闪胶,Lonza试剂代理,Lonza试剂列表

产品货号 产品名称 产品规格
50462 FlashGel?上样燃料  5 x 1ml
50473 FlashGel? DNA Marker 100bp – 4kb 500μl
50475 FlashGel? QuantLadder 100bp-1.5kb 250μl
50571 甲醛样品缓冲液 5×1ml
50577 FlashGel? RNA Marker 0.5kb-9kb 50μl
51200 AccuGENE? 分子生物学级水 1L
57023 FlashGel? DNA 预制胶盒 9/包
57024 FlashGel? RNA启动试剂盒 kit
57024 FlashGel?槽

ABI 4458441 resDNASEQ 定量 NS0 DNA 试剂盒

The resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit is a quantitative PCR (qPCR)-based system for the detection of host cell DNA from NS0 (murine myeloma) cells, an expression system commonly used for the production of vaccines. Reliable and rapid, the resDNASEQ? system enables sensitive (as low as 1.5 pg DNA/mL test sample) and specific quantitation of NS0 cell DNA. This performance helps ensure a high degree of confidence in quantitation data obtained from a broad range of sample types, from in-process samples to final product, whether the sample contains high molecular weight or sheared DNA.

检测方法

引物-探针检测

产品规格

瓶、管

No. of Reactions

100 次反应

PCR 方法

qPCR

宿主细胞

NS0

包括

Assay Kit only

标签或染料

FAM

引物探针兼容性

TaqMan?

产品线

resDNASEQ?

运输条件

干冰

Unit Size

100 reactions

Features of the?resDNASEQ Quantitative NS0 DNA Kit include:
? Highly sensitive quantitation using proven TaqMan? real-time qPCR technology
? Consistent performance across the expected range of DNA fragment sizes
? Integrated system includes sample preparation kit, master mix, TaqMan? primer/probe mix, and NS0 genomic DNA standard

This kit is?available?with or without sample preparation reagents in the form of a PrepSEQ? Residual DNA Sample Preparation Kit, which is optimized for highly efficient residual DNA recovery from complex mixtures of proteins, buffers, and salts.

The resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit is designed to provide highly sensitive detection of NS0 DNA, allowing you to use small sample volumes to generate accurate results. The broad linear range of TaqMan? real-time qPCR technology allows you to test samples with variable levels of NS0 DNA in the same assay, such as in-process samples with higher amounts of DNA or bulk drug substance with very low amounts.

Easy to use, results in under 4 hours
The easy workflow of the resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit consists of sample preparation, assay setup, and instrument run and data analysis—all of which you can perform in under 4 hours. Start by extracting DNA from your in-process purification and drug substance samples. Then perform qPCR analysis to compare the amount of NS0 DNA in your test samples to a standard curve generated with known amounts of purified NS0 genomic DNA standard. The resDNASEQ? system includes almost everything you need to carry out these steps, from sample preparation kit to master mix to TaqMan? primer/probe mix to NS0 genomic DNA standard, as well as step-by-step instructions.

Specific to NS0 DNA, no cross-reactivity with unrelated DNA
The target of the assay is highly specific—it only detects a NS0-specific region of a multicopy genetic element. We selected this region using extensive bioinformatic analysis of multiple related and unrelated species.

Consistent performance even with fragmented DNA
For accurate quantitation of residual NS0 DNA, assay results must be unaffected by the size of the DNA molecules present in the test sample. With the resDNASEQ? system you get consistent assay performance across a range of DNA fragment sizes.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

ABI 4464336 resDNASEQ 定量巴斯德毕赤酵母 DNA 试剂盒

Features of the resDNASEQ Quantitative Pichia pastoris DNA Kit include:
? Highly sensitive quantitation using proven TaqMan? real-time qPCR technology
? Consistent performance across the expected range of DNA fragment sizes
? Includes master mix, TaqMan? primer/probe mix, and Pichia pastoris genomic DNA standard

This kit is?available with or without sample preparation reagents in the form of a PrepSEQ? Residual DNA Sample Preparation Kit, which is optimized for highly efficient residual DNA recovery from complex mixtures of proteins, buffers, and salts.

The resDNASEQ? Quantitative Pichia pastoris DNA Kit is designed to provide highly sensitive detection of Pichia pastoris DNA, allowing you to use small sample volumes to generate accurate results. The broad linear range of TaqMan? real-time qPCR technology allows you to test samples with variable levels of Pichia pastoris DNA in the same assay, such as in-process samples with higher amounts of DNA or bulk drug substance with very low amounts.

Easy to use
With the resDNASEQ? Quantitative Pichia pastoris DNA Kit you can perform qPCR analysis to compare the amount of Pichia pastoris DNA in your test samples to a standard curve generated with known amounts of purified Pichia pastoris genomic DNA standard. The resDNASEQ? kit includes almost everything you need to carry out these steps, from TaqMan? primer/probe mix to Pichia pastoris genomic DNA standard, as well as step-by-step instructions.

Specific to Pichia pastoris DNA, no cross-reactivity with unrelated DNA
The target of the assay is highly specific—it only detects a Pichia pastoris-specific region of a multicopy genetic element. We selected this region using extensive bioinformatic analysis of multiple related and unrelated species.

