AteloGene siRNA活体转染试剂盒常见问题与答

Cosmobio CSR-SYN01-COS α-突触核蛋白聚集检测试剂盒说明书

α-突触核蛋白聚集检测试剂盒是模仿在路易体痴呆/帕金森病/多系统萎缩发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。

在细胞培养检测中的细胞凝集抑制和/或预防作用可用此试剂盒检测。

【Ⅰ】Introduction

Dementia is a disease that causes memory and judgement loss,

there is no fundamental treatment developed for it. Years of scientific research has proven that protein aggregation occurs in the degeneration part of the brain for many neurodegenerative diseases including dementia, indicating appearance of this

aggregation is closely related to these diseases development and progression.

Aggregation occurs when normal protein forms abnormal structure for particular

reasons and accumulates in the cell, which each disease has different aggregating protein. It is known that protein called “ α -Synuclein“ forms abnormal structure in Parkinson Disease / Lewy Body Dementia / Multiple system atrophy patient brain.

α -Synuclein Aggregation Assay Kit mimics intracellular aggregation of “ α -Synuclein“, which allows in vitro screening of active ingredients.

【一】简介

痴呆症是一种导致记忆力和判断力丧失的疾病，没有针对它开发的基本治疗方法。 多年的科学研究证明，许多神经退行性疾病包括痴呆症，蛋白质聚集发生在大脑的退化部分，表明这种聚集的出现与这些疾病的发展和进展密切相关。

当正常蛋白质由于特定原因形成异常结构并在细胞中积累时，就会发生聚集，每种疾病都有不同的聚集蛋白。 已知称为“α-突触核蛋白”的蛋白质在帕金森病/路易体痴呆/多系统萎缩患者大脑中形成异常结构。

α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟“α-突触核蛋白”的细胞内聚集，可在体外筛选活性成分。

【Ⅱ -1】Kit Components

Storage：4℃  Do not freeze

• αSynuclein Aggregation Assay Kit can be used up to 300 wells
•  (24 well plate size) when prepared as described in【III-2】(page 2).
• Plasmidvectors of α -Synuclein Aggregation Assay Kit are generated by

【Ⅱ -2】Required but not provided:

• SH-SY5Ycell line
• Culturemedium (recommended: DE/F-12, 10％ FBS, 1％ NEAA)
• Opti-MEM®or Serum-Free medium (e.g. ThermoFisher Scientific,  no. 31985062)
• DNase,RNase-Free sterile purified water

* Please perform steps Ⅲ -1 through Ⅲ -3 under germless condition in clean bench.

【Ⅲ -1】Preparation of working solution

• pCMV-SNCA (α – Synuclein Expression plasmid vector, Red cap), pCMV-NC（Negative control vector, Green cap）, pCMV-dGFP（dGFP Expression plasmid vector, Blue cap）

Please adjust concentration with sterile purified water based on your amount needs (just before use).

e.g. 1uL/well of 10 fold dilution when used for 24 well plate size.

• F-α Syn ( α – Synuclein Fibrils, Yellow cap)

Please adjust concentration with sterile purified water based on your amount needs (just before use).

e.g. 1uL/well of 10 fold dilution when used for 24 well plate size.

* CAUTION: Prior to disposing F- α Syn, please autoclave (134 ℃ , 20 min.),

or add SDS (>3%) prior to autoclave (121℃ , 20min.). If above condition cannot be matched, please dispose accordingly to your local rules and regulations.

• MultiFectam(Gene transfection reagent）

Add 1mL of sterile purified water (room temp.) to MultiFectam and let it sit still for c.a. 10sec., vortex thoroughly. Reagent can be used up to 3 months (4 ℃ ) or 6 months (-20 ℃ ) following reconstitution. Performance of MultiFectam after reconstitution is guaranteed up to 6 times of freeze-thaw cycle; to prevent it below 6 times or less, please aliquot reconstituted reagent into multiple vials.

【Ⅲ -2】How to use the kit

• Belowexample is for use of SH-SY5Y cell
• Forthe 1st try out or when using other cell lines, please perform preliminary experiment by
• adjusting usage amount of pCMV-dGFP plasmids based on below protocol.

