑制效果,且对很多种丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更迅速;2)半衰期短,在水溶液中只有30min,细胞裂解过程中太容易失效。而蛋白酶抑制剂cocktail不仅仅保护全面且效果持续更加久。

4. DMSO是否会对实验结果产生副作用?

DMSO(二甲基亚砜)基本不会影响实验结果。生物科学领域DMSO为很多生物活性物质的有机溶剂,比如蛋白结晶,免疫共沉淀等要求较高实验中也会使用DMSO。细胞研究中,低温条件下DMSO还是一种广泛使用且优秀的细胞冷冻保护剂。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG    不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)   1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂


描述

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂

产品标签

胶原酶;中性蛋白酶;透明质酸酶;木瓜蛋白酶; DNase I;胰酶;胰蛋白酶抑制剂;CAS: 9035-81-8;

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-50MG 50mg 299
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-100MG 100mg 449
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-1000MG 1g 1659

【温馨提示】:了解我司(金畔生物)整理的组织消化(Tissue dissociation)产品专题

产品描述

天然胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitors)也称为丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serineproteaseinhibitors, serpins),是最大且分布最多样的蛋白酶抑制剂家族,通过抑制体内丝氨酸蛋白酶来控制蛋白的活化和分解代谢。常见有四种来源的天然胰酶抑制剂:牛胰腺、卵类粘蛋白、大豆和利玛豆,以竞争性底物类似物的方式结合丝氨酸蛋白酶,形成无活性的复合物,从而使得蛋白酶失去活性。当丝氨酸蛋白酶活性不再需要时,可加入丝氨酸蛋白酶抑制剂来终止蛋白酶活性。

本品是来源于大豆的胰蛋白酶抑制剂,最初是由Kunitz分离所得,也称为Kunitz抑制剂(Kunitz inhibitor)。是一种单一亚基蛋白质,由181个氨基酸残基组成的单一多肽链,通过2个二硫键交联而成。本品能够抑制胰蛋白酶,很少抑制胰凝乳蛋白酶和纤溶酶。也能抑制与胰蛋白酶具相似机制的其他蛋白酶。对血浆激肽释放酶和凝血因子Xa有抑制效应。然而,对金属蛋白酶、组织激肽释放酶、酸性蛋白酶或巯基蛋白酶无抑制活性。

产品特性

1) CAS NO.:9035-81-8

2) 同义名:Kunitz Trypsin Inhibitor, Tia1, STI and SBTI;胰蛋白酶抑制剂,来源于大豆;大豆胰酶抑制剂;

3) 来源:大豆

4) 分子量:21,500 ± 800 Da

5) 最佳pH:7.0

6) 等电点:4.5

7) 外观:类白色至浅黄色至浅棕色冻干粉

8) 溶解性:溶于水或磷酸盐缓冲液(10mg/ml)

9) 结构示意图:

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,2年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 产品名称 规格
MX1001-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 1) 100mg
MX1002-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 2) 100mg
MX1003-100MG Collagenase III胶原酶III型(Type 3) 100mg
MX1004-100MG Collagenase IV胶原酶IV型(Type 4) 100mg
MX1005-100MG Collagenase V胶原酶V型(Type 5) 100mg
MX1006-100MG Dispase II分散酶II(中性蛋白酶) 100mg
MX1011-100MG Collagenase NB 4 Standard Grade胶原酶NB4标准级别 100mg
MX2002-25G Trypsin 1:250 (Porcine)猪源胰蛋白酶1:250(粉末) 25g
MX2005-100MG Trypsin, TPCK Treated胰蛋白酶(TPCK处理)(组织培养级) 100mg
MX1007-100MG Hyaluronidase透明质酸酶 100mg
MX1010-25MG Elastase, from Porcine Pancreas弹性蛋白酶(猪胰腺) 25mg
MX1008-25G Papain, BC Grade木瓜蛋白酶(试剂级) 25g
MF0401-15KU Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

15KU
MX1009-1G Trypsin Inhibitor, Soybean大豆胰酶抑制剂 1g

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂


描述

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂

产品标签

胶原酶;中性蛋白酶;透明质酸酶;木瓜蛋白酶; DNase I;胰酶;胰蛋白酶抑制剂;CAS: 9035-81-8;

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-50MG 50mg 299
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-100MG 100mg 449
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-1000MG 1g 1659

【温馨提示】:了解我司(金畔生物)整理的组织消化(Tissue dissociation)产品专题

产品描述

天然胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitors)也称为丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serineproteaseinhibitors, serpins),是最大且分布最多样的蛋白酶抑制剂家族,通过抑制体内丝氨酸蛋白酶来控制蛋白的活化和分解代谢。常见有四种来源的天然胰酶抑制剂:牛胰腺、卵类粘蛋白、大豆和利玛豆,以竞争性底物类似物的方式结合丝氨酸蛋白酶,形成无活性的复合物,从而使得蛋白酶失去活性。当丝氨酸蛋白酶活性不再需要时,可加入丝氨酸蛋白酶抑制剂来终止蛋白酶活性。

本品是来源于大豆的胰蛋白酶抑制剂,最初是由Kunitz分离所得,也称为Kunitz抑制剂(Kunitz inhibitor)。是一种单一亚基蛋白质,由181个氨基酸残基组成的单一多肽链,通过2个二硫键交联而成。本品能够抑制胰蛋白酶,很少抑制胰凝乳蛋白酶和纤溶酶。也能抑制与胰蛋白酶具相似机制的其他蛋白酶。对血浆激肽释放酶和凝血因子Xa有抑制效应。然而,对金属蛋白酶、组织激肽释放酶、酸性蛋白酶或巯基蛋白酶无抑制活性。

