F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

相关产品

F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

产品组分：

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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