Consistent performance even with fragmented DNA

For accurate quantitation of residual Pichia pastoris DNA, assay results must be unaffected by the size of the DNA molecules present in the test sample. With the resDNASEQ? system you get consistent assay performance across a range of DNA fragment sizes.

内容与储存

1 管 TaqMan? 检测混合物
1 管预混液
1 管定量基因组 DNA 标准品
1 瓶 DNA 稀释缓冲液
1 管阴性对照品水

ABI 4460366 resDNASEQ定量E. coli DNA试剂盒结合 PrepSEQ残 留DNA样品制备试剂盒

—resDNASEQ ?—大肠杆菌残留 DNA 定量系统的这种基于定量 PCR (qPCR) 的试剂盒部分可对来自大肠杆菌表达系统的宿主细胞 DNA 进行高度灵敏定量,通常在 4 小时内即可完成。

该试剂盒是一个集成系统的一部分,该系统包括样品制备、TaqMan? 分析和预混液、标准 DNA、仪器和软件。该系统通过将高回收率的 PrepSEQ? 样品制备和基于 TaqMan? 检测的残留 DNA 定量分析结合在一起,克服了传统方法的局限性。

?采用经验证的 TaqMan? 实时 qPCR 技术进行高灵敏度定量测定(图 1)
?手动和自动制备样品,经优化以从复杂样品基质中定量回收(表 1)
?在 DNA 片段大小的预期范围内具有一致性能(图 2)
?样品至结果的集成系统,包括样品制备、预混液、TaqMan ?引物/探针混合物和基因组 DNA 标准品

快速灵敏检测大肠杆菌 DNA
resDNASEQ ?大肠杆菌残留 DNA 定量系统是一种基于定量 PCR (qPCR) 的系统,用于从大肠杆菌中检测宿主细胞 DNA,大肠杆菌是一种常用于生产重组蛋白的表达系统。该系统可靠且快速,通常在 4 小时内即可对大肠杆菌 DNA 进行灵敏(LOQ = 15 pg DNA/ml 供试样品,图 1)和特异性(图 2 和 3)定量。无论样品含有高分子量还是剪切 DNA,该性能均有助于确保以高可信度从包括过程中样品至原料药样品的多种样品类型中获得定量数据——(图 3)。

表 1.使用手动 PrepSEQ ?样品制备方案进行 DNA 回收。

使用 10 pg 大肠杆菌基因组 DNA 加标物/样品、3 名分析员和 9 份供试样品获得检测性能数据。

50 mg/mL 蛋白样品

平均回收率

平均 %CV

大肠杆菌

83%

5.04%

仅供科研使用。不适用于诊断用途。

ABI 4413713 resDNASEQ 定量 CHO DNA 试剂盒与 PrepSEQ 残留 DNA 样品制备试剂盒

该 resDNASEQ? 定量 CHO DNA 试剂盒是 resDNASEQ? 定量 CHO DNA 系统—的基于定量 PCR (qPCR) 的试剂盒—部分,使您能够在 5 小时内检测中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞系中亚皮克量级的残留 DNA。通过将高回收率 PrepSEQ? 样品制备和基于 TaqMan? 的残留 DNA 定量结合在一起,该系统克服了传统方法的局限性。

ABI 4413686 PrepSEQ 残留 DNA 样品制备试剂盒

对 Applied Biosystems? PrepSEQ? 残留 DNA 样品制备试剂盒进行优化以便从复杂的蛋白质、缓冲液和盐混合物中高效回收 DNA,而这些混合物是需要对残留宿主细胞系 DNA 进行定量分析的典型样品。可从具有挑战性的基质中获得定量且一致的 DNA 回收率,包括浓度较高、pH 值较低或盐浓度较高的样品

ABI 4452222 PrepSEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒

PrepSEQ? 1-2-3 核酸提取试剂盒采用磁珠法分离技术从多种起始材料(例如感染细胞培养物或支原体液体培养物)中分离出的支原体细胞或小鼠细小病毒(MMV) 中提取 DNA。

使用此试剂盒,您可以在提取靶 DNA 之前制备样品裂解物。
对于含有支原体的样品,裂解物中包含来自培养基中的游离微生物以及来自已感染宿主细胞中释放出的微生物的支原体 DNA。

规格

最终产品类型

基因组 DNA、病毒 DNA、细菌 DNA

适用于(应用)

细胞培养污染检测

反应次数

100 Preps

产品线

PrepSEQ?

靶标

基因组 DNA 纯化

靶标有机物类

小鼠细小病毒 (MMV)、支原体属、疱疹病毒

Isolation Technology

磁珠

样品类型

细胞培养上清液

内容与储存

? PrepSEQ 蛋白酶 K (在 -15 至 -25°C 下储存)
? RNase 混合物(在 -15 至 -25°C 下储存)
? PrepSEQ 提取试剂盒,包括裂解缓冲液、蛋白酶 K 缓冲液、结合溶液、洗涤和洗脱缓冲液(在室温下储存)
? PrepSEQ 磁珠(在室温下储存)

ABI 4460364 resDNASEQ NS0 DNA定量检测试剂盒与 PrepSEQ残留 DNA 样品制备试剂盒

The resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit is a quantitative PCR (qPCR)-based system for the detection of host cell DNA from NS0 (murine myeloma) cells, an expression system commonly used for the production of vaccines. Reliable and rapid, the resDNASEQ? system enables sensitive (as low as 1.5 pg DNA/mL test sample) and specific quantitation of NS0 cell DNA. This performance helps ensure a high degree of confidence in quantitation data obtained from a broad range of sample types, from in-process samples to final product, whether the sample contains high molecular weight or sheared DNA.

