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Abcam ab184601 Anti-EGFP抗体[F56-6A1.2.3]

发表于由

产品名称

Anti-EGFP抗体[F56-6A1.2.3]

描述

小鼠单克隆抗体[F56-6A1.2.3] to EGFP

宿主

Mouse

经测试应用

适用于:?WB,?ICC/IFmore details

种属反应性

与反应:?Species independent

免疫原

Full length protein corresponding to EGFP aa 1 to the C-terminus. enhanced green fluorescent protein (eGFP). Native protein
Database link:?CAD97424.1

阳性对照

ICC/IF: U-2 OS cells transfected with an EGFR-eGFP fusion protein. WB: Recombinant GFP.

常规说明

The Life Science industry has been in the grips of a reproducibility crisis for a number of years. Abcam is leading the way in addressing this with our range of recombinant monoclonal antibodies and knockout edited cell lines for gold-standard validation. Please check that this product meets your needs before purchasing.

If you have any questions, special requirements or concerns, please send us an inquiry and/or contact our Support team ahead of purchase. Recommended alternatives for this product can be found below, along with publications, customer reviews and Q&As

性能

形式

Liquid

存放说明

Shipped at 4°C. Store at +4°C short term (1-2 weeks). Upon delivery aliquot. Store at -20°C long term. Avoid freeze / thaw cycle.

存储溶液

Preservative: 0.05% Sodium azide
Constituents: 0.1% BSA, PBS

浓度

100 μg 浓度为 1 mg/ml

Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由
产品名称 规格 价格（元）
Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒 20T 650
50T 1350
100T 1980

产品描述

Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是一款用来检测细胞凋亡的试剂盒，可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。本试剂盒包含融合增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的Annexin V，用来检测早期细胞凋亡；以及碘化丙啶（PI），用来检测坏死细胞。

本试剂盒的工作原理在于：磷脂酰丝氨酸（Phosphotidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂。正常细胞中，PS位于细胞膜内面，但当凋亡开始后，PS在磷脂双分子层中的不对称分布逐渐消失并转移到细胞膜表面，从而暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V（Annexin V）是一种分子量约35kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能非常容易的结合PS，且具有高度的亲和性。因此，通过Annexin V与PS的结合与否来判断凋亡发生。另外，PI的引入能辅助区分凋亡早期细胞和晚期凋亡或坏死细胞。PI作为一种活细胞排斥探针，不能穿透具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡早期细胞，但能穿透丧失细胞膜完整性的凋亡晚期细胞或坏死细胞，从而将细胞核染红。因此，将Annexin V-EGFP与PI联合使用时，呈现结果为：正常细胞（Annexin V-EGFP-/PI-），早期凋亡细胞（Annexin V-EGFP+/PI-）；晚期凋亡细胞和坏死细胞同时呈现双阳性（Annexin V-EGFP+/PI+）。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号（规格）
20T 50T 100T
A Annexin V-EGFP 2-8℃避光 100μl 250μl 500μl
B 碘化丙啶溶液 2-8℃避光 200μl 500μl 1ml
C 结合缓冲液（4×） 2-8℃ 4ml 10ml 20ml

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，不可冰冻。其中组分A，B需避光保存。1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 由于细胞凋亡是一个快速过程，染色后请尽快检测，时间过长会导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2） 对于贴壁细胞，需要很好掌控消化步骤。细胞凋亡诱导时贴壁细胞如有漂浮细胞，需同时收集漂浮细胞和贴壁细胞合并染色。处理贴壁细胞时要小心，尽量避免人为造成的细胞损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，导致PI摄入过多；而胰酶消化时间过长，细胞膜也易造成损伤，甚至会影响细胞膜PS与Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，之后倒掉大部分胰酶，利用残留的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3） 实验中若需固定细胞，比如凋亡检测同时还需要检测细胞周期，请不要选用Annexin V-EGFP，可使用Annexin V-FITC，因为固定过程中EGFP会变性导致无荧光。

4） 若样品来源于血液，务必先去除血液中的血小板。因为血小板含有PS，会与Annexin V结合产生假阳性。可使用含EDTA的缓冲液并低速离心去除血小板。

5） 荧光物质易发生淬灭，试剂储存和操作过程中尽量避光。荧光检测时也尽量缩短观察时间。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。 用不含EDTA的胰酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

