HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

HT115(DE3);RNAi feeding strain RNA干扰喂养菌株;线虫RNAi;Nematode Growth Medium (NGM)线虫培养基;C. elegans秀丽隐杆线虫;

产品名称 规格
HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

菌株描述

HT115(DE3)菌株是一种RNAi饲养菌株,具四环素抗性,能在37℃,LB培养基上进行有氧生长。主要用于线虫的干扰实验。

HT115(DE3)菌株是一种特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,此菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因,在IPTG的诱导下表达T7 RNA聚合酶,进而启动线虫dsRNA的表达),除了用于线虫RNAi干扰实验,也适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

HT115(DE3)菌株基因型:E. coli [F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5 promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAse III minus) ]

产品描述

本品是大肠杆菌HT115(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
1000UL 5000UL
A HT115(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。

8) 为了进行干扰质粒中dsRNA的生成,HT115(DE3)菌株需在特殊的RNAi NGM(Nematode Growth Media)平板上培养,添加有IPTG和氨苄(50µg/ml)或羧苄(25µg/ml)抗生素,倾向于用羧苄应其更稳定。

9) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。                

JM109(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

                            产品名称 规格                     
               JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl
              JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号           

组分名

货号(规格)

    1000UL          5000UL          
A JM109(DE3) Chemically Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
B Control Vector puC19,10pg/μl          10μl 10μl

菌株描述

JM109(DE3)菌株,来源于JM109,含有T7 RNA聚合酶表达基因,整合在其染色体上,故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点,JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于pET,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。

JM109(DE3)菌株基因型:endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3

产品描述

本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。
  2. 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
  3. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  7. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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JM109(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

货号                            产品名称 规格                     
MF2487-1000UL                JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl
MF2487-5000UL               JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号           

组分名

货号(规格)

    MF2487-1000UL          MF2487-5000UL          
MF2487-A JM109(DE3) Chemically Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
MF2487-B Control Vector puC19,10pg/μl          10μl 10μl

菌株描述

JM109(DE3)菌株,来源于JM109,含有T7 RNA聚合酶表达基因,整合在其染色体上,故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点,JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于pET,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。

JM109(DE3)菌株基因型:endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3

产品描述

本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。
  2. 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
  3. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  7. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

EPI400;EC100;CopyCutter Induction Solution;toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA;Epicentre;

货号 产品名称 规格
MF2486-1000UL   Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell     10×100μl   
MF2486-5000UL Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2486-1000UL    MF2486-5000UL   
MF2486-A   Rosetta 2(DE3) Competent Cell   10×100μl 50×100μl
MF2486-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余培养基(液)都应含氯霉素(34μg/ml),以防质粒丢失。
  6. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化后,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用移液枪吹打),冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2334-1000UL BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
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MF2482-1000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
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MF2490-1000UL ArcticExpress(DE3)pRARE2 Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

EPI400;EC100;CopyCutter Induction Solution;toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA;Epicentre;

产品订购: 

货号 产品名称 规格
MF2486-1000UL   Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell     10×100μl   
MF2486-5000UL Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2486-1000UL    MF2486-5000UL   
MF2486-A   Rosetta 2(DE3) Competent Cell   10×100μl 50×100μl
MF2486-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余培养基(液)都应含氯霉素(34μg/ml),以防质粒丢失。
  6. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化后,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用移液枪吹打),冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号 产品名称 规格                 
MF2337-1000UL     BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化学感受态细胞    10×100μl
MF2337-5000UL BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号       组分名称

货号(规格)

MF2337-1000UL       MF2337-5000UL     
MF2337-A BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell       10×100μl 50×100μl
MF2337-B Control Plasmid puC19, 10 pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