检测方法

引物-探针检测

产品规格

Kit

No. of Reactions

100 次反应

PCR 方法

qPCR

宿主细胞

NS0

包括

Assay Kit and Sample Preparation

标签或染料

FAM

引物探针兼容性

TaqMan?

产品线

resDNASEQ?

Unit Size

100 reactions

Features of the?resDNASEQ Quantitative NS0 DNA Kit include:
? Highly sensitive quantitation using proven TaqMan? real-time qPCR technology
? Consistent performance across the expected range of DNA fragment sizes
? Integrated system includes sample preparation kit, master mix, TaqMan? primer/probe mix, and NS0 genomic DNA standard

This kit is?available?with or without sample preparation reagents in the form of a PrepSEQ? Residual DNA Sample Preparation Kit, which is optimized for highly efficient residual DNA recovery from complex mixtures of proteins, buffers, and salts.

The resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit is designed to provide highly sensitive detection of NS0 DNA, allowing you to use small sample volumes to generate accurate results. The broad linear range of TaqMan? real-time qPCR technology allows you to test samples with variable levels of NS0 DNA in the same assay, such as in-process samples with higher amounts of DNA or bulk drug substance with very low amounts.

Easy to use, results in under 4 hours
The easy workflow of the resDNASEQ? Quantitative NS0 DNA Kit consists of sample preparation, assay setup, and instrument run and data analysis—all of which you can perform in under 4 hours. Start by extracting DNA from your in-process purification and drug substance samples. Then perform qPCR analysis to compare the amount of NS0 DNA in your test samples to a standard curve generated with known amounts of purified NS0 genomic DNA standard. The resDNASEQ? system includes almost everything you need to carry out these steps, from sample preparation kit to master mix to TaqMan? primer/probe mix to NS0 genomic DNA standard, as well as step-by-step instructions.

Specific to NS0 DNA, no cross-reactivity with unrelated DNA
The target of the assay is highly specific—it only detects a NS0-specific region of a multicopy genetic element. We selected this region using extensive bioinformatic analysis of multiple related and unrelated species.

Consistent performance even with fragmented DNA
For accurate quantitation of residual NS0 DNA, assay results must be unaffected by the size of the DNA molecules present in the test sample. With the resDNASEQ? system you get consistent assay performance across a range of DNA fragment sizes.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

ABI 4402085 resDNASEQ 定量 CHO DNA 试剂盒

resDNASEQ? 定量 CHO DNA 系统—的这一基于定量 PCR (qPCR) 的试剂盒—部分使您能够在 5 小时内检测中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞系中亚皮克量级的残留 DNA。通过将高回收率 PrepSEQ? 样品制备和基于 TaqMan? 的残留 DNA 定量结合在一起,该系统克服了传统方法的局限性。

用于高灵敏度残留 CHO DNA 定量的实时荧光定量 PCR 试剂盒
?易于使用,可在 5 小时内得出结果
?具有 CHO DNA 特异性,与无关 DNA 不存在交叉反应性
?属于集成系统(包括样品制备、TaqMan? 分析和预混液、标准 DNA、仪器和软件)的一部分
?方案提供自动化样品制备
?灵活的样品处理量使您能够进行严格的 DNA 清除研究

用于高灵敏度定量的实时荧光定量 PCR
resDNASEQ? 定量 CHO DNA 系统提供高灵敏度 CHO DNA 检测,方便您使用小样品体积得出准确结果。TaqMan? 技术的广泛线性范围允许您在同一测定中对不同 CHO DNA 水平的供试样品进行检测,如 DNA 含量较高的过程中样品或含量极低的原料药。图 1 显示了测定的范围和灵敏度。通过分析范围为 0.3 ng 至 3 fg 的 CHO 细胞标准 DNA 证明线性。

易于使用,可在 5 小时内得出结果
首先您可以从过程中纯化和原料药样品中提取 DNA。然后,进行 qPCR,将供试样品中的 DNA 量与使用已知量的纯化 CHO 细胞标准 DNA 生成的标准曲线进行比较。resDNASEQ? 定量 CHO DNA 系统的简单工作流程包括样品制备、测定设置、仪器运行和数据分析,—所有这些均可在 5 小时内进行。

对 CHO DNA 具有特异性,与无关 DNA 不存在交叉反应性
该测定的靶标具有高度特异性,因此它只检测多拷贝基因元件的仓鼠特异性区域。我们利用对多个相关和不相关物种的广泛生物信息学分析来选择该区域。对测定性能进行的检测确认,该测定对仓鼠 DNA 具有特异性,且不受供试样品中存在高达 100 ng 的无关 DNA 的影响。

即使针对片段化 DNA 也能保持一致的性能

对于残留 CHO DNA 的精确定量,测定结果不得受供试样品中存在的 DNA 分子大小的影响。为了检测 DNA 片段大小对测定性能的影响,我们通过超声处理将高分子量 CHO 基因组 DNA 片段化为低分子量 DNA。图 2 表明,进行超声处理的低分子量 DNA 反应的阈值循环 (Ct) 值与未酶切的高分子量 DNA 的阈值相当。这些结果表明,无论 DNA 分子量如何,该试剂盒性能一致。

规格

宿主细胞

CHO

反应次数

100

PCR 方法

qPCR

引物探针兼容性

TaqMan?