1.2 用去离子水按照1:3稀释结合缓冲液到1×，比如，5ml结合缓冲液（4×）加入15ml去离子水。

1.3 用结合缓冲液（1×）重新悬浮细胞并调整浓度为1-5×106/ml。

1.4 取100µl的细胞悬液到5ml流式管中，加入5µl Annexin V-EGFP混匀，室温避光孵育5min。

1.5 再加入10µl碘化丙啶溶液，并加400µl结合缓冲液（1×），混匀，尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。

【注意】：方便起见，步骤1.4内可同时加入5µl Annexin V-EGFP和10µl碘化丙啶溶液混匀，室温避光孵育5min。然后加入400µl结合缓冲液（1×）混匀，但需尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。但为了减少实验误差，建议按照1.4-1.5的步骤来操作。因PI受时间影响比较大，细胞标记上PI后毒性会增加。随着时间延长会导致PI染色增加，尤其是检测早期凋亡时，误差会明显加大。建议PI加入后立即开始检测。

二、 染色检测

2.1流式细胞仪分析

1）请根据以下设计实验：

空白管：阴性对照组细胞，不加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。目的用来调节电压。

单染管：阳性对照组细胞，只加Annexin V-EGFP。目的用来调节补偿。

检测管：处理细胞组，加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需的流式数据。

2）对于Annexin V-EGFP（Ex=488nm，Em=530nm），用流式细胞仪的FITC信号检测器（通常F1通道）；对于PI-DNA复合物（Ex=535nm，Em=615nm），用流式细胞仪的PE发射信号检测器（通常F2通道）。

3）用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），EGFP为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型实验结果中，细胞可分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，凋亡早期细胞仅有较强的绿色荧光，凋亡晚期细胞或坏死细胞有绿色和红色的双重荧光染色。

2.2荧光显微镜分析

1)滴一滴用Annexin V-EGFP/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。【注意】：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。探针孵育结束后，可将盖玻片倒置在载玻片上并进行观察。需要在染色结束后尽快（＜1h）进行观察。

2)于荧光显微镜下用双色滤光片（FITC/罗丹明）进行观察。早期凋亡细胞，仅结合Annexin V-EGFP的细胞质膜呈现绿色荧光。而丧失膜完整的细胞在细胞核上被PI染色呈现红光，且在细胞表面（质膜）上因被Annexin V-EGFP染色呈绿色光环。

常见问题

1） Annexin V/PI凋亡试剂盒能够用于检测人或其他动物的细胞凋亡情况？

回复：可以，因Annexin V特异性结合PS，而PS在不同种属间无差异。

2）贴壁细胞做凋亡用胰酶消化对细胞膜有损伤？

回复：低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞2～3次，4℃，1000rpm离心5min， 处理得当的话， 胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，在有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3）贴壁细胞可先染PI然后再消化吗？这样是否可减少由于消化液造成的细胞膜损伤而染上PI的误差？

回复：先加 PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断， 而且PI本身对细胞也是有毒性的， 对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

4）为什么只能用不含 EDTA的胰酶消化贴壁细胞，用含 EDTA的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

回复：因Annexin V是钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，EDTA是一种金属螯合剂。因此EDTA的加入会影响Annexin V活性，进而影响结果。

相关产品

名称 规格
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒 30T
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T

Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是一款用来检测细胞凋亡的试剂盒，可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。本试剂盒包含融合增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的Annexin V，用来检测早期细胞凋亡；以及碘化丙啶（PI），用来检测坏死细胞。

本试剂盒的工作原理在于：磷脂酰丝氨酸（Phosphotidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂。正常细胞中，PS位于细胞膜内面，但当凋亡开始后，PS在磷脂双分子层中的不对称分布逐渐消失并转移到细胞膜表面，从而暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V（Annexin V）是一种分子量约35kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能非常容易的结合PS，且具有高度的亲和性。因此，通过Annexin V与PS的结合与否来判断凋亡发生。另外，PI的引入能辅助区分凋亡早期细胞和晚期凋亡或坏死细胞。PI作为一种活细胞排斥探针，不能穿透具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡早期细胞，但能穿透丧失细胞膜完整性的凋亡晚期细胞或坏死细胞，从而将细胞核染红。因此，将Annexin V-EGFP与PI联合使用时，呈现结果为：正常细胞（Annexin V-EGFP-/PI-），早期凋亡细胞（Annexin V-EGFP+/PI-）；晚期凋亡细胞和坏死细胞同时呈现双阳性（Annexin V-EGFP+/PI+）。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号（规格）
20T 50T 100T
A Annexin V-EGFP 2-8℃避光 100μl 250μl 500μl
B 碘化丙啶溶液 2-8℃避光 200μl 500μl 1ml
C 结合缓冲液（4×） 2-8℃ 4ml 10ml 20ml