产品特性

1) CAS NO.:9035-81-8

2) 同义名:Kunitz Trypsin Inhibitor, Tia1, STI and SBTI;胰蛋白酶抑制剂,来源于大豆;大豆胰酶抑制剂;

3) 来源:大豆

4) 分子量:21,500 ± 800 Da

5) 最佳pH:7.0

6) 等电点:4.5

7) 外观:类白色至浅黄色至浅棕色冻干粉

8) 溶解性:溶于水或磷酸盐缓冲液(10mg/ml)

9) 结构示意图:

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,2年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 产品名称 规格
MX1001-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 1) 100mg
MX1002-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 2) 100mg
MX1003-100MG Collagenase III胶原酶III型(Type 3) 100mg
MX1004-100MG Collagenase IV胶原酶IV型(Type 4) 100mg
MX1005-100MG Collagenase V胶原酶V型(Type 5) 100mg
MX1006-100MG Dispase II分散酶II(中性蛋白酶) 100mg
MX1011-100MG Collagenase NB 4 Standard Grade胶原酶NB4标准级别 100mg
MX2002-25G Trypsin 1:250 (Porcine)猪源胰蛋白酶1:250(粉末) 25g
MX2005-100MG Trypsin, TPCK Treated胰蛋白酶(TPCK处理)(组织培养级) 100mg
MX1007-100MG Hyaluronidase透明质酸酶 100mg
MX1010-25MG Elastase, from Porcine Pancreas弹性蛋白酶(猪胰腺) 25mg
MX1008-25G Papain, BC Grade木瓜蛋白酶(试剂级) 25g
MF0401-15KU Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

15KU
MX1009-1G Trypsin Inhibitor, Soybean大豆胰酶抑制剂 1g

General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution) 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)


描述

General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;RochePhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物;β-甘油磷酸钠(BGP);

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)  
General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)  

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1612-1ML 1ml 380
MP1612-10ML      10×1ml        2750
MP1612-50ML 50×1ml 11000
MP1612-100ML 100×1ml 18000

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品描述

细胞内蛋白的磷酸化和去磷酸化是信号转导、细胞增殖、分化和凋亡等重要生理活动的调控开关,这两种作用主要通过蛋白激酶和磷酸酶的相互协调来实现。体外研究中,由于组织或者细胞经裂解会释放出大量的酶原,这些酶原会被激活从而开始消化随之释放的待研究蛋白,不仅影响对蛋白真实水平的了解,甚至由于某些蛋白含量很低,再经进一步降解,无法检测到,干扰对调控机制的正确研究。为此,体外研究,最大限度还原蛋白在细胞内的原始状态极其重要,可通过蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的组合使用来达此目的。

本品是多种磷酸酶抑制剂的特殊混合物,包含氟化钠,正钒酸钠,咪唑,钼酸钠,酒石酸钠,焦磷酸钠,β-磷酸甘油等成分,广谱抑制非特异性的酸性和碱性磷酸酶,以及特异性的酪氨酸磷酸酶,丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸酶等。

本品以100×储存液的形式提供,可用来保护来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种磷酸化蛋白维持本来状态,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
Imidazole咪唑 蛋白组氨酸磷酸酶(protein histidine phosphatase, PHP)
Sodium Fluoride 氟化钠 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase, PSP)

酸性磷酸酶(acid phosphatase)

Sodium Orthovanadate

正钒酸钠

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Sodium Molybdate 钼酸钠   酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Tartrate 酒石酸钠  酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Pyrophosphate

焦磷酸钠

蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)
β-Glycerophosphate

β-磷酸甘油

蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年稳定;4℃保存,2个月稳定。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加入样品溶液(比如细胞或组织裂解液)中即可。或者根据实验目的,以及所研究的特定细胞和组织,通过实验进行使用比例的摸索和优化。

注意事项

1)DTT、EDTA和EGTA对正钒酸钠活性的发挥会有影响。

2)本品具广谱磷酸酶抑制活性,不具有蛋白酶抑制活性。可配合广谱型蛋白酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1610-1ML)一起使用以实现蛋白的全面保护。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型   作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG 不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶  10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)    1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate  MP1608-10G     不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)


描述

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

  产品名称 产品编号 规格           价格(元)   
  General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 

  广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
MP1610-10ML      10×1ml 2750
MP1610-50ML 50×1ml 11000
MP1610-100ML 100×1ml 18000

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品描述

细胞内源蛋白的表达和降解一般维持平衡状态,因此正常生理条件下内源蛋白含量相对稳定。然而体外研究中,蛋白合成过程终止,而细胞裂解得到的粗提物含大量的内源性蛋白酶,依然能发挥蛋白水解活性,影响蛋白得率,进而干扰相关蛋白表达和功能研究。因此,为了防止蛋白纯化过程的蛋白不被这些蛋白酶降解,需要加入蛋白酶抑制剂来抑制其活性。

本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin,广谱抑制来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种蛋白酶活性。本品不含EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),适用于活性中心为金属离子依赖性蛋白的研究。本品兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO储存液的形式提供,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
AEBSF 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆
Aprotinin 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆

Bestatin贝他定(苯丁抑制素)   

氨肽酶(Aminopeptidase),可逆
Leupeptin亮抑酶肽 丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶,可逆
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinase),可逆     
E-64蛋白酶抑制剂 半胱氨酸蛋白酶( cysteine protease),不可逆

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解【注意:DMSO低温下融化较慢,建议25℃下融化】,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加到适量抽提试剂(比如细胞或组织裂解液),混匀,再进行样品蛋白的提取。或根据实验目的以及所培养的特定细胞和组织,对使用比例进行摸索和优化。【注】:按照1:100建议比例,1ml本品可以抑制从20g湿重细胞裂解获得的蛋白酶活性。

注意事项

1)传统蛋白酶抑制剂(比如:AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin)不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(如ATAXIN-3)的功能 【来源文献:Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2)本品具广谱蛋白酶抑制活性,不具有磷酸酶抑制活性。若需要进行磷酸化蛋白研究,请选择广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1612)来满足实验要求。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1. 为什么要用蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)?