产品线

resDNASEQ?

产品类型

Quantitative CHO DNA Kit

反应速度

标准

运输条件

干冰

检测方法

引物-探针检测

产品规格

Kit

标签或染料

FAM

样品类型

DNA(基因组)

内容与储存

在冰箱(-15 至 -25°C)中储存。

D2500-02 琼脂糖凝胶回收试剂盒,Omega试剂盒

商品详情:

从琼脂糖凝胶中回收纯化特定的DNA片段是一种很常规的技术,但是大多数的方法有的不能完全去除琼脂糖(琼脂糖对下游操作影响很大),要么会出现DNA被剪断或者得率很低的情况。

 

E.Z.N.A® Gel Extraction Kit采用硅胶柱纯化技术,适合从各种类型各种浓度的琼脂糖凝胶中回收100bp-20kb的DNA片段,回收率可达到60-70%,可直接应用于酶促连接反应、PCR扩增、酶切以及标记等实验。此外,该试剂盒还可以用从于PCR产物,酶切产物中直接纯化DNA。将目的DNA片段从琼脂糖凝胶中切下,加入Binding Buffe水浴溶解凝胶,而后转移至HiBind®离心柱上离心结合DNA,经两步简单洗涤,最终用Elution Buffer洗脱DNA。

 

快速–可以在15分钟内完成纯化工作

可靠–最适的缓冲液保证DNA纯度和高回收率

安全–无须接触有害的有机物抽提

高质–纯化的DNA适合于各种应用

片段大–可回收大于10kb的DNA片段

 

参数

应用:酶切,连接,PCR等

样品:各种类型或浓度的琼脂糖凝胶

用量:<400mg凝胶

时间:15-20min

结合能力:20ug

洗脱体积:15-30ul

DRAQ7 (0.3mM) 远红外DNA染料

DRAQ7;DRAQ5;Anthraquinone dye 蒽醌染料;DNA染料;7-AAD;碘化丙啶(PI);细胞活力分析;TMRM 线粒体膜电位探针;

DRAQ7是一种不具细胞通透性的远红外DNA染料,仅对死细胞和透化细胞的核染色,能与其它常见的标记染料(比如:GFP或FITC)联合使用。DRAQ7是一种理想工具用于研究死细胞或膜受损细胞,因其不用进入完整膜结构的活细胞。DRAQ7是碘化丙啶(PI)和7-AAD的理想替代品,因其不能被紫外激发,且与PE/PE同源物没有发射光重叠。

DRAQ7的关键特征包括:1)快速染色死细胞或透化细胞的dsDNA/核;2)低光漂白;3)适用于绝大多数细胞,真核和原核来源:哺乳动物、细菌、寄生虫、植物等;4)长期培养无毒性;5)能与活细胞染料结合使用;6)流式细胞检测中与常见的FITC/GFP+PE结合实验无需做荧光补偿;7)不用清洗或RNase处理;

染料特性

1)   外观:液体(0.3mM)

2)   激发波长:最理想633和647nm处(Eλmax= 599/644nm); 次理想488,514,568nm处(仅适用于流式分析)

3)   发射波长(取决于仪器):665nm至红外(Emλmax= 678nm/697nm,掺入 dsDNA)

          与可见光区比如:GFP和FITC,最小重叠;发射滤片可能包括:695L, 715LP 或780 LP

3)与紫外/可见光荧光素的多波长成像:与DNA结合后没有荧光增强;低光漂白效应;兼容于流式细胞仪、激光扫描细胞仪和共聚焦显微镜的光学;以及基于灯泡的荧光显微镜。

保存与运输方法

保存:2-8°C避光保存,2年有效。不可冻存!

运输:室温运输。

注意事项

1)DRAQ7是Biostatus Limited的商标名。

2)荧光染料都存在淬灭的问题,保存和操作过程中注意避光。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

染色步骤(悬浮细胞的活力染色)

1)对于每个样本,用PBS重悬细胞使其密度约为5×105细胞/ml。叠氮钠影响DRAQ7染色,建议用PBS(不含钙镁或叠氮钠)或细胞培养基(不含叠氮钠)来染色。

2)加入适量DRAQ7(0.3mM)到所需浓度。推荐做浓度滴定来确定最佳的工作浓度。用于流式细胞仪和显微成像检测,通常1:100的稀释倍数(3µM)能获得良好的染色结果。