1   Culture necessary cell amount for preliminary experiment.

3   When cells becomes confluent (typically 1-3 days depends on cell line and culture medium conditions), follow methods in below【III-3】to adjust pCMV-SNCA and F- α Syn concentration to add into medium.

【Ⅲ-2】工具包使用方法
以下示例用于使用 SH-SY5Y 细胞
第一次尝试或使用其他细胞系时，请根据以下方案调整 pCMV-dGFP 质粒的使用量来进行初步实验。
1 初步实验所需的培养细胞数量。

3 当细胞融合时（通常 1-3 天取决于细胞系和培养基条件），按照下面【III-3】中的方法调整 pCMV-SNCA 和 F-α Syn 浓度以添加到培养基中。

【Ⅲ -3】Preparation example of pCMV-SNCA / F- α Syn / MultiFectam

• Belowexample is for preparation of 1 well of 24 well plate size (culture medium 5 mL/well).

Combine reagents according to the table below.

	Transfection test	Example
10 fold diluted pCMV-SNCA( if negative control: pCMV-NC)	–	23 µL
10 fold diluted F- α Syn	–	1 µL(0.125 µg/ well)
pCMV-dGFP	0.05 ～ 0.5 µg/well	1 µL (0.1 µg/ well)
20 mM Tris-HCl Buffer（pH 7.4）	up to 25 µL	23 µL(up to 25 µL)
Total 25 µL	25 µL	25 µL

组成	容量	规格	保存
pCMV-SNCA (α – Synuclein 表达质粒载体, 红盖) (浓度1.25 μg/μL)	32 μL	1 小瓶	4°C 不冻结
pCMV-NC(阴性对照载体, 绿盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
pCMV-dGFP(dGFP 表达质粒载体, 蓝盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
20 mM Tris-HCl Buffer (pH7.4)	10 mL	1 瓶
F-αSyn (α – Synuclein 纤维, 黄盖) (浓度1 μg/μL)	32 μL	1 小瓶
Multifectam (基因转染试剂)	0.33 mg	1 瓶

* When confirming transfection efficiency by pCMV-dGFP expression, adjust plasmid amount to become 0.05 ～ 0.5 µg/well.

Replace F- α Syn (1 µL) with 20 mM Tris-HCl Buffer（pH 7.4）. Excitation/fluorescent wavelength of dGFP is 510/521 nm.

3   Add 22 µL Opti-MEM® or Serum-Free medium, mix the reaction by vortexing to ensure that all reagents are thoroughly mixed. After mixing, spin down and incubate at room temperature for 5 min (still standing).

* 当通过 pCMV-dGFP 表达确认转染效率时，将质粒量调整为 0.05 ～ 0.5 µg/孔。

用 20 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 7.4）替换 F-α Syn (1 µL)。 dGFP 的激发/荧光波长为 510/521 nm。

3 添加 22 µL Opti-MEM® 或 无血清培养基，通过涡旋混合反应以确保所有试剂完全混合。 混合后，离心并在室温下孵育 5 分钟（静置）。

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心肌细胞

心肌细胞培养试剂盒

心肌细胞是组成心肌的细胞之一，在细胞培养中会自发性跳动。由于心肌细胞的跳动与多种刺激（比如激素、药物和电流）相关，因此它常被用于药理学和电生理学检测。该心肌细胞培养试剂盒包含冻存的心肌细胞、培养基和纤粘蛋白。冻存的心肌细胞来源于小鼠胚胎心脏。使用该试剂盒培养的心肌细胞具有良好的跳动性。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-CMC12-COS	Cardiomyocyte Culture Kit 心肌细胞培养试剂盒	ICR小鼠心脏	1 set	–
PMC-CMCM-COS	Cardiomyocyte Culture Medium 心肌细胞培养基		500 mL	-20℃

巨噬细胞相关产品( 单核白细胞(Monocyte), 破骨细胞(Osteoclast), 星形胶质细胞(Astrocyte))