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，不可冰冻。其中组分A，B需避光保存。1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 由于细胞凋亡是一个快速过程，染色后请尽快检测，时间过长会导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2） 对于贴壁细胞，需要很好掌控消化步骤。细胞凋亡诱导时贴壁细胞如有漂浮细胞，需同时收集漂浮细胞和贴壁细胞合并染色。处理贴壁细胞时要小心，尽量避免人为造成的细胞损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，导致PI摄入过多；而胰酶消化时间过长，细胞膜也易造成损伤，甚至会影响细胞膜PS与Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，之后倒掉大部分胰酶，利用残留的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3） 实验中若需固定细胞，比如凋亡检测同时还需要检测细胞周期，请不要选用Annexin V-EGFP，可使用Annexin V-FITC，因为固定过程中EGFP会变性导致无荧光。

4） 若样品来源于血液，务必先去除血液中的血小板。因为血小板含有PS，会与Annexin V结合产生假阳性。可使用含EDTA的缓冲液并低速离心去除血小板。

5） 荧光物质易发生淬灭，试剂储存和操作过程中尽量避光。荧光检测时也尽量缩短观察时间。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。 用不含EDTA的胰酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

1.2 用去离子水按照1:3稀释结合缓冲液到1×，比如，5ml结合缓冲液（4×）加入15ml去离子水。

1.3 用结合缓冲液（1×）重新悬浮细胞并调整浓度为1-5×106/ml。

1.4 取100µl的细胞悬液到5ml流式管中，加入5µl Annexin V-EGFP混匀，室温避光孵育5min。

1.5 再加入10µl碘化丙啶溶液，并加400µl结合缓冲液（1×），混匀，尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。

【注意】：方便起见，步骤1.4内可同时加入5µl Annexin V-EGFP和10µl碘化丙啶溶液混匀，室温避光孵育5min。然后加入400µl结合缓冲液（1×）混匀，但需尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。但为了减少实验误差，建议按照1.4-1.5的步骤来操作。因PI受时间影响比较大，细胞标记上PI后毒性会增加。随着时间延长会导致PI染色增加，尤其是检测早期凋亡时，误差会明显加大。建议PI加入后立即开始检测。

二、 染色检测

2.1流式细胞仪分析

1）请根据以下设计实验：

空白管：阴性对照组细胞，不加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。目的用来调节电压。

单染管：阳性对照组细胞，只加Annexin V-EGFP。目的用来调节补偿。

检测管：处理细胞组，加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需的流式数据。

2）对于Annexin V-EGFP（Ex=488nm，Em=530nm），用流式细胞仪的FITC信号检测器（通常F1通道）；对于PI-DNA复合物（Ex=535nm，Em=615nm），用流式细胞仪的PE发射信号检测器（通常F2通道）。

3）用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），EGFP为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型实验结果中，细胞可分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，凋亡早期细胞仅有较强的绿色荧光，凋亡晚期细胞或坏死细胞有绿色和红色的双重荧光染色。

2.2荧光显微镜分析

1)滴一滴用Annexin V-EGFP/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。【注意】：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。探针孵育结束后，可将盖玻片倒置在载玻片上并进行观察。需要在染色结束后尽快（＜1h）进行观察。

2)于荧光显微镜下用双色滤光片（FITC/罗丹明）进行观察。早期凋亡细胞，仅结合Annexin V-EGFP的细胞质膜呈现绿色荧光。而丧失膜完整的细胞在细胞核上被PI染色呈现红光，且在细胞表面（质膜）上因被Annexin V-EGFP染色呈绿色光环。

常见问题

1） Annexin V/PI凋亡试剂盒能够用于检测人或其他动物的细胞凋亡情况？

回复：可以，因Annexin V特异性结合PS，而PS在不同种属间无差异。

2）贴壁细胞做凋亡用胰酶消化对细胞膜有损伤？

回复：低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞2～3次，4℃，1000rpm离心5min， 处理得当的话， 胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，在有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3）贴壁细胞可先染PI然后再消化吗？这样是否可减少由于消化液造成的细胞膜损伤而染上PI的误差？

回复：先加 PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断， 而且PI本身对细胞也是有毒性的， 对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

4）为什么只能用不含 EDTA的胰酶消化贴壁细胞，用含 EDTA的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

回复：因Annexin V是钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，EDTA是一种金属螯合剂。因此EDTA的加入会影响Annexin V活性，进而影响结果。