3)室温避光孵育10-15min。不需清洗。

4)流式细胞仪分析。对于流式分析,当使用蓝色激光器激发,染料用PerCP-Cy5.5或PerCP-eFluor 710的滤片设置来观察;当使用红色激光器激发,染料用Cy5的BP或LP滤片设置来观察。另,当进行荧光显微镜分析,最好用黄-红光激发。用比如:695L, 715LP 或780 LP的远红长通滤片来观察。

延伸阅读(DRAQ7的动力学活力分析)

文献来源:Wlodkowic D, Akagi J, Dobrucki J, et al. Kinetic viability assays using DRAQ7 probe. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:10.1002/0471142956.cy0941s65. doi:10.1002/0471142956.cy0941s65

实验1)DRAQ7实时染色(Real-time DRAQ7 staining)

①在合适的容器比如微量滴定板或细胞培养瓶内接种或分散细胞到培养基;

②加10μl DRAQ7储存液(浓度:300μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为3μM);

③轻轻混匀使染料均匀分散在溶液内;

④在含DRAQ7的情况下使细胞生长高达5天(37℃,5% CO2);

⑤定期收集染色样本用于流式分析;【细胞体积至少符合流式细胞仪分析要求的最低样本体积100-150μl】;

⑥不用清洗直接用流式细胞仪分析,用488nm激发器或633-647nm激发器,发射波长>660 nm。

关于DRAQ7的重要信息:DRAQ7培养高达5天对人细胞系无毒性,在高达20μM DRAQ7的体系内培养细胞,对细胞增殖、细胞周期、活力无明显干扰,且对药物比如抗肿瘤化合物或凋亡诱导剂没有反应。

结果呈现:

Figure 1 Assessment of live, early apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on stainability with plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. forward scatter (FS) enable discrimination of live (DRAQ7−; green gate), early apoptotic (DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter.

实验2)DRAQ7和线粒体膜电位敏感探针TMRM双重实时评估细胞死亡(Two color real-time assay with DRAQ7 and TMRM)

①在合适的容器比如微量滴定板或细胞培养瓶内接种或分散细胞到培养基;

②加10μl DRAQ7储存液(浓度:300μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为3μM);

③加15μl TMRM工作液(浓度:10μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为150nM);

④轻轻混匀使染料均匀分散在溶液内;

⑤在含DRAQ7和TMRM两种染料的情况下使细胞生长高达5天(37℃,5% CO2);

⑥定期收集染色样本用于流式分析;【细胞体积至少符合流式细胞仪分析要求的最低样本体积100-150μl】;

⑦不用清洗直接用流式细胞仪分析,用488nm激发器和633-647nm激发器,发射波长分别搜集575nm(TMRM)和>660 nm(DRAQ7)的信号。

重要信息:DRAQ7和TMRM两种染料都能被488nm激发器激发。两者相邻通道间的光谱重叠很小,如两者都用488nm激发器来激发,可能需做一些小补偿调整。DRAQ7荧光能用标准APC 660nm宽带滤片观察,当用633nm激发器来激发,避免使用任何荧光补偿。调整对数放大尺度来区分活细胞(明亮的TMRM+/DRAQ7−)、凋亡细胞(TMRMlow/DRAQ7−)、具受损质膜的晚期凋亡/坏死细胞(TMRMlow/DRAQ7+)。在一些细胞体系,可能有必要优化DRAQ7和TMRM浓度,以及PMT电压在不同的细胞时间中获得最大的分辨率。

Figure 2 Discrimination of viable, apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on Δψm marker

 tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) and plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7 and 150 nm of TMRM. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. TMRM enable discrimination of live (TMRM+/DRAQ7−; green gate), early apoptotic (TMRMlow/DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (TMRMlow/DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter. TMRM was excited using 488 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 575 nm long-pass filter. Debris signals were excluded electronically by setting the proper low threshold.

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Propidium Monoazide (PMA)叠氮溴化丙锭 1mg
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DRAQ7 (0.3mM)远红外DNA染料 250µl

 

DRAQ7 (0.3mM) 远红外DNA染料 细胞活力分析;TMRM 线粒体膜电位探针

DRAQ7;DRAQ5;Anthraquinone dye 蒽醌染料;DNA染料;7-AAD;碘化丙啶(PI);细胞活力分析;TMRM 线粒体膜电位探针;

产品描述

DRAQ7是一种不具细胞通透性的远红外DNA染料,仅对死细胞和透化细胞的核染色,能与其它常见的标记染料(比如:GFP或FITC)联合使用。DRAQ7是一种理想工具用于研究死细胞或膜受损细胞,因其不用进入完整膜结构的活细胞。DRAQ7是碘化丙啶(PI)和7-AAD的理想替代品,因其不能被紫外激发,且与PE/PE同源物没有发射光重叠。

DRAQ7的关键特征包括:1)快速染色死细胞或透化细胞的dsDNA/核;2)低光漂白;3)适用于绝大多数细胞,真核和原核来源:哺乳动物、细菌、寄生虫、植物等;4)长期培养无毒性;5)能与活细胞染料结合使用;6)流式细胞检测中与常见的FITC/GFP+PE结合实验无需做荧光补偿;7)不用清洗或RNase处理;

染料特性

1)   外观:液体(0.3mM)

2)   激发波长:最理想633和647nm处(Eλmax= 599/644nm); 次理想488,514,568nm处(仅适用于流式分析)

3)   发射波长(取决于仪器):665nm至红外(Emλmax= 678nm/697nm,掺入 dsDNA)

          与可见光区比如:GFP和FITC,最小重叠;发射滤片可能包括:695L, 715LP 或780 LP

3)与紫外/可见光荧光素的多波长成像:与DNA结合后没有荧光增强;低光漂白效应;兼容于流式细胞仪、激光扫描细胞仪和共聚焦显微镜的光学;以及基于灯泡的荧光显微镜。

保存与运输方法

保存:2-8°C避光保存,2年有效。不可冻存!