单核白细胞(Monocyte)

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-BMM01-COS	Monocyte Culture Kit V-2 单核细胞培养试剂盒 V-2	SD 大鼠	1 set	–
PMC-BMMC-COS	Monocyte Precusor Cell V-1 单核细胞前体细胞 V-1	SD 大鼠	1 vial	–
PMC-BMMG-COS	Monocyte Culture Medium 单核细胞培养基	–	25 mL	-20℃
PMC-BMMW-COS	Monocyte Wash Medium 单核细胞清洗试剂	–	50 mL	-20℃

破骨细胞(Osteoclast)

破骨细胞来源于骨髓前体。由于骨吸收作用，破骨细胞参与骨量控制。骨髓前体经过适当培养（添加M-CSF 和RANKL）可以分化成具有骨吸收作用的破骨细胞。该破骨细胞培养试剂盒包含来源于小鼠或大鼠的骨髓前体细胞、洗脱液和生长培养基，保证破骨细胞的分化。试剂盒另有一块包被了支持破骨细胞分化和作为骨吸收底物材料的96 孔板，可以进行简便的、可重复性的破骨细胞功能检测。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-OSC11-COS	Osteoclast Culture Kit V-4 破骨细胞培养试剂盒，含4只细胞（SD大鼠）	SD 大鼠骨髓细胞	1 set
PMC-OSC31-COS	Osteoclast Culture Kit V-4  (Osteoassay   plate) 破骨细胞培养试剂盒（附骨分析板），含4只细胞（SD大鼠）	SD 大鼠骨髓细胞	1 set
PMC-OSC12-COS	Osteoclast Culture Kit V-2 破骨细胞培养试剂盒，含2只细胞（SD大鼠）	SD 大鼠	1 set
PMC-OSC32-COS	Osteoclast Culture Kit V-2(Osteoassay plate) 破骨细胞培养试剂盒（附骨分析板），含2只细胞（SD大鼠）	SD 大鼠	1 set
PMC-OSC13-COS	Osteoclast Culture Kit V-2 破骨细胞培养试剂盒，含2只细胞（ICR小鼠）	ICR 小鼠	1 set
PMC-OSC14-COS	Osteoclast Culture Kit V-1 破骨细胞培养试剂盒，含1只细胞（ICR小鼠）	ICR 小鼠	1 set
PMC-OSCMM-COS	Osteoclast Culture Medium(for Mouse) 小鼠破骨细胞培养基		50 mL	-20℃
PMC-OSCMR-COS	Osteoclast Culture Medium (for Rat) 大鼠破骨细胞培养基		50 mL	-20℃
PMC-OSCMW-COS	Osteoclast Wash Medium 破骨细胞清洗液		100 mL	-20℃
PMC-AK30-COS	RANKL (Human) 人重组RANKL蛋白		10 μg	-20℃

星形胶质细胞(Astrocyte)

星形胶质细胞是一类在中枢神经系统发现的神经胶质细胞，在神经系统结构、体内平衡、胞外液维持和血脑屏障的形成中起重要作用。

大鼠星形胶质细胞 星形胶质细胞免疫染色 绿色：抗GFAP 染色　　蓝色：细胞核染色

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-AST01-COS	Astrocyte Culture Kit 星形胶质细胞培养套装	SD 大鼠	1 set	–
PMC-ASTM-COS	Astrocyte Culture Medium 星形胶质细胞培养基	–	250 mL	-20℃

 

骨相关产品( 软骨细胞(Chondrocyte), 成骨细胞(Osteoblast), 骨生成(Osteogenesis)）

软骨细胞(Chondrocyte) 培养试剂盒

该试剂盒用于软骨细胞分化和行为的研究，多用于肘关节相关的药物研发和软骨再生研究。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-CHC04-COS	Chondrocyte Culture Kit V-1 软骨细胞培养试剂盒	日本白兔	1 set	–
PMC-CHCG-COS	Chondrocyte Growth Medium 软骨细胞生长培养基	–	500 mL	4℃
PMC-CHCM-COS	Chondrocyte Differentiation Medium 软骨细胞分化培养基	–	500 mL	4℃