本蛋白酶抑制剂混合物属于低毒且全面型的蛋白保护试剂,最大限度保护蛋白使其免于被内源性蛋白酶降解。目前对微量表达蛋白如信号通路蛋白,受体蛋白,使用免疫共沉淀(Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay)等来获取样品,此时蛋白酶抑制剂混合物的加入尤为重要,因其比单一抑制剂(比如PMSF)更为有效。

2. 蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)是否能进一步稀释使用?

蛋白酶活性抑制效果和众多因素有关,比如目标蛋白降解的难易程度,蛋白酶类型和浓度,蛋白酶活性高低,以及抑制剂的浓度都会影响最终的保护效果。本品采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果,建议按照建议比例(1:100)稀释使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制剂混合物,以更低的浓度达到良好的效果,可参照相应比例来进行实验。建议在推荐比例使用上达到理想效果的基础上,可做进一步稀释的摸索和测试。

3. 传统实验常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)与其相比有何优势?

PMSF(苯甲基磺酰氟,CAS:329-98-6)是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛用于细胞裂解纯化蛋白过程。然而,其具有许多明显的缺点,逐步被保护效果更好且更安全的单一蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物所替代。主要缺点1)毒性较高,半致死量为200mg/kg;而其替代物AEBSF,半致死量为2834mg/kg,毒性远低于PMSF十四倍多,同时保持相当的抑制效果,且对很多种丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更迅速;2)半衰期短,在水溶液中只有30min,细胞裂解过程中太容易失效。而蛋白酶抑制剂cocktail不仅仅保护全面且效果持续更加久。

4. DMSO是否会对实验结果产生副作用?

DMSO(二甲基亚砜)基本不会影响实验结果。生物科学领域DMSO为很多生物活性物质的有机溶剂,比如蛋白结晶,免疫共沉淀等要求较高实验中也会使用DMSO。细胞研究中,低温条件下DMSO还是一种广泛使用且优秀的细胞冷冻保护剂。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG    不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)   1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

Arbutin 熊果苷


描述

Arbutin 熊果苷

产品标签

Arbutin 熊果苷;β-Arbutin β-熊果苷;Tyrosinase inhibitor 酪氨酸酶抑制剂;Melanin production inhibitor 黑色素生成抑制剂;CAS:497-76-7;

产品信息

产品名称 产品编号 规格             价格(元)   
Arbutin 熊果苷        MZ95031-5G       5g 280
Arbutin 熊果苷 MZ95031-25G 25g 840

产品描述

熊果苷 (Arbutin,CAS:497-76-7),又称为β-熊果苷(β-Arbutin),p-熊果苷(p-Arbutin),是一种糖苷,用于传统中药中的一种糖基化氢醌(即对苯二酚)。熊果苷是一种酪氨酸酶抑制剂,从而抑制黑色素的生成。

产品特性

1)   CAS NO:497-76-7 

2)   化学名:(2R,3S,4S,5R,6S)-2-Hydroxymethyl-6- (4-hydroxyphenoxy)oxane-3,4,5-triol

3)  同义名:p-Arbutin, β-Arbutin, Hydroquinone β-D-glucopyranoside, 4-Hydroxyphenyl-β-D-glucopyranoside, Uva, Ursi; β-熊果苷,熊果素,熊果甙,熊果酚甙,熊葡萄叶素,对-羟基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷;

4)   分子式:C12H16O7

5)   分子量:272.25

6)   纯度:≥99.5%

7)   外观:白色结晶或粉末

8)   溶解性:溶于DMSO(50mg/ml),H2O(50mg/ml),几乎不溶于乙醇

9)   化学结构图:

保存与运输方法

保存:2-8ºC干燥保存,2年有效;-20ºC干燥保存,3年有效。

运输:室温运输

注意事项

1)   本品不是临床药物,只能用于科研用途,不能用于诊断或临床用途。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格           
MZ95031-5G       Arbutin 熊果苷 5g
MZ95032-1G alpha-Arbutin alpha-熊果苷 1g
MZ95033-1G Deoxyarbutin 脱氧熊果苷 1g
MP0507-25KU Polyphenol Oxidase (Tyrosinase) 多酚氧化酶(酪氨酸酶)     25KU

 

 

 

Arbutin 熊果苷


描述

Arbutin 熊果苷

产品标签

Arbutin 熊果苷;β-Arbutin β-熊果苷;Tyrosinase inhibitor 酪氨酸酶抑制剂;Melanin production inhibitor 黑色素生成抑制剂;CAS:497-76-7;

产品信息

产品名称 产品编号 规格             价格(元)   
Arbutin 熊果苷        MZ95031-5G       5g 280
Arbutin 熊果苷 MZ95031-25G 25g 840

产品描述

熊果苷 (Arbutin,CAS:497-76-7),又称为β-熊果苷(β-Arbutin),p-熊果苷(p-Arbutin),是一种糖苷,用于传统中药中的一种糖基化氢醌(即对苯二酚)。熊果苷是一种酪氨酸酶抑制剂,从而抑制黑色素的生成。