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名称 规格
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
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Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒 30T
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T

Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是一款用来检测细胞凋亡的试剂盒，可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。本试剂盒包含融合增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的Annexin V，用来检测早期细胞凋亡；以及碘化丙啶（PI），用来检测坏死细胞。

本试剂盒的工作原理在于：磷脂酰丝氨酸（Phosphotidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂。正常细胞中，PS位于细胞膜内面，但当凋亡开始后，PS在磷脂双分子层中的不对称分布逐渐消失并转移到细胞膜表面，从而暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V（Annexin V）是一种分子量约35kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能非常容易的结合PS，且具有高度的亲和性。因此，通过Annexin V与PS的结合与否来判断凋亡发生。另外，PI的引入能辅助区分凋亡早期细胞和晚期凋亡或坏死细胞。PI作为一种活细胞排斥探针，不能穿透具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡早期细胞，但能穿透丧失细胞膜完整性的凋亡晚期细胞或坏死细胞，从而将细胞核染红。因此，将Annexin V-EGFP与PI联合使用时，呈现结果为：正常细胞（Annexin V-EGFP-/PI-），早期凋亡细胞（Annexin V-EGFP+/PI-）；晚期凋亡细胞和坏死细胞同时呈现双阳性（Annexin V-EGFP+/PI+）。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号（规格）
20T 50T 100T
A Annexin V-EGFP 2-8℃避光 100μl 250μl 500μl
B 碘化丙啶溶液 2-8℃避光 200μl 500μl 1ml
C 结合缓冲液（4×） 2-8℃ 4ml 10ml 20ml

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，不可冰冻。其中组分A，B需避光保存。1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 由于细胞凋亡是一个快速过程，染色后请尽快检测，时间过长会导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2） 对于贴壁细胞，需要很好掌控消化步骤。细胞凋亡诱导时贴壁细胞如有漂浮细胞，需同时收集漂浮细胞和贴壁细胞合并染色。处理贴壁细胞时要小心，尽量避免人为造成的细胞损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，导致PI摄入过多；而胰酶消化时间过长，细胞膜也易造成损伤，甚至会影响细胞膜PS与Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，之后倒掉大部分胰酶，利用残留的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3） 实验中若需固定细胞，比如凋亡检测同时还需要检测细胞周期，请不要选用Annexin V-EGFP，可使用Annexin V-FITC，因为固定过程中EGFP会变性导致无荧光。

4） 若样品来源于血液，务必先去除血液中的血小板。因为血小板含有PS，会与Annexin V结合产生假阳性。可使用含EDTA的缓冲液并低速离心去除血小板。

5） 荧光物质易发生淬灭，试剂储存和操作过程中尽量避光。荧光检测时也尽量缩短观察时间。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。 用不含EDTA的胰酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

1.2 用去离子水按照1:3稀释结合缓冲液到1×，比如，5ml结合缓冲液（4×）加入15ml去离子水。

1.3 用结合缓冲液（1×）重新悬浮细胞并调整浓度为1-5×106/ml。

1.4 取100µl的细胞悬液到5ml流式管中，加入5µl Annexin V-EGFP混匀，室温避光孵育5min。

1.5 再加入10µl碘化丙啶溶液，并加400µl结合缓冲液（1×），混匀，尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。

【注意】：方便起见，步骤1.4内可同时加入5µl Annexin V-EGFP和10µl碘化丙啶溶液混匀，室温避光孵育5min。然后加入400µl结合缓冲液（1×）混匀，但需尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。但为了减少实验误差，建议按照1.4-1.5的步骤来操作。因PI受时间影响比较大，细胞标记上PI后毒性会增加。随着时间延长会导致PI染色增加，尤其是检测早期凋亡时，误差会明显加大。建议PI加入后立即开始检测。

二、 染色检测

2.1流式细胞仪分析

1）请根据以下设计实验：

空白管：阴性对照组细胞，不加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。目的用来调节电压。

单染管：阳性对照组细胞，只加Annexin V-EGFP。目的用来调节补偿。

检测管：处理细胞组，加Annexin V-EGFP和碘化丙啶溶液。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需的流式数据。

2）对于Annexin V-EGFP（Ex=488nm，Em=530nm），用流式细胞仪的FITC信号检测器（通常F1通道）；对于PI-DNA复合物（Ex=535nm，Em=615nm），用流式细胞仪的PE发射信号检测器（通常F2通道）。