BL21-CodonPlus菌株来源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株,特别适合在大肠杆菌内高水平表达异源蛋白。由于异源蛋白来源宿主大量存在的某些tRNA在大肠杆菌内很是稀少,因此,想在大肠杆菌内有效表达异源蛋白通常受到限制。外力驱动下的高水平表达异源蛋白会耗尽已有的稀有tRNA,导致翻译中止。BL21-CodonPlus菌株正是根据此缺陷而基因改造后的菌株,额外添加在大肠杆菌内最常见限制异源蛋白表达的几种tRNA的基因拷贝。这些tRNA的存在使得许多原来在传统BL21菌株内表达很弱的异源蛋白能够在BL21-CodonPlus菌株内大量表达。BL21-CodonPlus-RIPL补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA, AUA, CCC, CUA)对应的tRNA(argU, ileY, proL, leuW),显著提高外源基因,尤其是富含AT-或GC-基因的异源蛋白在大肠杆菌内的表达。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色体还整合了λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),可用于pET系列、pGEX、pMAL等载体的蛋白表达,同时具有四环素,氯霉素,链霉素和壮观霉素抗性。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型:F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格                
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MF2336-1000UL BL21-AI Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MS0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 25g
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

毒性蛋白表达;pET表达载体 E coli C43(DE3) Strain 大肠杆菌C43(DE3) 甘油菌

OverExpress C43(DE3);C43(DE3) pLysS;BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;

产品名称

规格

       

                   E coli C43(DE3) Strain 大肠杆菌C43(DE3) 甘油菌

300μl

 菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株来源于OverExpress C41(DE3)菌株,通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。OverExpress C41(DE3)来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌与OverExpress C41(DE3)相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白表达能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

基因型

FompT hsdSB (rB mB) gal dcm (DE3)

基本信息

培养基:LB培养基

培养条件:37℃,LB,有氧培养

抗性:无

转化方式:42℃热激

基本应用:蛋白表达

保存与运输方法

保存:-80℃保存,一年有效。

运输:冰袋运输。

使用说明

1)收到甘油菌后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;

2)用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性请加对应抗性;【注意:若培养不起来请用甘油菌涂板】;

3)恒温培养箱倒置培养12~16h。

4)挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性请加对应抗性;

5)摇床振荡培养12~16h,根据实验需求保存甘油菌【酵母菌加30%甘油,其它菌一般加15%甘油】。

注意事项

1) 金畔生物提供的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后,请及时在固体平板上划线培养,挑取单菌落接种到液体培养基中,震荡培养后使用并保存新的甘油菌。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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10×100μl

 

C. elegans秀丽隐杆线虫 HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

HT115(DE3);RNAi feeding strain RNA干扰喂养菌株;线虫RNAi;Nematode Growth Medium (NGM)线虫培养基;C. elegans秀丽隐杆线虫;

货号 产品名称 规格
MF2488-1000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2488-5000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

菌株描述

HT115(DE3)菌株是一种RNAi饲养菌株,具四环素抗性,能在37℃,LB培养基上进行有氧生长。主要用于线虫的干扰实验。

HT115(DE3)菌株是一种特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,此菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因,在IPTG的诱导下表达T7 RNA聚合酶,进而启动线虫dsRNA的表达),除了用于线虫RNAi干扰实验,也适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

HT115(DE3)菌株基因型:E. coli [F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5 promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAse III minus) ]

产品描述

本品是大肠杆菌HT115(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2488-1000UL MF2488-5000UL
MF2488-A HT115(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2488-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。

8) 为了进行干扰质粒中dsRNA的生成,HT115(DE3)菌株需在特殊的RNAi NGM(Nematode Growth Media)平板上培养,添加有IPTG和氨苄(50µg/ml)或羧苄(25µg/ml)抗生素,倾向于用羧苄应其更稳定。

9) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
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附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。                

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

OverExpress C43(DE3)pLysS;OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;

货号 产品名称 规格
MF2482-1000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2482-5000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

 菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress菌株含赋予毒性蛋白抗性的遗传突变。C41(DE3)菌株来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。C43(DE3)菌株来源于C41(DE3),通过筛选对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。C43(DE3)与C41(DE3)菌株相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白耐受能力。

