Hoechst 33342/PI凋亡检测试剂盒，JC-1膜电位检测；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒；TUNEL细胞凋亡检测试剂盒；

Hoechst 33342/PI细胞凋亡双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）是一种采用Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）双染进行细胞凋亡与坏死分析的检测试剂盒。检测原理在于：Hoechst 33342是一种活细胞核染料，能穿透正常细胞以及凋亡细胞膜，与DNA结合（最大激发波长为350nm，发射波长为461nm），呈现蓝色荧光。当细胞发生凋亡，染色质发生固缩，染色后的细胞荧光比正常细胞明显增强。而PI是一种死细胞核染料，不能穿透细胞膜，对于具完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。但对于坏死细胞，由于膜的完整性丧失，PI能够穿透进入细胞，与DNA结合（最大激发波长为536nm，发射波长为617nm），呈现红色荧光。经Hoechst 33342/PI双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测，正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光；凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光；坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。

本试剂盒可检测100个样品，每个样本的细胞数量可为0.1~1×06。

产品包装

保存与运输方法

保存：-20℃保存，1年有效。使用频繁可置4℃保存，5个月有效。Hoechst染色液和PI染色液需避光保存。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。

2） Hoechst 33342孵育细胞时间不宜过长，一般控制在20min内。太长容易引起探针的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光与蓝色荧光的比例改变。

3） PI对人体有一定的刺激性，请注意适当防护。

4） 如果要进行组织的凋亡和坏死检测，请将组织消化制备成单细胞悬液后再检测。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，2年有效。 

运输：室温运输。

注意事项

1）本品不是临床药物，只能用于科研用途，不能用于诊断或临床用途。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、细胞样本制备

1.1贴壁细胞

1.1.1 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用；

1.1.2 用胰蛋白酶消化细胞至细胞可以轻轻用移液枪或枪头吹打下来，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有贴壁细胞，并轻轻吹散细胞

1.1.3 收集上述细胞悬液到离心管内，4℃，1000g离心3~5min，使细胞沉至管底，小心吸取上清并丢弃，可留约50μl培养液，以免吸走细胞。【注意】：某些特殊细胞，如果沉淀不充分，可以适当提高离心力或者延长离心时间。

1.1.4 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5ml无菌离心管，4℃，1000g离心3~5min，使细胞沉至管底。

1.1.5 小心吸取上清并丢弃，可留约50μl PBS，以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

1.2 悬浮细胞

1.2.1 4℃，1000g离心3~5min，使细胞沉至管底，小心吸取上清并丢弃，可留约50μl培养液，以免吸走细胞。

1.2.2 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5ml无菌离心管，4℃，1000g离心3~5min，使细胞沉至管底。

1.2.3 小心吸取上清并丢弃，可留约50μl PBS，以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

二、染色前制备

2.1细胞染色缓冲液（1×）的准备：取适量细胞染色缓冲液（2×）与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合，即为细胞染色缓冲液（1×），4℃保存备用。

2.2 细胞重悬：将上述收集好的0.1~1×06细胞，加入0.9ml细胞染色缓冲液（1×），重悬细胞沉淀。

三、Hoechst 33342/PI双染

3.1加入5μl Hoechst 33342染色液，置于37℃水浴，孵育5~15min。

3.2置于冰水冷却，4℃，1000g离心3~5min，使细胞沉至管底，弃上层染色液。

3.3加入0.9ml细胞染色缓冲液（1×），重悬细胞沉淀。

3.4加入5μl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。

【注意】：也可一步法进行染色：加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液，轻轻混匀，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。

四、结果分析

4.1流式细胞仪检测

用流式细胞仪在激发波长400~500nm处检测蓝色荧光，在＞630nm处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

4.2荧光显微镜检测

检测前，4℃，1000g离心3～5min沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色和蓝色荧光。