3）用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），EGFP为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型实验结果中，细胞可分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，凋亡早期细胞仅有较强的绿色荧光，凋亡晚期细胞或坏死细胞有绿色和红色的双重荧光染色。

2.2荧光显微镜分析

1)滴一滴用Annexin V-EGFP/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。【注意】：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。探针孵育结束后，可将盖玻片倒置在载玻片上并进行观察。需要在染色结束后尽快（＜1h）进行观察。

2)于荧光显微镜下用双色滤光片（FITC/罗丹明）进行观察。早期凋亡细胞，仅结合Annexin V-EGFP的细胞质膜呈现绿色荧光。而丧失膜完整的细胞在细胞核上被PI染色呈现红光，且在细胞表面（质膜）上因被Annexin V-EGFP染色呈绿色光环。

常见问题

1） Annexin V/PI凋亡试剂盒能够用于检测人或其他动物的细胞凋亡情况？

回复：可以，因Annexin V特异性结合PS，而PS在不同种属间无差异。

2）贴壁细胞做凋亡用胰酶消化对细胞膜有损伤？

回复：低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞2～3次，4℃，1000rpm离心5min， 处理得当的话， 胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，在有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3）贴壁细胞可先染PI然后再消化吗？这样是否可减少由于消化液造成的细胞膜损伤而染上PI的误差？

回复：先加 PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断， 而且PI本身对细胞也是有毒性的， 对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

4）为什么只能用不含 EDTA的胰酶消化贴壁细胞，用含 EDTA的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

回复：因Annexin V是钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，EDTA是一种金属螯合剂。因此EDTA的加入会影响Annexin V活性，进而影响结果。

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名称 规格
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒 30T
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T

CAS：205391-02-2 Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白

发表于由

DAF-2 DA；DAF-FM DA；一氧化氮荧光探针；NO probe；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；SNP 硝普酸钠；NO donor；CAS：205391-02-2

产品信息

产品名称

 规格

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 10μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 50μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 100μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 500μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 1mg

背景描述

绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

产品描述

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

产品重溶

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

注意事项

1） 我司可定制生产低内毒素的重组EGFP（起始定制量100μg）。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录 I. 荧光活性

相关产品

名称 规格
Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白 10μg
Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物 1mg
R-Phycoerythrin (PE) 藻红蛋白 1mg
Crosslinked Allophycocyanin (Crosslinked APC) 交联别藻蓝蛋白 1mg
Allophycocyanin (APC) 别藻蓝蛋白 1mg

Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白

发表于由

DAF-2 DA；DAF-FM DA；一氧化氮荧光探针；NO probe；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；SNP 硝普酸钠；NO donor；CAS：205391-02-2

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EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 10μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 50μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 100μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 500μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 1mg

【温馨提示】：可根据用户需求提供定制包装，欢迎洽谈。

背景描述

绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

产品描述

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

产品重溶

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

注意事项

1） 我司可定制生产低内毒素的重组EGFP（起始定制量100μg）。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录 I. 荧光活性

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Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白 10μg
Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物 1mg
R-Phycoerythrin (PE) 藻红蛋白 1mg
Crosslinked Allophycocyanin (Crosslinked APC) 交联别藻蓝蛋白 1mg
Allophycocyanin (APC) 别藻蓝蛋白 1mg

CAS：205391-02-2 SNP 硝普酸钠；NO donor Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白

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DAF-2 DA；DAF-FM DA；一氧化氮荧光探针；NO probe；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；SNP 硝普酸钠；NO donor；CAS：205391-02-2

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EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 10μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 50μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 100μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 500μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 1mg

【温馨提示】：可根据用户需求提供定制包装，欢迎洽谈。

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绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

产品描述

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

产品重溶

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

注意事项

1） 我司可定制生产低内毒素的重组EGFP（起始定制量100μg）。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录 I. 荧光活性

相关产品

名称 规格
Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白 10μg
Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物 1mg
R-Phycoerythrin (PE) 藻红蛋白 1mg
Crosslinked Allophycocyanin (Crosslinked APC) 交联别藻蓝蛋白 1mg
Allophycocyanin (APC) 别藻蓝蛋白 1mg

Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白

发表于由

DAF-2 DA；DAF-FM DA；一氧化氮荧光探针；NO probe；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；SNP 硝普酸钠；NO donor；CAS：205391-02-2

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产品名称

 规格

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 10μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 50μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 100μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 500μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 1mg