正如BL21(DE3)菌株,OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3区,所有菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性,能够表达少量T7溶菌酶(一种天然的T7 RNA聚合酶抑制剂)。T7溶菌酶能作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,降低目的基因的背景表达水平,但不会干扰IPTG诱导的表达,从而能够稳定重组表达的蛋白,特别是毒性蛋白。氯霉素(34 µg/ml)需加入菌株培养基内以维持pLysS质粒。

OverExpress C43(DE3) pLysS菌株基因型:F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)

产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3) pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2482-1000UL MF2482-5000UL
MF2482-A OverExpress C43(DE3)pLysS Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2482-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) OverExpress C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素外,其他所用固体培养基、液体培养基均应添加34µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含34µg/ml氯霉素以及所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
MF2331-1000UL BL21 (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
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MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。需注意对于OverExpress pLysS菌株,除筛选抗生素之外还要加入氯霉素(34 µg/ml)。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养3~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

 

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。

氯霉素母液(34mg/ml)配制

称量适量氯霉素溶于乙醇配制成34mg/ml储存液,-20℃保存。工作浓度为34µg/ml。                    

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

  货号                           产品名称   规格                              
  MF2346-1000UL                    OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞        10×100μl   
  MF2346-5000UL   OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞     50×100μl   

产品组分:

   组分编号                  

组分名

                                 货号(规格)
MF2346-1000UL                       MF2346-5000UL                    
   MF2346-A OrigamiB(DE3) Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
   MF2346-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

OrigamiB菌株与原始菌Origami一样,包含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,gor),表达主要还原途径的两个关键酶,有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失,能提高蛋白稳定性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。

OrigamiB(DE3)菌株基因型:F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 最好在冰上融化感受态细胞。
  3. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  6. OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。
  7. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的3ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。 

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶和谷胱甘肽还原酶

  货号                           产品名称   规格                              
  MF2346-1000UL                    OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞        10×100μl   
  MF2346-5000UL   OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞     50×100μl   

产品组分:

   组分编号                  

组分名

                                 货号(规格)
MF2346-1000UL                       MF2346-5000UL                    
   MF2346-A OrigamiB(DE3) Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
   MF2346-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

OrigamiB菌株与原始菌Origami一样,包含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,gor),表达主要还原途径的两个关键酶,有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失,能提高蛋白稳定性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。

OrigamiB(DE3)菌株基因型:F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 最好在冰上融化感受态细胞。
  3. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
  6. OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。
  7. 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:

    a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。 

BL21(DE3) Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株

货号 产品名称 规格              
MF2391-0250UL    BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞    5×50μl
MF2391-1000UL BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞 20×50μl

产品组分:

组分编号         组分名称

货号(规格)

MF2391-0500UL     MF2391-2500UL    
MF2391-A BL21(DE3) ElectrocompetentCell          5×50μl 20×50μl
MF2391-B pUC19 Control Vector (10pg/μl) 10μl 10μl

菌株描述

BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株,特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。BL21(DE3)菌株缺乏lon和ompT蛋白酶,从而改进重组蛋白的稳定性。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统(比如,pRSET,pCR T7和pET)。

BL21 (DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

我司(金畔生物)提供的BL21(DE3)电转感受态细胞经特殊工艺制作,适用于各种多肽、蛋白表达文库的构建,经pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。若转化大质粒或想得到较高转化效率,推荐使用高纯质粒抽提试剂盒提取质粒。

4)   为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6)   对于连接产物的转化,大部分公司的连接体系或重组体系(比如,Thermo或NEB公司的T4连接酶体系,NEB公司的重组系统)不用纯化,能直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。过高浓度连接产物或过大体积连接产物都会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

7)   电击杯里的离子会增加溶液的电导,增大在含细胞和DNA溶液中产生电流和弧光放电的风险。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)        取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。

3)        往50μl感受态细胞悬液中加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拨打管底使其混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

【注意】:要测定转化效率,请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。

【注意】:对于连接产物,大部分公司的T4连接酶体系或50℃重组体系不用纯化,可直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行电击转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。

【注意】:对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液重悬,然后与电击感受态细胞混合进行电击转化。

4)        用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

5)        启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐参数来操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