运输:室温运输。

注意事项

1)DRAQ7是Biostatus Limited的商标名。

2)荧光染料都存在淬灭的问题,保存和操作过程中注意避光。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

染色步骤(悬浮细胞的活力染色)

1)对于每个样本,用PBS重悬细胞使其密度约为5×105细胞/ml。叠氮钠影响DRAQ7染色,建议用PBS(不含钙镁或叠氮钠)或细胞培养基(不含叠氮钠)来染色。

2)加入适量DRAQ7(0.3mM)到所需浓度。推荐做浓度滴定来确定最佳的工作浓度。用于流式细胞仪和显微成像检测,通常1:100的稀释倍数(3µM)能获得良好的染色结果。

3)室温避光孵育10-15min。不需清洗。

4)流式细胞仪分析。对于流式分析,当使用蓝色激光器激发,染料用PerCP-Cy5.5或PerCP-eFluor 710的滤片设置来观察;当使用红色激光器激发,染料用Cy5的BP或LP滤片设置来观察。另,当进行荧光显微镜分析,最好用黄-红光激发。用比如:695L, 715LP 或780 LP的远红长通滤片来观察。

延伸阅读(DRAQ7的动力学活力分析)

文献来源:Wlodkowic D, Akagi J, Dobrucki J, et al. Kinetic viability assays using DRAQ7 probe. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:10.1002/0471142956.cy0941s65. doi:10.1002/0471142956.cy0941s65

实验1)DRAQ7实时染色(Real-time DRAQ7 staining)

①在合适的容器比如微量滴定板或细胞培养瓶内接种或分散细胞到培养基;

②加10μl DRAQ7储存液(浓度:300μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为3μM);

③轻轻混匀使染料均匀分散在溶液内;

④在含DRAQ7的情况下使细胞生长高达5天(37℃,5% CO2);

⑤定期收集染色样本用于流式分析;【细胞体积至少符合流式细胞仪分析要求的最低样本体积100-150μl】;

⑥不用清洗直接用流式细胞仪分析,用488nm激发器或633-647nm激发器,发射波长>660 nm。

关于DRAQ7的重要信息:DRAQ7培养高达5天对人细胞系无毒性,在高达20μM DRAQ7的体系内培养细胞,对细胞增殖、细胞周期、活力无明显干扰,且对药物比如抗肿瘤化合物或凋亡诱导剂没有反应。

结果呈现:

Figure 1 Assessment of live, early apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on stainability with plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. forward scatter (FS) enable discrimination of live (DRAQ7−; green gate), early apoptotic (DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter.

实验2)DRAQ7和线粒体膜电位敏感探针TMRM双重实时评估细胞死亡(Two color real-time assay with DRAQ7 and TMRM)

①在合适的容器比如微量滴定板或细胞培养瓶内接种或分散细胞到培养基;

②加10μl DRAQ7储存液(浓度:300μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为3μM);

③加15μl TMRM工作液(浓度:10μM)到每1000μl细胞悬液(染料终浓度为150nM);

④轻轻混匀使染料均匀分散在溶液内;

⑤在含DRAQ7和TMRM两种染料的情况下使细胞生长高达5天(37℃,5% CO2);

⑥定期收集染色样本用于流式分析;【细胞体积至少符合流式细胞仪分析要求的最低样本体积100-150μl】;

⑦不用清洗直接用流式细胞仪分析,用488nm激发器和633-647nm激发器,发射波长分别搜集575nm(TMRM)和>660 nm(DRAQ7)的信号。

重要信息:DRAQ7和TMRM两种染料都能被488nm激发器激发。两者相邻通道间的光谱重叠很小,如两者都用488nm激发器来激发,可能需做一些小补偿调整。DRAQ7荧光能用标准APC 660nm宽带滤片观察,当用633nm激发器来激发,避免使用任何荧光补偿。调整对数放大尺度来区分活细胞(明亮的TMRM+/DRAQ7−)、凋亡细胞(TMRMlow/DRAQ7−)、具受损质膜的晚期凋亡/坏死细胞(TMRMlow/DRAQ7+)。在一些细胞体系,可能有必要优化DRAQ7和TMRM浓度,以及PMT电压在不同的细胞时间中获得最大的分辨率。

Figure 2 Discrimination of viable, apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on Δψm marker

 tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) and plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7 and 150 nm of TMRM. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. TMRM enable discrimination of live (TMRM+/DRAQ7−; green gate), early apoptotic (TMRMlow/DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (TMRMlow/DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter. TMRM was excited using 488 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 575 nm long-pass filter. Debris signals were excluded electronically by setting the proper low threshold.