【温馨提示】：可根据用户需求提供定制包装，欢迎洽谈。

背景描述

绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

产品描述

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

产品重溶

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

注意事项

1） 我司可定制生产低内毒素的重组EGFP（起始定制量100μg）。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录 I. 荧光活性

相关产品

名称 规格
Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白 10μg
Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物 1mg
R-Phycoerythrin (PE) 藻红蛋白 1mg
Crosslinked Allophycocyanin (Crosslinked APC) 交联别藻蓝蛋白 1mg
Allophycocyanin (APC) 别藻蓝蛋白 1mg

Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白

发表于由

DAF-2 DA；DAF-FM DA；一氧化氮荧光探针；NO probe；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；SNP 硝普酸钠；NO donor；CAS：205391-02-2

产品信息

产品名称

 规格

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 10μg

EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白

 50μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 100μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 500μg
EGFP 重组增强型绿色荧光蛋白 1mg

【温馨提示】：可根据用户需求提供定制包装，欢迎洽谈。

背景描述

绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

产品描述

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。 

运输：冰袋运输。

产品重溶

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

注意事项

1） 我司可定制生产低内毒素的重组EGFP（起始定制量100μg）。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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相关产品

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Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白 10μg
Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物 1mg
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Crosslinked Allophycocyanin (Crosslinked APC) 交联别藻蓝蛋白 1mg
Allophycocyanin (APC) 别藻蓝蛋白 1mg

pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

发表于由

描述

pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

产品信息：

货号

 产品名称 规格   价格（元）   

MF3725-2UG      

 pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体     2μg

1000
MF3725-5UG pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg

1200

基本信息

载体用途：                

 植物表达载体

载体大小：

 4530bp
原核抗性：

氨苄青霉素（Ampicillin, Amp）

克隆菌株：

 DH5α

荧光标记：

 EGFP（绿色荧光）
启动子：

CaMV 35S

复制子：

ori
终止子：

NOS

表达水平：

 高

载体拷贝数：

高
5’测序引物：

CaMV35S-f
3’测序引物：

pEGFP-N-3′

质粒图谱


保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号 产品名称 规格
MF3701-5UG         pCAMBIA1300 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3702-5UG pCAMBIA1301 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3703-5UG pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3704-5UG pCAMBIA1305.2 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3706-5UG pCAMBIA2300 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3707-5UG pCAMBIA2301 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3721-5UG pBI121 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3722-5UG pBI121-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3724-5UG pBI221 Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF3725-5UG pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg
MF2311-2000UL DH5α Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 20×100μl      
MF2451-1000UL MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2453-1000UL C58C1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2455-1000UL K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2457-1000UL Ar A4 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞              10×100μl
MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2461-1000UL Ar 1193 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2301-1000UL EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
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pBI121-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

发表于由

描述

pBI121-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

产品信息：

货号 产品名称 规格          价格（元）  
MF3722-5UG     pBI121-EGFP Plant Expression Vector植物表达载体    5μg 1500

基本信息

载体用途： 植物双元表达载体
载体大小： 13612bp
原核抗性： 卡那霉素（Kanamycin, Kan）
克隆菌株： Top10、DH5α
荧光标记： EGFP（绿色荧光）
启动子： CaMV 35S
复制子： oriV
终止子： NOS
表达水平： 高
载体拷贝数：   低
5’测序引物： CaMV35S-f (GACGCACAATCCCACTATCC)
3’测序引物： pEGFP-N-3′ (CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG)

质粒图谱

保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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MF2302-1000UL EHA105 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2303-1000UL LBA4404 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2304-1000UL GV3101 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2305-1000UL AGL1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

 

 

pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

发表于由

描述

pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体

产品信息：

货号

 产品名称 规格   价格（元）   

MF3725-2UG      

 pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体     2μg

1000
MF3725-5UG pBI221-EGFP Plant Expression Vector 植物表达载体 5μg

1200

基本信息

载体用途：                

 植物表达载体

载体大小：

 4530bp
原核抗性：

氨苄青霉素（Ampicillin, Amp）

克隆菌株：

 DH5α

荧光标记：

 EGFP（绿色荧光）
启动子：

CaMV 35S

复制子：

ori
终止子：

NOS

表达水平：

 高

载体拷贝数：

高
5’测序引物：

CaMV35S-f
3’测序引物：

pEGFP-N-3′

质粒图谱


保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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pBARGPE1-EGFP Vector 真菌表达载体