产品特性

1)   CAS NO:497-76-7 

2)   化学名:(2R,3S,4S,5R,6S)-2-Hydroxymethyl-6- (4-hydroxyphenoxy)oxane-3,4,5-triol

3)  同义名:p-Arbutin, β-Arbutin, Hydroquinone β-D-glucopyranoside, 4-Hydroxyphenyl-β-D-glucopyranoside, Uva, Ursi; β-熊果苷,熊果素,熊果甙,熊果酚甙,熊葡萄叶素,对-羟基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷;

4)   分子式:C12H16O7

5)   分子量:272.25

6)   纯度:≥99.5%

7)   外观:白色结晶或粉末

8)   溶解性:溶于DMSO(50mg/ml),H2O(50mg/ml),几乎不溶于乙醇

9)   化学结构图:

保存与运输方法

保存:2-8ºC干燥保存,2年有效;-20ºC干燥保存,3年有效。

运输:室温运输

注意事项

1)   本品不是临床药物,只能用于科研用途,不能用于诊断或临床用途。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格           
MZ95031-5G       Arbutin 熊果苷 5g
MZ95032-1G alpha-Arbutin alpha-熊果苷 1g
MZ95033-1G Deoxyarbutin 脱氧熊果苷 1g
MP0507-25KU Polyphenol Oxidase (Tyrosinase) 多酚氧化酶(酪氨酸酶)     25KU

 

 

 

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制剂


描述

Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂

产品标签

胶原酶;中性蛋白酶;透明质酸酶;木瓜蛋白酶; DNase I;胰酶;胰蛋白酶抑制剂;CAS: 9035-81-8;

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-50MG 50mg 299
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-100MG 100mg 449
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰蛋白酶抑制剂 MX1009-1000MG 1g 1659

【温馨提示】:了解我司(金畔生物)整理的组织消化(Tissue dissociation)产品专题

产品描述

天然胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitors)也称为丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serineproteaseinhibitors, serpins),是最大且分布最多样的蛋白酶抑制剂家族,通过抑制体内丝氨酸蛋白酶来控制蛋白的活化和分解代谢。常见有四种来源的天然胰酶抑制剂:牛胰腺、卵类粘蛋白、大豆和利玛豆,以竞争性底物类似物的方式结合丝氨酸蛋白酶,形成无活性的复合物,从而使得蛋白酶失去活性。当丝氨酸蛋白酶活性不再需要时,可加入丝氨酸蛋白酶抑制剂来终止蛋白酶活性。

本品是来源于大豆的胰蛋白酶抑制剂,最初是由Kunitz分离所得,也称为Kunitz抑制剂(Kunitz inhibitor)。是一种单一亚基蛋白质,由181个氨基酸残基组成的单一多肽链,通过2个二硫键交联而成。本品能够抑制胰蛋白酶,很少抑制胰凝乳蛋白酶和纤溶酶。也能抑制与胰蛋白酶具相似机制的其他蛋白酶。对血浆激肽释放酶和凝血因子Xa有抑制效应。然而,对金属蛋白酶、组织激肽释放酶、酸性蛋白酶或巯基蛋白酶无抑制活性。

产品特性

1) CAS NO.:9035-81-8

2) 同义名:Kunitz Trypsin Inhibitor, Tia1, STI and SBTI;胰蛋白酶抑制剂,来源于大豆;大豆胰酶抑制剂;

3) 来源:大豆

4) 分子量:21,500 ± 800 Da

5) 最佳pH:7.0

6) 等电点:4.5

7) 外观:类白色至浅黄色至浅棕色冻干粉

8) 溶解性:溶于水或磷酸盐缓冲液(10mg/ml)

9) 结构示意图:

保存与运输方法

保存:2-8℃保存,2年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 产品名称 规格
MX1001-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 1) 100mg
MX1002-100MG Collagenase I胶原酶I型(Type 2) 100mg
MX1003-100MG Collagenase III胶原酶III型(Type 3) 100mg
MX1004-100MG Collagenase IV胶原酶IV型(Type 4) 100mg
MX1005-100MG Collagenase V胶原酶V型(Type 5) 100mg
MX1006-100MG Dispase II分散酶II(中性蛋白酶) 100mg
MX1011-100MG Collagenase NB 4 Standard Grade胶原酶NB4标准级别 100mg
MX2002-25G Trypsin 1:250 (Porcine)猪源胰蛋白酶1:250(粉末) 25g
MX2005-100MG Trypsin, TPCK Treated胰蛋白酶(TPCK处理)(组织培养级) 100mg
MX1007-100MG Hyaluronidase透明质酸酶 100mg
MX1010-25MG Elastase, from Porcine Pancreas弹性蛋白酶(猪胰腺) 25mg
MX1008-25G Papain, BC Grade木瓜蛋白酶(试剂级) 25g
MF0401-15KU Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

15KU
MX1009-1G Trypsin Inhibitor, Soybean大豆胰酶抑制剂 1g

抗体/试剂/诊断抗体原料,蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×)

品牌:Bioss/博奥森 | 货号:PIC008-1ml

蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×)Protease Inhibitor Cocktail (for mammalian cell and tissue extracts, 100×) (PIC008)

别名:Protease Inhibitor Cocktail (for mammalian cell and tissue extracts, 100×); Protease Inhibitor Cocktail(100×); Protease Inhibitor Cocktail; 100×PIC; Protease Inhibitor Mixture(100×); Protease inhibitor cocktail for mammalian cell and tissue extracts, 100X; Protease Inhibitor Cocktail (for mammalian, 100×)  蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×); 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品提取, 100×); 蛋白酶抑制剂混合物(100x in DMSO);

产品介绍:

蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor)是指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合,使蛋白酶活力下降、甚至消失、但不使酶蛋白变性的物质。蛋白酶抑制剂有很多种,包括 EDTA、E-64、NaVO3、Bestatin、Leupetin、PepstatinA、Aprotinin 等,均可分别抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶、金属蛋白酶等各种蛋白酶的活性,从而有效地抑制蛋白质的降解,并维持原有的蛋白结构。

哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

Bioss生产的蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×) (Protease inhibitor cocktail for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一种用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物,主要成分有:105mM AEBSF, 80uM Aprotinin, 5mM Bestatin, 1.5mM E64, 2mM Leupeptin and 1.5mM Pepstatin A in DMSO,并提供一支独立包装的0.5M EDTA, pH 8.0,以便选择性使用。注:如果所提取的蛋白质用于检测金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA。

本产品为100×浓缩液,使用时请按1:100的比例加入裂解液中,用于哺乳动物细胞或组织蛋白的提取,可有效抑制蛋白降解。该产品可以抑制绝大多数蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。所提取的蛋白质可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。

不同类型的蛋白提取物中含有不同类型的蛋白酶。例如,哺乳动物细胞提取物中通常含有高丰度的丝氨酸蛋白酶,细菌细胞提取物通常含有较多的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶,哺乳动物组织提取物中主要含有丝氨酸、半胱氨酸和金属蛋白酶,植物提取物中常含有大量的丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶,还有一些含有天冬氨酸蛋白酶。为此Bioss针对不同类型样品的蛋白提取,提供了不同类型的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂混合物以供选择。

本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗,仅可用于科研等非医疗目的。

Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution 改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)


描述

Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;RochePhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

产品名称 产品编号 规格        价格(元)
Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1613-1Pack       1包 450
MP1613-10Pack 10×1包 3200

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品包装

组分编号 组分名称

产品编号(规格)

MP1613-1Pack(1包)      MP1613-10Pack(10包) 
MP1613-A      混合物A液(100×水溶液)             1ml 10×1ml
MP1613-B 混合物B液(100×DMSO溶液) 1ml 10×1ml

产品描述

细胞内蛋白的磷酸化和去磷酸化是信号转导、细胞增殖、分化和凋亡等重要生理活动的调控开关,这两种作用主要通过蛋白激酶和磷酸酶的相互协调来实现。体外研究中,由于组织或者细胞经裂解会释放出大量的酶原,这些酶原会被激活从而开始消化随之释放的待研究蛋白,不仅影响对蛋白真实水平的了解,甚至由于某些蛋白含量很低,再经进一步降解,无法检测到,干扰对调控机制的正确研究。为此,体外研究,最大限度还原蛋白在细胞内的原始状态极其重要,可通过蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的组合使用来达此目的。

本品A,B两管的形式提供,A管是多种传统磷酸酶抑制剂的混合物,包含氟化钠,正钒酸钠,咪唑,钼酸钠,酒石酸钠等成分;B管是近年发现的一批天然代谢产物,具有更特别的磷酸酶抑制效果,也进一步增加了磷酸化保护范围。本品广谱抑制非特异性的酸性和碱性磷酸酶,以及特异性的酪氨酸磷酸酶,丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸酶等。

本品以100×储存液的形式提供,可用来保护来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种磷酸化蛋白维持本来状态,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
Imidazole 咪唑 蛋白组氨酸磷酸酶(protein histidine phosphatase, PHP)
Sodium Fluoride 氟化钠 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP),酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Orthovanadate

正钒酸钠

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Sodium Molybdate 钼酸钠 酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Tartrate 酒石酸钠 酸性磷酸酶(acid phosphatase)
(-)-p-Bromotetramisole Oxalate

(-)-对溴四咪唑草酸盐

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Cantharidin 斑蝥素 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)
Microcystin-LR 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶PP1/PP2A (protein Ser/Thr phosphatases PP1 and PP2A)

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1 年稳定;4℃冻存,2 个月稳定。

运输:冰袋运输。

使用方法

1) 使用前室温平衡直至完全溶解【注意:混合物 B 液为溶于 DMSO 的溶液,融化很慢,建议放到 25℃ 水浴锅内促进融化】 ,低速震荡以保证各成分均匀。

2) 按照 1:100 的比例(体积比)加入样品溶液(比如细胞或组织裂解液)中。分步加入 A、B 液:先加 A 液,混匀;再加 B 液,再一次混匀。

注意事项

1)DTT、EDTA和EGTA对正钒酸钠活性的发挥会有影响。

2)本品与常用的去垢剂如1% SDS,Triton,和NP-40兼容。

3)本品具广谱磷酸酶抑制活性,不具有蛋白酶抑制活性。可配合广谱型蛋白酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1610-1ML)一起使用以实现蛋白的全面保护。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1.  混合物B液需要长时间融化?

因混合物B液是溶于DMSO。DMSO融化很慢,尤其是在低温环境下。建议25℃水浴促进融化。第一次使用将B液根据单次用量分装,比如10×100 µl,一方面能延长保存周期,一方面也能缩短融化时间。

2.  为什么磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白的Western条带都非常弱?

此种情况需加入广谱蛋白酶抑制剂混合物(General Protease Inhibitor Cocktail)(货号:MP1610-1ML)以保护总蛋白不被降解。

3.  贵司提供两种磷酸酶抑制剂混合物,广谱磷酸酶抑制剂混合物(货号:MP1612-1ML)和改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(货号:MP1613-1Pack),两者有什么差别?

