Fluorescein-5-maleimide 荧光素-5-马来酰亚胺;ABD-F;Thiol Dye 巯基染料; WSP-1 (H2S Probe);CAS:75350-46-8;
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
CAS NO. |
规格 |
价格(元) |
Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye)
荧光素-5-马来酰亚胺(巯基染料) |
MX5317-25MG |
75350-46-8 |
25mg |
1980 |
产品描述
荧光素-5-马来酰亚胺(Fluorescein-5-maleimide)是一种活化的荧光分子(Ex/Em=494/518nm),能非常容易的将荧光素连接到蛋白上。马来酰亚胺基团在pH 7的最佳体系内与半胱氨酸侧链上的巯基基团反应,形成一稳定的硫醚键。马来酰亚胺基团在pH 7时与游离巯基反应活性比胺基强~1000倍。而在pH>7.5与伯胺的反应活性提高,且会发生马来酰亚胺基团水解现象。荧光素-5-马来酰亚胺能用来标记蛋白,用于检测构象变化,多亚基复合物的组装和配基结合过程。
产品特性
1) CAS NO:75350-46-8
2) 化学名:1-(3′,6′-Dihydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthen]-5-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione
3) 同义名:5-Maleimido-fluorescein; 5-MF; N-(5-Fluoresceinyl)maleimide; 5-马来酰亚胺荧光素;
4) 分子式:C24H13NO7
5) 分子量:427.37
6) 纯度:>97%
7) Ex/Em:494/518nm
8) 外观:浅橘色至深橘色和浅红色至深红色粉末
9) 溶解性:溶于DMSO、DMF
10) 反应基团:马来酰亚胺,与巯基反应(pH 6.5-7.5)
11)化学结构图:
保存与运输方法
保存:-20℃避光干燥保存,二年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) 马来酰亚胺对湿度很敏感。需将本品保存在-20℃,保持干燥。开盖前一定要将本品放到室温回温,以避免产品受潮而凝结成团。
2) 使用前才配制试剂。不可将试剂保存在水溶液内。
3) 用荧光素-5-马来酰亚胺标记的分子必须含有游离的巯基(-SH)。某些含巯基分子在溶液中可能被氧化,形成二硫键,从而不能与马来酰亚胺反应。二硫键可被还原生成游离巯基。还原后,大部分的还原剂必须在偶联反应前去除。
4) 偶联反应体系内不要引入含巯基组分,因其会与马来酰亚胺反应,进而抑制和降低目的分子的连接率。
5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
标记方法【仅做参考】
需根据具体应用来优化以下标记步骤。
A、 标记蛋白
1) 于20mM 磷酸钠缓冲液,150mM NaCl,pH 7.2或其他适合的缓冲液(pH 6.5-7.5)内准备含巯基样品。为了预防金属催化生成二硫键,体系内加入终浓度5-10mM的EDTA。
2) 往样品内加入摩尔量远高的荧光素-5-马来酰亚胺。通常情况,使用25倍高的摩尔比能得到理想结果。【注意】:荧光素-5-马来酰亚胺能直接加入水溶性溶液(高达1mM浓度)或首先溶解在DMF(10mM)在加入蛋白溶液中。
3) 进行偶联反应,室温2h或4℃过夜。
4) 用截留分子量(MWCO)为10 kD的脱盐柱或透析袋来去除未结合的荧光素。
5) 将偶联好的蛋白或多肽避光保存在4℃,稳定保存高达一个月。或按照单次用量分装,保存在-20℃。
B、 计算标记效率
【注意】:为了得到最佳的结果和精确测定标记率(F/P值),需完全去除未反应的荧光素。有必要稀释少量脱盐或透析样本。
1) 使用1cm比色皿,测定标记蛋白在280nm和495nm处的吸光值。
2) 计算蛋白浓度。
ε=蛋白摩尔吸光系数(比如,IgG的摩尔吸光系数~210,000 M-1cm-1)
Amax=A495
CF=校正系数=A280/Amax=0.3000
×稀释倍数
3) 计算标记效率
ε´=荧光素摩尔吸光系数:68,000 M-1cm-1
摩尔荧光素/摩尔蛋白= × 稀释倍数
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