发表于由

描述

pBARGPE1-EGFP Vector 真菌表达载体

产品信息： 

货号

产品名称

规格

价格（元）

MF3400-2UG

pBARGPE1-EGFP Vector 真菌表达载体

2μg

1800

基本信息

载体用途： 丝状真菌表达载体（质粒）
载体大小： 6226bp
原核抗性： Amp
克隆菌株： DH5α
荧光标记： EGFP（绿色荧光）
启动子： gpdA, TrpC
复制子： pUC ori
终止子： trpC
表达宿主： 丝状真菌
真核抗性： Bar
诱导方式： 无需诱导
5′ 测序引物： 根据全序列设计引物
3′ 测序引物： 根据全序列设计引物

质粒图谱

 保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

质粒序列

LOCUS       Exported                6226 bp ds-DNA     circular SYN 30-AUG-2016

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    pBARGPE1-EGFP

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 6226)

  AUTHORS   .

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4

            http://www.miaolingbio.com

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..6226

                     /organism=”synthetic DNA construct”

                     /mol_type=”other DNA”

     primer_bind     18..34

                     /note=”KS primer”

                     /note=”common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants”

     CDS             complement(55..774)

                     /codon_start=1

                     /product=”enhanced GFP”

                     /note=”EGFP”

                     /note=”mammalian codon-optimized”

                     /translation=”MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL

                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD

                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK

                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL

                     EFVTAAGITLGMDELYK”

     primer_bind     789..805

                     /note=”KS primer”

                     /note=”common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants”

     misc_feature    complement(855..1539)

                     /note=”gpdA Promoter”

     misc_feature    1754..1894

                     /note=”bom”

                     /note=”basis of mobility region from pBR322″

     rep_origin      complement(2080..2668)

                     /direction=LEFT

                     /note=”ori”

                     /note=”high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication”

     CDS             complement(2839..3699)

                     /codon_start=1

                     /gene=”bla”

                     /product=”beta-lactamase”

                     /note=”AmpR”

                     /note=”confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics”

                     /translation=”MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW”

     promoter        complement(3700..3804)

                     /gene=”bla”

                     /note=”AmpR promoter”

     promoter        3910..4011

                     /gene=”S. cerevisiae TRP1″

                     /note=”TRP1 promoter”

     misc_feature    4102..4487

                     /note=”TrpC Promotor”

     CDS             4488..5039

                     /codon_start=1

                     /gene=”Streptomyces hygroscopicus bar”

                     /product=”phosphinothricin acetyltransferase”

                     /note=”Bar”

                     /note=”confers resistance to bialophos or phosphinothricin”

                     /translation=”MSPERRPADIRRATEADMPAVCTIVNHYIETSTVNFRTEPQEPQE

                     WTDDLVRLRERYPWLVAEVDGEVAGIAYAGPWKARNAYDWTAESTVYVSPRHQRTGLGS

                     TLYTHLLKSLEAQGFKSVVAVIGLPNDPSVRMHEALGYAPRGMLRAAGFKHGNWHDVGF

                     WQLDFSLPVPPRPVLPVTEI”

     protein_bind    5431..5464

                     /bound_moiety=”Cre recombinase”

                     /note=”loxP”

                     /note=”Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 

                     sequence (GCATACAT).”

     protein_bind    5542..5575

                     /bound_moiety=”Cre recombinase”

                     /note=”loxP”

                     /note=”Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 

                     sequence (GCATACAT).”

     misc_feature    5969..6199

                     /note=”trpC terminator”