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ssDNA定量试剂;药物残留DNA检测 PicoGreen dsDNA Assay Kit 双链DNA(dsDNA)定量检测试剂盒

Picogreen dsDNA Reagent;双链DNA检测试剂;RiboGreen;RNA定量试剂;ssDNA定量试剂;药物残留DNA检测;

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义,疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

Picogreen dsDNA定量检测:Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:①灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;②特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96和384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

本试剂盒含有实验所需的所有试剂,使用更快捷方便。若按照2ml反应体系来计算(比色皿),10×100 µL kit可做100次反应;若按照200µl反应体系来计算(96孔板),10×100 µL kit可做1000次反应;单次反应体系取决于荧光检测仪器。

产品组分

编号 组分名称 产品编号规格
MF0781-0.5ML MF0781-1ML
A Picogreen dsDNA reagent (200× in DMSO) 100µl×5 100µl×10
B Lambda DNA standard (10µg/ml) 1ml 1ml×2
C 1×TE Buffer 100ml 100ml×2
A置于2-8℃干燥避光保存,亦可置于≤-20℃长期保存;

B置于2-8℃,亦可置于≤-20℃长期保存;

C置于2-8℃保存,长期不用亦可置于-20℃保存;

保存与运输方法

保存:2-8℃避光保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

  • Picogreen含DMSO(已知有毒试剂),操作时请注意防护。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、PicoGreen (2×)工作液配制

使用前将PicoGreen dsDNA reagent回温至室温;PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO

中。实验当天,根据实验需求用1×TE按1:100 的比例稀释适量母液到PicoGreen (2×)。

例如要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品,可向19.8mL1×TE 中加入200μL PicoGreen dsDNA reagent (200×)。

注意】:a)由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。b)PicoGreen见光易降解,所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。c)溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。d)Picogreen的最终工作浓度建议为1×;用户也可根据实际情况调整此浓度,比如:最终工作浓度调低到0.5×。

二、 检测步骤

2.1 Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制

用1×TE对Lambda DNA standard (10µg/ml)进行50倍稀释。比如,向10µl Lambda DNA standard (10µg/ml)加入490µl 1×TE混匀,此时标准品浓度为200ng/ml;

2.2 标准曲线的制备

【注意】:根据2010年《中国药典》所提,PicoGreen定量DNA的方法检出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范围内线性较好(R2>0.99),因此,在此范围内设置浓度梯度,建议标准曲线较好。

比色皿体系检测(2ml

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和Lambda DNA standard(200ng/ml),通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液,随后加入1ml PicoGreen (2×)定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。注意】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

表1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表
TE (µl) Lambda DNA standard (µl) PicoGreen (2×) (µl) Lambda DNA standard终浓度
0 1000(200ng/ml) 1000 100ng/ml
200 800(200ng/ml) 1000 80ng/ml
400 600(200ng/ml) 1000 60ng/ml
600 400(200ng/ml) 1000 40ng/ml
800 200(200ng/ml) 1000 20ng/ml
900 100(200ng/ml) 1000 10ng/ml
950 50(200ng/ml) 1000 5ng/ml
1000 0(200ng/ml) 1000 0ng/ml (blank)

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=~480nm/520nm。

注意】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接

近荧光仪的最大值;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度标准溶液得到的荧光值减去空白对照荧光值,之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线,来确定样本DNA的浓度。

  • 微孔板体系检测(200µl)

a、 按照表2 向96孔板中加入TE和Lambda DNA standard(200ng/ml),通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液,随后加入100µl PicoGreen (2×)定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。注意】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微孔板的外部,可以驱散气泡。

表2酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表
TE (µl) Lambda DNA standard (µl) PicoGreen (2×) (µl) Lambda DNA standard终浓度
0 100(200ng/ml) 100 100ng/ml
20 80(200ng/ml) 100 80ng/ml
40 60(200ng/ml) 100 60ng/ml
60 40(200ng/ml) 100 40ng/ml
80 20(200ng/ml) 100 20ng/ml
90 10(200ng/ml) 100 10ng/ml
95 5(200ng/ml) 100 5ng/ml
100 0(200ng/ml) 100 0ng/ml (blank)

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=~480nm/520nm。

注意】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接

近荧光仪的最大值;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线,来确定样本DNA的浓度。

应用示例(荧光定量):

附表 PicoGreen定量耐受的污染物列表

物质名称 最大耐受浓度 信号变化百分比
Salts
Ammonium acetate 50 mM 3% decrease
Sodium acetate 30 mM 3% increase
Sodium chloride 200 mM 30% decrease
Zinc chloride 5 mM 8% decrease
Magnesium chloride 50 mM 33% decrease
Urea 2 M 9% increase
Organic Solvents
Phenol 0.1% 13% increase
Ethanol 10% 12% increase
Chloroform 2% 14% increase
Detergents
Sodium dodecyl sulfate 0.01% 1% decrease
Triton X-100 0.1% 7% increase
Proteins
Bovine serum albumin 2% 16% decrease
IgG 0.1% 19% increase
Other Compounds
Polyethylene glycol 2% 8% increase
Agarose 0.1% 4% increase

