描述
DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein
脱氧核糖核酸酶I (DNase I),来源于牛胰腺
关键词:
Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9
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产品编号 |
规格 |
储存 |
价格 |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein
脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺 |
MF0402-10MG |
10MG |
-20ºC |
250 |
MF0402-50MG |
50MG |
-20ºC |
680 |
产品描述
脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸,平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。
脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。
本品来自牛胰腺,亲和色谱纯化制备所得,常用于去除蛋白或RNA样品中的DNA,或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以冻干粉形式供应,比活≥500 Kunit Units/mg蛋白。
产品特性
1) CAS NO:9003-98-9
2) 分子量:~31 kDa
3) 同义名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脱氧核糖核酸酶A
4) 比活力:≥500 Kunit Units/mg protein
5) 活力定义:在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反应缓冲体系中,37℃,10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。
6) 激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+
7) 抑制剂:EGTA,EDTA,盐离子浓度(>100mM)都能降低DNase活性
8) 热失活:含终止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,处理10min
9) 溶解性:溶于缓冲液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)
保存与运输方法
保存:冻干粉-20℃干燥冻存,至少3年稳定。
运输:冰袋运输。
使用方法
一、 储存液制备
将低温保存的本品置于室温回温至少20min,低速短时离心后,加入适量缓冲液配制成至少≥1mg/ml储存液(如:20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油),根据一定用量分装置于-20℃保存,至少1年稳定。
二、 反应缓冲液制备
建议1×反应缓冲液:40mM Tris-HCl(pH 8.0), 2.5mM (up to 10mM) MgSO4,1mM (up to 10mM) CaCl2
【注意】:当起始原料含EGTA,EDTA,其他螯合剂,和/或高浓度盐离子,此时反应缓冲液需更高浓度的Mg2+和Ca2+。
三、使用步骤(作为参考,具体实验可做适当调整)
2.1 往一个RNase-free PCR管内加入:1µg RNA样本;49 µl 1×反应缓冲液;1 µl DNase I, 1 unit/ml;【注意:酶的实际比活力请见产品标签】,混匀。
2.2 37℃孵育10-15min。【注意:消化时间不要超过15min或消化温度不要高于37℃,否则残留的RNase A污染可能会开始降解RNA】
2.3 加入1µl终止液(20mM EGTA,pH 8.0)结合Ca2+和Mg2+,之后于65-70℃失活10min,终止反应。【注意:必须在热失活之前加入终止液】
注意事项
1) 在不同的反应缓冲体系内,用来完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同,请根据具体的工作体系或实验经验来决定。【注意:盐浓度>100mM会降低DNase I活性】
2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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货号 |
名称 |
规格 |
MF0402-10MG |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein |
10MG |
MF0401-15KU |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein |
15KU |
MF0203-100MG |
Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas |
100mg |
MP1509-25KU |
Benzonase Nuclease全能核酸酶 |
25KU |
MF0201-100MG |
Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K |
100mg |
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。