ORIGIN

        1 ggtaccgggc cccccctcga ggtcgacggt atcgataagc ttgatatcga attcttactt

       61 gtacagctcg tccatgccga gagtgatccc ggcggcggtc acgaactcca gcaggaccat

      121 gtgatcgcgc ttctcgttgg ggtctttgct cagggcggac tgggtgctca ggtagtggtt

      181 gtcgggcagc agcacggggc cgtcgccgat gggggtgttc tgctggtagt ggtcggcgag

      241 ctgcacgctg ccgtcctcga tgttgtggcg gatcttgaag ttcaccttga tgccgttctt

      301 ctgcttgtcg gccatgatat agacgttgtg gctgttgtag ttgtactcca gcttgtgccc

      361 caggatgttg ccgtcctcct tgaagtcgat gcccttcagc tcgatgcggt tcaccagggt

      421 gtcgccctcg aacttcacct cggcgcgggt cttgtagttg ccgtcgtcct tgaagaagat

      481 ggtgcgctcc tggacgtagc cttcgggcat ggcggacttg aagaagtcgt gctgcttcat

      541 gtggtcgggg tagcggctga agcactgcac gccgtaggtc agggtggtca cgagggtggg

      601 ccagggcacg ggcagcttgc cggtggtgca gatgaacttc agggtcagct tgccgtaggt

      661 ggcatcgccc tcgccctcgc cggacacgct gaacttgtgg ccgtttacgt cgccgtccag

      721 ctcgaccagg atgggcacca ccccggtgaa cagctcctcg cccttgctca ccatggatcc

      781 tctagagtcg aggtcgacgg tatcgataag cttgattaaa ggttcttgga tgggaagatg

      841 aatatactga agatgggaaa agaaagagaa aagaaaagag cagctggtgg ggagagcagg

      901 aaaatatggc aacaaatgtt ggactgacgc aacgaccttg tcaaccccgc cgacacaccg

      961 ggcggacaga cggggcaaag ctgcctacca gggactgagg gacctcagca ggtcgagtgc

     1021 agagcaccgg atgggtcgac tgccagcttg tgttcccggt ctgcgccgct ggccagctcc

     1081 tgagcggcct ttccggtttc atacaccggg caaagcagga gaggcacgat atttggacgc

     1141 cctacagatg ccggatgggc caattaggga gcttacgcgc cgggtactcg ctctacctac

     1201 ttcggagaag gtactatctc gtgaatcttt taccagatcg gaagcaattg gacttctgta

     1261 cctaggttaa tggcatgcta tttcgccgac ggctatacac ccctggcttc acattctcct

     1321 tcgcttactg ccggtgattc gatgaagctc catattctcc gatgatgcaa tagattcttg

     1381 gtcaacgagg ggcacaccag cctttccact tcggggcgga ggggcggccg gtcccggatt

     1441 aataatcatc cactgcacct cagagccgcc agagctgtct ggcgcagtgg cgcttattac

     1501 tcagcccttc tctctgcgtc cgtccgtctc tccgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg

     1561 gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagagat ctctgcctcg

     1621 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag

     1681 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg

     1741 gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct

     1801 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc

     1861 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga

     1921 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat

     1981 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca

     2041 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc

     2101 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata

     2161 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc

     2221 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc

     2281 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga

     2341 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc

     2401 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag

     2461 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag

     2521 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag

     2581 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca

     2641 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga

     2701 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat

     2761 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga

     2821 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg

     2881 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga

     2941 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc

     3001 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac

     3061 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc

     3121 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc

     3181 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc

     3241 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt

     3301 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc

     3361 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg

     3421 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag

     3481 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat

     3541 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc

     3601 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa

     3661 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta

     3721 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa

     3781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga

     3841 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct

     3901 tcaagaatta attcggtcga aaaaagaaaa ggagagggcc aagagggagg gcattggtga

     3961 ctattgagca cgtgagtata cgtgattaag cacacaaagg cagcttggag tatgtctgtt

     4021 attaatttca caggtagttc tggtccattg gtgaaagttt gcggcttgca gagcacagag

     4081 gccgcagaat gtgctctaga ctcgacagaa gatgatattg aaggagcact ttttgggctt

     4141 ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg

     4201 agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc

     4261 cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg

     4321 acattattat catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa

     4381 gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat

     4441 ctgacttacc tattctaccc aagcaaagct tcgattagga agtaaccatg agcccagaac

     4501 gacgcccggc cgacatccgc cgtgccaccg aggcggacat gccggcggtc tgcaccatcg

     4561 tcaaccacta catcgagaca agcacggtca acttccgtac cgagccgcag gaaccgcagg

     4621 agtggacgga cgacctcgtc cgtctgcggg agcgctatcc ctggctcgtc gccgaggtgg

     4681 acggcgaggt cgccggcatc gcctacgcgg gcccctggaa ggcacgcaac gcctacgact

     4741 ggacggccga gtcgaccgtg tacgtctccc cccgccacca gcggacggga ctgggctcca

     4801 cgctctacac ccacctgctg aagtccctgg aggcacaggg cttcaagagc gtggtcgctg

     4861 tcatcgggct gcccaacgac ccgagcgtgc gcatgcacga ggcgctcgga tatgcccccc

     4921 gcggcatgct gcgggcggcc ggcttcaagc acgggaactg gcatgacgtg ggtttctggc

     4981 agctggactt cagcctgccg gtaccgcccc gtccggtcct gcccgtcacc gagatctgat

     5041 ccgtcgacct gcagatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt

     5101 tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat

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