6)        2min后从冰中取出电击杯,放在室温,加入700 μl无抗生素的SOC培养基(室温),用枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管,向离心管内补加的SOC培养基定容至10ml。于37℃,225rpm振荡复苏培养1h。

【注意】:SOC培养基配方:2% Tryptone, 0.5% Yeast Extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2,10 mM MgSO4, 20mM glucose。SOC培养基营养丰富,主要用于大肠杆菌感受态细胞转化的复苏步骤,能最大化感受态细胞的转化效率。

7)        5,000rpm离心1min,重悬后取100~200μl加到含相应抗生素的SOC平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个),用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,37℃过夜培养13~17h。

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NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

NovaBlue(DE3);OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;

产品订购:

货号 产品名称 规格
MF2491-1000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2491-5000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

菌株描述

NovaBlue(DE3)菌株来源于K12菌株,具有极高的转化效率,能同时用于普通质粒的构建以及蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株具四环素抗性,recA和endA的突变有利于插入DNA的稳定和高纯质粒DNA的提取。lacZΔM15的存在使其能用于蓝白斑筛选。

NovaBlue(DE3)菌株含DE3区,说明其染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

 NovaBlue(DE3)菌株基因型:F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2491-1000UL MF2491-5000UL
MF2491-A NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2491-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

 7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2490-1000UL ArcticExpress(DE3)pRARE2 Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

6)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

7)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

8)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

9)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。          

NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

NovaBlue(DE3);OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;

货号 产品名称 规格
MF2491-1000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 396
MF2491-5000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

菌株描述

NovaBlue(DE3)菌株来源于K12菌株,具有极高的转化效率,能同时用于普通质粒的构建以及蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株具四环素抗性,recA和endA的突变有利于插入DNA的稳定和高纯质粒DNA的提取。lacZΔM15的存在使其能用于蓝白斑筛选。

NovaBlue(DE3)菌株含DE3区,说明其染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

 NovaBlue(DE3)菌株基因型:F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2491-1000UL MF2491-5000UL
MF2491-A NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2491-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

 7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

 

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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MF2490-1000UL ArcticExpress(DE3)pRARE2 Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

6)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

7)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

8)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

9)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

 

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。          

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

OverExpress C43(DE3)pLysS;OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;

货号 产品名称 规格
MF2482-1000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2482-5000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

 菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress菌株含赋予毒性蛋白抗性的遗传突变。C41(DE3)菌株来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。C43(DE3)菌株来源于C41(DE3),通过筛选对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。C43(DE3)与C41(DE3)菌株相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白耐受能力。

正如BL21(DE3)菌株,OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3区,所有菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性,能够表达少量T7溶菌酶(一种天然的T7 RNA聚合酶抑制剂)。T7溶菌酶能作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,降低目的基因的背景表达水平,但不会干扰IPTG诱导的表达,从而能够稳定重组表达的蛋白,特别是毒性蛋白。氯霉素(34 µg/ml)需加入菌株培养基内以维持pLysS质粒。

OverExpress C43(DE3) pLysS菌株基因型:F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)

产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3) pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2482-1000UL MF2482-5000UL
MF2482-A OverExpress C43(DE3)pLysS Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2482-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) OverExpress C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素外,其他所用固体培养基、液体培养基均应添加34µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含34µg/ml氯霉素以及所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
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MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。需注意对于OverExpress pLysS菌株,除筛选抗生素之外还要加入氯霉素(34 µg/ml)。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

 

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养3~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

 

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

 

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。

氯霉素母液(34mg/ml)配制

称量适量氯霉素溶于乙醇配制成34mg/ml储存液,-20℃保存。工作浓度为34µg/ml。                                         

BL21(DE3) Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

货号 产品名称 规格              
MF2391-0250UL    BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞    5×50μl
MF2391-1000UL BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞 20×50μl

产品组分:

组分编号         组分名称

货号(规格)

MF2391-0500UL     MF2391-2500UL    
MF2391-A BL21(DE3) ElectrocompetentCell          5×50μl 20×50μl
MF2391-B pUC19 Control Vector (10pg/μl) 10μl 10μl