【注意】：对于贴壁细胞，也可不收集细胞，弃培养液后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液（1×）、Hoechst 33342染色液、PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20～30min。染色后，PBS洗涤一次，再在荧光显微镜下观察。

4.3 结果呈现

正常细胞呈低蓝光/低红光，凋亡细胞呈高蓝光/低红光；坏死细胞呈低蓝光/高红光。

相关产品

Hoechst 33342 活细胞细胞核探针；Hoechst 33258；DAPI；PI 碘化丙啶；7-AAD；CAS：23491-52-3；

产品信息

产品描述

Hoechst 33342，也称为Bisbenzimide H 33342（双苯酰亚胺H 33342），是一种A:T特异性的DNA小沟配基，具有细胞膜渗透性，广泛用于细胞核DNA检测的荧光染料。与DNA结合后产生非常强烈的蓝色荧光，最大激发波长在350nm左右，最大发射波长在461nm左右。与其它Hoechst染料不同，Hoechst 33342由于多一个乙基，具有更强的亲脂性。研究发现可替代几种著名的DNA嵌入剂。

Hoechst 33342可通过流式细胞分选（FACS）进行基于DNA内容物的活细胞分选，可用来监测活细胞的染色质分布，用来检测BrdU插入细胞情况，通过荧光显微镜进行固定细胞观察，和研究凋亡早期和细胞周期分布情况。除了在荧光方面的功能，Hoechst 33342在细胞类型区分方面呈现多样化效应。可用来诱导细胞分化，可逆结合弗兰德红白血病细胞，抑制Topo I（拓扑异构酶I）活性，诱导HL-60细胞的凋亡，以及调控连接肌质网细胞的Ca2+外流并影响细胞分化。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达20mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

产品特性

1）CAS NO：23491-52-3

2）英文同义名：2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole trihydrochloride; bisBenzimide H 33342 trihydrochloride; HOE 33342; Hoechst 33342 bisBenzimide;

3）中文同义名：2′-(4-乙基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5′-二-1H-苯并咪唑三盐酸盐；双苯酰亚胺H 33342三盐酸盐；Hoechst 33342双苯酰亚胺；

4）分子式：C27H28N6O · 3HCl · xH2O

5）分子量：561.93 (anhydrous basis)

6） 纯度：≥95%

7）外观：黄绿色粉末

8）溶解性：溶于水（20 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；350/461 nm（Hoechst 33342-DNA）；

10）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达20mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少1个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

使用方法

1、工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2、固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33342染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33342染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。

3、活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。

注意事项

1）Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），货号：MM1401-5ML）。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Hoechst 33342 活细胞细胞核探针；Hoechst 33258；DAPI；PI 碘化丙啶；7-AAD；CAS：23491-52-3；

产品信息

产品描述

Hoechst 33342，也称为Bisbenzimide H 33342（双苯酰亚胺H 33342），是一种A:T特异性的DNA小沟配基，具有细胞膜渗透性，广泛用于细胞核DNA检测的荧光染料。与DNA结合后产生非常强烈的蓝色荧光，最大激发波长在350nm左右，最大发射波长在461nm左右。与其它Hoechst染料不同，Hoechst 33342由于多一个乙基，具有更强的亲脂性。研究发现可替代几种著名的DNA嵌入剂。

Hoechst 33342可通过流式细胞分选（FACS）进行基于DNA内容物的活细胞分选，可用来监测活细胞的染色质分布，用来检测BrdU插入细胞情况，通过荧光显微镜进行固定细胞观察，和研究凋亡早期和细胞周期分布情况。除了在荧光方面的功能，Hoechst 33342在细胞类型区分方面呈现多样化效应。可用来诱导细胞分化，可逆结合弗兰德红白血病细胞，抑制Topo I（拓扑异构酶I）活性，诱导HL-60细胞的凋亡，以及调控连接肌质网细胞的Ca2+外流并影响细胞分化。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达20mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