两者的差别主要在于所含的磷酸酶抑制剂组分不同,后者使用近些年发现的一批天然代谢产物,具有更特别的磷酸酶抑制广度。用户根据自身研究的磷酸化蛋白和细胞或组织特点来选择,大部分应用,两者可相互替换。

 

相关产品

产品名称 产品编号            规格        价格(元)
General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO Stock Solution    

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100×DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×Stock Solution)

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1612-1ML 1ml 380
Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1613-1Pack 1包 450

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG     不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)    1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution 改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)


描述

Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;RochePhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

产品名称 产品编号 规格        价格(元)
Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1613-1Pack       1包 450
MP1613-10Pack 10×1包 3200

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

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产品包装

组分编号 组分名称

产品编号(规格)

MP1613-1Pack(1包)      MP1613-10Pack(10包) 
MP1613-A      混合物A液(100×水溶液)             1ml 10×1ml
MP1613-B 混合物B液(100×DMSO溶液) 1ml 10×1ml

产品描述

细胞内蛋白的磷酸化和去磷酸化是信号转导、细胞增殖、分化和凋亡等重要生理活动的调控开关,这两种作用主要通过蛋白激酶和磷酸酶的相互协调来实现。体外研究中,由于组织或者细胞经裂解会释放出大量的酶原,这些酶原会被激活从而开始消化随之释放的待研究蛋白,不仅影响对蛋白真实水平的了解,甚至由于某些蛋白含量很低,再经进一步降解,无法检测到,干扰对调控机制的正确研究。为此,体外研究,最大限度还原蛋白在细胞内的原始状态极其重要,可通过蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的组合使用来达此目的。

本品A,B两管的形式提供,A管是多种传统磷酸酶抑制剂的混合物,包含氟化钠,正钒酸钠,咪唑,钼酸钠,酒石酸钠等成分;B管是近年发现的一批天然代谢产物,具有更特别的磷酸酶抑制效果,也进一步增加了磷酸化保护范围。本品广谱抑制非特异性的酸性和碱性磷酸酶,以及特异性的酪氨酸磷酸酶,丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸酶等。

本品以100×储存液的形式提供,可用来保护来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种磷酸化蛋白维持本来状态,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
Imidazole 咪唑 蛋白组氨酸磷酸酶(protein histidine phosphatase, PHP)
Sodium Fluoride 氟化钠 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP),酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Orthovanadate

正钒酸钠

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Sodium Molybdate 钼酸钠 酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Tartrate 酒石酸钠 酸性磷酸酶(acid phosphatase)
(-)-p-Bromotetramisole Oxalate

(-)-对溴四咪唑草酸盐

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Cantharidin 斑蝥素 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)
Microcystin-LR 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶PP1/PP2A (protein Ser/Thr phosphatases PP1 and PP2A)

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1 年稳定;4℃冻存,2 个月稳定。

运输:冰袋运输。

使用方法

1) 使用前室温平衡直至完全溶解【注意:混合物 B 液为溶于 DMSO 的溶液,融化很慢,建议放到 25℃ 水浴锅内促进融化】 ,低速震荡以保证各成分均匀。

2) 按照 1:100 的比例(体积比)加入样品溶液(比如细胞或组织裂解液)中。分步加入 A、B 液:先加 A 液,混匀;再加 B 液,再一次混匀。

注意事项

1)DTT、EDTA和EGTA对正钒酸钠活性的发挥会有影响。

2)本品与常用的去垢剂如1% SDS,Triton,和NP-40兼容。

3)本品具广谱磷酸酶抑制活性,不具有蛋白酶抑制活性。可配合广谱型蛋白酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1610-1ML)一起使用以实现蛋白的全面保护。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1.  混合物B液需要长时间融化?

因混合物B液是溶于DMSO。DMSO融化很慢,尤其是在低温环境下。建议25℃水浴促进融化。第一次使用将B液根据单次用量分装,比如10×100 µl,一方面能延长保存周期,一方面也能缩短融化时间。

2.  为什么磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白的Western条带都非常弱?

此种情况需加入广谱蛋白酶抑制剂混合物(General Protease Inhibitor Cocktail)(货号:MP1610-1ML)以保护总蛋白不被降解。

3.  贵司提供两种磷酸酶抑制剂混合物,广谱磷酸酶抑制剂混合物(货号:MP1612-1ML)和改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(货号:MP1613-1Pack),两者有什么差别?

两者的差别主要在于所含的磷酸酶抑制剂组分不同,后者使用近些年发现的一批天然代谢产物,具有更特别的磷酸酶抑制广度。用户根据自身研究的磷酸化蛋白和细胞或组织特点来选择,大部分应用,两者可相互替换。

 

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产品名称 产品编号            规格        价格(元)
General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO Stock Solution    

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100×DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×Stock Solution)

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1612-1ML 1ml 380
Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1613-1Pack 1包 450

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG     不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)    1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution) 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)


描述

General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;RochePhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物;β-甘油磷酸钠(BGP);

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)  
General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100× Stock Solution)  

广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)

MP1612-1ML 1ml 380
MP1612-10ML      10×1ml        2750
MP1612-50ML 50×1ml 11000
MP1612-100ML 100×1ml 18000

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品描述

细胞内蛋白的磷酸化和去磷酸化是信号转导、细胞增殖、分化和凋亡等重要生理活动的调控开关,这两种作用主要通过蛋白激酶和磷酸酶的相互协调来实现。体外研究中,由于组织或者细胞经裂解会释放出大量的酶原,这些酶原会被激活从而开始消化随之释放的待研究蛋白,不仅影响对蛋白真实水平的了解,甚至由于某些蛋白含量很低,再经进一步降解,无法检测到,干扰对调控机制的正确研究。为此,体外研究,最大限度还原蛋白在细胞内的原始状态极其重要,可通过蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的组合使用来达此目的。

本品是多种磷酸酶抑制剂的特殊混合物,包含氟化钠,正钒酸钠,咪唑,钼酸钠,酒石酸钠,焦磷酸钠,β-磷酸甘油等成分,广谱抑制非特异性的酸性和碱性磷酸酶,以及特异性的酪氨酸磷酸酶,丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸酶等。