菌株描述

BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株,特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。BL21(DE3)菌株缺乏lon和ompT蛋白酶,从而改进重组蛋白的稳定性。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统(比如,pRSET,pCR T7和pET)。

BL21 (DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

我司(金畔生物)提供的BL21(DE3)电转感受态细胞经特殊工艺制作,适用于各种多肽、蛋白表达文库的构建,经pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,6个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。若转化大质粒或想得到较高转化效率,推荐使用高纯质粒抽提试剂盒提取质粒。

4)   为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6)   对于连接产物的转化,大部分公司的连接体系或重组体系(比如,Thermo或NEB公司的T4连接酶体系,NEB公司的重组系统)不用纯化,能直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。过高浓度连接产物或过大体积连接产物都会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

7)   电击杯里的离子会增加溶液的电导,增大在含细胞和DNA溶液中产生电流和弧光放电的风险。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)        取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。

3)        往50μl感受态细胞悬液中加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拨打管底使其混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

【注意】:要测定转化效率,请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。

【注意】:对于连接产物,大部分公司的T4连接酶体系或50℃重组体系不用纯化,可直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行电击转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。

【注意】:对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液重悬,然后与电击感受态细胞混合进行电击转化。

4)        用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

5)        启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐参数来操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

6)        2min后从冰中取出电击杯,放在室温,加入700 μl无抗生素的SOC培养基(室温),用枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管,向离心管内补加的SOC培养基定容至10ml。于37℃,225rpm振荡复苏培养1h。

【注意】:SOC培养基配方:2% Tryptone, 0.5% Yeast Extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2,10 mM MgSO4, 20mM glucose。SOC培养基营养丰富,主要用于大肠杆菌感受态细胞转化的复苏步骤,能最大化感受态细胞的转化效率。

7)        5,000rpm离心1min,重悬后取100~200μl加到含相应抗生素的SOC平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个),用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,37℃过夜培养13~17h。

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OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

OverExpress C43(DE3);C43(DE3)pLysS;BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;

货号 产品名称 规格
MF2342-1000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2342-5000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株来源于OverExpress C41(DE3)菌株,通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。OverExpress C41(DE3)来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌与OverExpress C41(DE3)相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白表达能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C43(DE3)菌株基因型:F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格
MF2342-1000UL MF2342-5000UL
MF2342-A OverExpress C43(DE3)Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2342-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

 

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

 

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

 

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内

 

4)37℃摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃培养3~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

 

IPTG母液(1M)配制

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OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

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产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格
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1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

 

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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MF2332-1000UL BL21 (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2333-1000UL Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2341-1000UL Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2342-1000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2343-1000UL TB1 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2344-1000UL Tuner(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2339-1000UL Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2340-1000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2334-1000UL BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内

 

4)37℃摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃培养3~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

 

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。

           

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Rosetta-gami;Rosetta (DE3);Origami;表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;毒性蛋白表达;

产品订购:

货号 产品名称 规格
MF2341-1000UL Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 10×100μl
MF2341-5000UL Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 50×100μl

产品组分:

组分编号           组分名

货号(规格)

MF2341-1000UL     MF2341-5000UL      
MF2341-A Rosetta-gami(DE3)pLysS Competent Cell        10×100μl 50×100μl
MF2341-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta-gami菌株为Origami衍生菌,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。该菌株补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素,氯霉素,链霉素和四环素抗性,为亮氨酸生长缺陷型菌株。

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+lacIqpro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输方法

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素之外,其他所用培养基、培养液都应含有氯霉素(34μg/ml),以防止质粒丢失。

7)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 25g
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
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MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
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Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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MF2341-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta-gami菌株为Origami衍生菌,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。该菌株补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。

pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素,氯霉素,链霉素和四环素抗性,为亮氨酸生长缺陷型菌株。

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+lacIqpro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

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本品是大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输方法

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素之外,其他所用培养基、培养液都应含有氯霉素(34μg/ml),以防止质粒丢失。

7)   Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

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3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g