产品特性

1）CAS NO：23491-52-3

2）英文同义名：2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole trihydrochloride; bisBenzimide H 33342 trihydrochloride; HOE 33342; Hoechst 33342 bisBenzimide;

3）中文同义名：2′-(4-乙基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5′-二-1H-苯并咪唑三盐酸盐；双苯酰亚胺H 33342三盐酸盐；Hoechst 33342双苯酰亚胺；

4）分子式：C27H28N6O · 3HCl · xH2O

5）分子量：561.93 (anhydrous basis)

6） 纯度：≥95%

7）外观：黄绿色粉末

8）溶解性：溶于水（20 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；350/461 nm（Hoechst 33342-DNA）；

10）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达20mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少1个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

使用方法

1、工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2、固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33342染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33342染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。

3、活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。

注意事项

1）Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），货号：MM1401-5ML）。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Hoechst 33258 活细胞细胞核探针；Hoechst 33342；DAPI；PI 碘化丙啶；7-AAD；CAS：23491-45-4；

产品信息

Hoechst 33258，也称为bisBenzimide H 33258（双苯酰亚胺H33258），是一种通过荧光显微镜和流式细胞仪进行DNA检测的蓝色荧光探针。Hoechst 33258可用于活细胞或固定细胞，也适用于流式细胞术对细胞周期的分析和DNA浓缩的监测。虽然Hoechst 33258比其他衍生物（如Hoechst 33342）的细胞膜渗透性差些，但其能通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线（a standard emission-to-content curve）来定量测量DNA含量。Hoechst 33258的最大激发波长是346nm，最大发射波长为460nm；与双链DNA结合后的最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

产品特性

1）CAS NO：23491-45-4

2）英文同义名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5′-bi-1H-benzimidazol]-2′-yl]-phenol.trihydrochloride;bisBenzimide H 33258trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72;NSC33407;

3）中文同义名：双苯酰亚胺H 33258三盐酸盐；赫斯特荧光染料33258；烟酸己可碱三盐酸盐；甲嗪双苯咪酚三盐酸盐；

4）分子式：C25H24N6O · 3HCl

5）分子量：533.88

6）纯度：≥95%

7）外观：黄色至深黄色粉末

8）溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；352/461 nm（Hoechst 33258-DNA）；

10）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达10mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少1个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

使用方法

1. 工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33258染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

3. 活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

注意事项

1）Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），货号：MM1401-5ML）。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Hoechst 33258 活细胞细胞核探针；Hoechst 33342；DAPI；PI 碘化丙啶；7-AAD；CAS：23491-45-4；

产品信息

Hoechst 33258，也称为bisBenzimide H 33258（双苯酰亚胺H33258），是一种通过荧光显微镜和流式细胞仪进行DNA检测的蓝色荧光探针。Hoechst 33258可用于活细胞或固定细胞，也适用于流式细胞术对细胞周期的分析和DNA浓缩的监测。虽然Hoechst 33258比其他衍生物（如Hoechst 33342）的细胞膜渗透性差些，但其能通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线（a standard emission-to-content curve）来定量测量DNA含量。Hoechst 33258的最大激发波长是346nm，最大发射波长为460nm；与双链DNA结合后的最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

产品特性

1）CAS NO：23491-45-4

2）英文同义名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5′-bi-1H-benzimidazol]-2′-yl]-phenol.trihydrochloride;bisBenzimide H 33258trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72;NSC33407;

3）中文同义名：双苯酰亚胺H 33258三盐酸盐；赫斯特荧光染料33258；烟酸己可碱三盐酸盐；甲嗪双苯咪酚三盐酸盐；

4）分子式：C25H24N6O · 3HCl

5）分子量：533.88

6）纯度：≥95%

7）外观：黄色至深黄色粉末

8）溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；352/461 nm（Hoechst 33258-DNA）；

10）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达10mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少1个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

使用方法

1. 工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33258染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

3. 活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

注意事项

1）Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），货号：MM1401-5ML）。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。