本品以100×储存液的形式提供,可用来保护来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种磷酸化蛋白维持本来状态,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
Imidazole咪唑 蛋白组氨酸磷酸酶(protein histidine phosphatase, PHP)
Sodium Fluoride 氟化钠 蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase, PSP)

酸性磷酸酶(acid phosphatase)

Sodium Orthovanadate

正钒酸钠

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)
Sodium Molybdate 钼酸钠   酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Tartrate 酒石酸钠  酸性磷酸酶(acid phosphatase)
Sodium Pyrophosphate

焦磷酸钠

蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)
β-Glycerophosphate

β-磷酸甘油

蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(protein serine/threonine phosphatase,PSP)

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年稳定;4℃保存,2个月稳定。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加入样品溶液(比如细胞或组织裂解液)中即可。或者根据实验目的,以及所研究的特定细胞和组织,通过实验进行使用比例的摸索和优化。

注意事项

1)DTT、EDTA和EGTA对正钒酸钠活性的发挥会有影响。

2)本品具广谱磷酸酶抑制活性,不具有蛋白酶抑制活性。可配合广谱型蛋白酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1610-1ML)一起使用以实现蛋白的全面保护。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型   作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG 不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶  10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)    1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate  MP1608-10G     不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 广谱型蛋白酶抑制剂混合物,不含EDTA,100× DMSO储液


描述

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

  产品名称 产品编号 规格           价格(元)   
  General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 

  广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
MP1610-10ML      10×1ml 2750
MP1610-50ML 50×1ml 11000
MP1610-100ML 100×1ml 18000

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品描述

细胞内源蛋白的表达和降解一般维持平衡状态,因此正常生理条件下内源蛋白含量相对稳定。然而体外研究中,蛋白合成过程终止,而细胞裂解得到的粗提物含大量的内源性蛋白酶,依然能发挥蛋白水解活性,影响蛋白得率,进而干扰相关蛋白表达和功能研究。因此,为了防止蛋白纯化过程的蛋白不被这些蛋白酶降解,需要加入蛋白酶抑制剂来抑制其活性。

本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin,广谱抑制来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种蛋白酶活性。本品不含EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),适用于活性中心为金属离子依赖性蛋白的研究。本品兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO储存液的形式提供,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
AEBSF 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆
Aprotinin 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆

Bestatin贝他定(苯丁抑制素)   

氨肽酶(Aminopeptidase),可逆
Leupeptin亮抑酶肽 丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶,可逆
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinase),可逆     
E-64蛋白酶抑制剂 半胱氨酸蛋白酶( cysteine protease),不可逆

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解【注意:DMSO低温下融化较慢,建议25℃下融化】,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加到适量抽提试剂(比如细胞或组织裂解液),混匀,再进行样品蛋白的提取。或根据实验目的以及所培养的特定细胞和组织,对使用比例进行摸索和优化。【注】:按照1:100建议比例,1ml本品可以抑制从20g湿重细胞裂解获得的蛋白酶活性。

注意事项

1)传统蛋白酶抑制剂(比如:AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin)不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(如ATAXIN-3)的功能 【来源文献:Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2)本品具广谱蛋白酶抑制活性,不具有磷酸酶抑制活性。若需要进行磷酸化蛋白研究,请选择广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1612)来满足实验要求。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1. 为什么要用蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)?

本蛋白酶抑制剂混合物属于低毒且全面型的蛋白保护试剂,最大限度保护蛋白使其免于被内源性蛋白酶降解。目前对微量表达蛋白如信号通路蛋白,受体蛋白,使用免疫共沉淀(Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay)等来获取样品,此时蛋白酶抑制剂混合物的加入尤为重要,因其比单一抑制剂(比如PMSF)更为有效。

2. 蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)是否能进一步稀释使用?

蛋白酶活性抑制效果和众多因素有关,比如目标蛋白降解的难易程度,蛋白酶类型和浓度,蛋白酶活性高低,以及抑制剂的浓度都会影响最终的保护效果。本品采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果,建议按照建议比例(1:100)稀释使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制剂混合物,以更低的浓度达到良好的效果,可参照相应比例来进行实验。建议在推荐比例使用上达到理想效果的基础上,可做进一步稀释的摸索和测试。

3. 传统实验常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)与其相比有何优势?

PMSF(苯甲基磺酰氟,CAS:329-98-6)是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛用于细胞裂解纯化蛋白过程。然而,其具有许多明显的缺点,逐步被保护效果更好且更安全的单一蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物所替代。主要缺点1)毒性较高,半致死量为200mg/kg;而其替代物AEBSF,半致死量为2834mg/kg,毒性远低于PMSF十四倍多,同时保持相当的抑制效果,且对很多种丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更迅速;2)半衰期短,在水溶液中只有30min,细胞裂解过程中太容易失效。而蛋白酶抑制剂cocktail不仅仅保护全面且效果持续更加久。

4. DMSO是否会对实验结果产生副作用?

DMSO(二甲基亚砜)基本不会影响实验结果。生物科学领域DMSO为很多生物活性物质的有机溶剂,比如蛋白结晶,免疫共沉淀等要求较高实验中也会使用DMSO。细胞研究中,低温条件下DMSO还是一种广泛使用且优秀的细胞冷冻保护剂。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG    不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)   1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM

 

 

 

General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)


描述

广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

产品标签

AEBSF;Pepstatin A;Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂混合物;Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail;Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制剂混合物; PMSF;

产品信息

  产品名称 产品编号 规格           价格(元)   
  General Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free, 100× DMSO Stock Solution 