 

PicoGreen dsDNA Assay Kit 双链DNA(dsDNA)定量检测试剂盒

Picogreen dsDNA Reagent;双链DNA检测试剂;RiboGreen;RNA定量试剂;ssDNA定量试剂;药物残留DNA检测;

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义,疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

Picogreen dsDNA定量检测:Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:①灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;②特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96和384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

本试剂盒含有实验所需的所有试剂,使用更快捷方便。若按照2ml反应体系来计算(比色皿),10×100 µL kit可做100次反应;若按照200µl反应体系来计算(96孔板),10×100 µL kit可做1000次反应;单次反应体系取决于荧光检测仪器。

产品组分

编号 组分名称 产品编号规格
MF0781-0.5ML MF0781-1ML
A Picogreen dsDNA reagent (200× in DMSO) 100µl×5 100µl×10
B Lambda DNA standard (10µg/ml) 1ml 1ml×2
C 1×TE Buffer 100ml 100ml×2
A置于2-8℃干燥避光保存,亦可置于≤-20℃长期保存;

B置于2-8℃,亦可置于≤-20℃长期保存;

C置于2-8℃保存,长期不用亦可置于-20℃保存;

保存与运输方法

保存:2-8℃避光保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

  • Picogreen含DMSO(已知有毒试剂),操作时请注意防护。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、PicoGreen (2×)工作液配制

使用前将PicoGreen dsDNA reagent回温至室温;PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO

中。实验当天,根据实验需求用1×TE按1:100 的比例稀释适量母液到PicoGreen (2×)。

例如要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品,可向19.8mL1×TE 中加入200μL PicoGreen dsDNA reagent (200×)。

注意】:a)由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。b)PicoGreen见光易降解,所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。c)溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。d)Picogreen的最终工作浓度建议为1×;用户也可根据实际情况调整此浓度,比如:最终工作浓度调低到0.5×。

二、 检测步骤

2.1 Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制

用1×TE对Lambda DNA standard (10µg/ml)进行50倍稀释。比如,向10µl Lambda DNA standard (10µg/ml)加入490µl 1×TE混匀,此时标准品浓度为200ng/ml;

2.2 标准曲线的制备

【注意】:根据2010年《中国药典》所提,PicoGreen定量DNA的方法检出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范围内线性较好(R2>0.99),因此,在此范围内设置浓度梯度,建议标准曲线较好。

比色皿体系检测(2ml

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和Lambda DNA standard(200ng/ml),通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液,随后加入1ml PicoGreen (2×)定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。注意】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

表1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表
TE (µl) Lambda DNA standard (µl) PicoGreen (2×) (µl) Lambda DNA standard终浓度
0 1000(200ng/ml) 1000 100ng/ml
200 800(200ng/ml) 1000 80ng/ml
400 600(200ng/ml) 1000 60ng/ml
600 400(200ng/ml) 1000 40ng/ml
800 200(200ng/ml) 1000 20ng/ml
900 100(200ng/ml) 1000 10ng/ml
950 50(200ng/ml) 1000 5ng/ml
1000 0(200ng/ml) 1000 0ng/ml (blank)

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=~480nm/520nm。

注意】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接

近荧光仪的最大值;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度标准溶液得到的荧光值减去空白对照荧光值,之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线,来确定样本DNA的浓度。

  • 微孔板体系检测(200µl)

a、 按照表2 向96孔板中加入TE和Lambda DNA standard(200ng/ml),通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液,随后加入100µl PicoGreen (2×)定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。注意】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微孔板的外部,可以驱散气泡。

表2酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表
TE (µl) Lambda DNA standard (µl) PicoGreen (2×) (µl) Lambda DNA standard终浓度
0 100(200ng/ml) 100 100ng/ml
20 80(200ng/ml) 100 80ng/ml
40 60(200ng/ml) 100 60ng/ml
60 40(200ng/ml) 100 40ng/ml
80 20(200ng/ml) 100 20ng/ml
90 10(200ng/ml) 100 10ng/ml
95 5(200ng/ml) 100 5ng/ml
100 0(200ng/ml) 100 0ng/ml (blank)

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=~480nm/520nm。

注意】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接

近荧光仪的最大值;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线,来确定样本DNA的浓度。

附表 PicoGreen定量耐受的污染物列表

物质名称 最大耐受浓度 信号变化百分比
Salts
Ammonium acetate 50 mM 3% decrease
Sodium acetate 30 mM 3% increase
Sodium chloride 200 mM 30% decrease
Zinc chloride 5 mM 8% decrease
Magnesium chloride 50 mM 33% decrease
Urea 2 M 9% increase
Organic Solvents
Phenol 0.1% 13% increase
Ethanol 10% 12% increase
Chloroform 2% 14% increase
Detergents
Sodium dodecyl sulfate 0.01% 1% decrease
Triton X-100 0.1% 7% increase
Proteins
Bovine serum albumin 2% 16% decrease
IgG 0.1% 19% increase
Other Compounds
Polyethylene glycol 2% 8% increase
Agarose 0.1% 4% increase