  广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DMSO储液)

MP1610-1ML 1ml 380
MP1610-10ML      10×1ml 2750
MP1610-50ML 50×1ml 11000
MP1610-100ML 100×1ml 18000

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的蛋白酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochecOmplete™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的磷酸酶抑制剂cocktail产品专题(含 RochePhosSTOP™)。

温馨提示:见我司(金畔生物)整理的单一蛋白酶/磷酸酶抑制剂产品专题。

产品描述

细胞内源蛋白的表达和降解一般维持平衡状态,因此正常生理条件下内源蛋白含量相对稳定。然而体外研究中,蛋白合成过程终止,而细胞裂解得到的粗提物含大量的内源性蛋白酶,依然能发挥蛋白水解活性,影响蛋白得率,进而干扰相关蛋白表达和功能研究。因此,为了防止蛋白纯化过程的蛋白不被这些蛋白酶降解,需要加入蛋白酶抑制剂来抑制其活性。

本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin,广谱抑制来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种蛋白酶活性。本品不含EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),适用于活性中心为金属离子依赖性蛋白的研究。本品兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO储存液的形式提供,适用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫(共)沉淀(IP/Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay),免疫荧光(IF),免疫组化(IHC),以及激酶研究等多种实验。

产品成分

抑制剂名称 抑制靶点
AEBSF 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆
Aprotinin 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶(serine protease),不可逆

Bestatin贝他定(苯丁抑制素)   

氨肽酶(Aminopeptidase),可逆
Leupeptin亮抑酶肽 丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶,可逆
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinase),可逆     
E-64蛋白酶抑制剂 半胱氨酸蛋白酶( cysteine protease),不可逆

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1)使用前室温平衡直至完全溶解【注意:DMSO低温下融化较慢,建议25℃下融化】,低速震荡以保证各成分均匀。

2)按照1:100的比例(体积比)加到适量抽提试剂(比如细胞或组织裂解液),混匀,再进行样品蛋白的提取。或根据实验目的以及所培养的特定细胞和组织,对使用比例进行摸索和优化。【注】:按照1:100建议比例,1ml本品可以抑制从20g湿重细胞裂解获得的蛋白酶活性。

注意事项

1)传统蛋白酶抑制剂(比如:AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin)不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(如ATAXIN-3)的功能 【来源文献:Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2)本品具广谱蛋白酶抑制活性,不具有磷酸酶抑制活性。若需要进行磷酸化蛋白研究,请选择广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)(货号:MP1612)来满足实验要求。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1. 为什么要用蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)?

本蛋白酶抑制剂混合物属于低毒且全面型的蛋白保护试剂,最大限度保护蛋白使其免于被内源性蛋白酶降解。目前对微量表达蛋白如信号通路蛋白,受体蛋白,使用免疫共沉淀(Co-IP),蛋白下拉(Pull-down assay)等来获取样品,此时蛋白酶抑制剂混合物的加入尤为重要,因其比单一抑制剂(比如PMSF)更为有效。

2. 蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)是否能进一步稀释使用?

蛋白酶活性抑制效果和众多因素有关,比如目标蛋白降解的难易程度,蛋白酶类型和浓度,蛋白酶活性高低,以及抑制剂的浓度都会影响最终的保护效果。本品采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果,建议按照建议比例(1:100)稀释使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制剂混合物,以更低的浓度达到良好的效果,可参照相应比例来进行实验。建议在推荐比例使用上达到理想效果的基础上,可做进一步稀释的摸索和测试。

3. 传统实验常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)与其相比有何优势?

PMSF(苯甲基磺酰氟,CAS:329-98-6)是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛用于细胞裂解纯化蛋白过程。然而,其具有许多明显的缺点,逐步被保护效果更好且更安全的单一蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物所替代。主要缺点1)毒性较高,半致死量为200mg/kg;而其替代物AEBSF,半致死量为2834mg/kg,毒性远低于PMSF十四倍多,同时保持相当的抑制效果,且对很多种丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更迅速;2)半衰期短,在水溶液中只有30min,细胞裂解过程中太容易失效。而蛋白酶抑制剂cocktail不仅仅保护全面且效果持续更加久。

4. DMSO是否会对实验结果产生副作用?

DMSO(二甲基亚砜)基本不会影响实验结果。生物科学领域DMSO为很多生物活性物质的有机溶剂,比如蛋白结晶,免疫共沉淀等要求较高实验中也会使用DMSO。细胞研究中,低温条件下DMSO还是一种广泛使用且优秀的细胞冷冻保护剂。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂:

名称 货号 抑制类型      作用位点 溶解性 建议工作浓度  
PMSF MP1601-1G 可逆 丝氨酸蛋白酶 甲醇、异丙醇 0.1~1 mM
AEBSF HCl MP1602-50MG    不可逆 丝氨酸蛋白酶 0.1~1 mM
Aprotinin MP1603-5MG 可逆 丝氨酸蛋白酶 100~200 nM
Leupeptin MP1604-5MG 可逆 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶    10~100 μM
Pepstatin MP1605-5MG 可逆 天冬氨酸蛋白酶 甲醇 1~20 μM
E-64 MP1606-5MG 不可逆 半胱氨酸蛋白酶 乙醇:水(1:1)   1~20 μM
EDTA MS5503-500G 可逆 金属蛋白酶 2~10 mM
Bestatin MP1607-10MG 可逆 氨肽酶 甲醇 1~10 μM
Sodium Orthovanadate   MP1608-10G 不可逆 酪氨酸和碱性磷酸酶 1~100 mM
Sodium Fluoride MP1609-50G 不可逆 丝/苏氨酸和酸性磷酸酶 1~20 mM