含量测定试剂盒

用于胞外主要成分酸性粘多糖的简易定量检测。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-AK03-COS	Acidic Mucopolysaccaride Assay Kit 酸性 黏多糖检测试剂盒	定量检测酸性粘多糖	1 kit (100 tests)	4-10℃，勿冻

来源于颅骨培养试剂盒的成骨细胞(Osteoblast)

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-OBC02-COS	Osteoblast From Cranial Bone Culture Kit V-1 造骨细胞培养试剂盒 V-1	SD 大鼠	1 set	–
PMC-OBCM-COS	Osteoblast From Cranial Bone Culture Medium 成骨细胞培养基	–	500 mL	-20℃

检测试剂盒

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-AK20-COS	Alkaline Phosphatase Staining Kit 碱性磷酸酶染色试剂盒	检测成骨细胞	1 kit(12孔板×10)	4-10℃，勿冻
PMC-AK21-COS	Calcified Nodule Staining Kit 钙化结节染色试剂盒	检测钙化结节	1 kit(24孔板×10)	室温

 

成骨细胞培养试剂盒

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-OGC11-COS	Osteogenesis Culture Kit 骨生成培养试剂盒	ICR 小鼠	1 vial	–
PMC-OGCMG-COS	Growth Medium For Osteogenesis Culture Kit 成骨生长培养基	–	250 mL	-20℃
PMC-OGCMO-COS	Osteogenesis Culture For Osteogenesis Culture Kit 成骨培养基	–	250 mL	-20℃

 

培养细胞的形态学观察

A：0 天

B：汇合状态细胞

C：用骨生成培养试剂盒中的培养基培养三周

(35 mm培养皿)

D：3T3-E1 细胞用骨生成培养试剂盒( 小

鼠) 中的培养基培养( 产品编号：PMCOGCMO-

COS) (35 mm培养皿)

E：骨生成培养试剂盒( 小鼠) 中的细胞( 产品

编号：PMC-OGC11-COS) (24 孔板)

 

脂肪细胞( 皮下脂肪(Subcutaneous fat)、附睾脂肪(Epididymal fat)、内脏脂肪(Visceral fat) 和褐色脂肪(Brown fat) )

可用于肥胖/糖尿病/高血压/动脉硬化等疾病的药物研发、减肥食品的功能检测和脂质代谢分析。

白色脂肪细胞培养试剂盒

白色脂肪细胞是皮下脂肪细胞中的一种，它在能量储存中发挥很大作用。该试剂盒包含脂肪前体细胞及其培养基，细胞分离自大鼠皮下脂肪组织， 培养基可诱导脂肪前体细胞分化为成熟脂肪细胞。该试剂盒为脂肪代谢机制的研究和药物对代谢综合征 （肥胖，糖尿病，高血压）影响的分析提供了简便的方法。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-SAC01-COS	Subcutaneous Adipocyte Culture Kit V-1 皮下脂肪细胞培养试剂盒 V-1	3D 大鼠	1 set	–
PMC-SACMR-COS	White Adipocyte Culture Medium 白色脂肪细胞培养基		250 mL	-20℃

附睾脂肪细胞培养试剂盒

附睾脂肪细胞培养试剂盒H-1( 小鼠)(PMC-EAC11-COS) 包含脂肪前体细胞及其培养基，细胞分离自小鼠附睾组织，培养基可诱导脂肪前体细胞分化为成熟脂肪细胞。该试剂盒为脂肪代谢机制的研究和代谢综合征（肥胖，糖尿病，高血压）药效检测提供了简便的方法。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-EAC01-COS	Epididymal Adipocyte Culture Kit V-1 附睾脂肪细胞培养试剂盒 V-1	3D 大鼠	1 set	–
PMC-EAC11-COS	Epididymal Adipocyte Culture Kit H-1 附睾脂肪细胞培养试剂盒 H-1	ICR 小鼠	1 set	–
PMC-EACMR-COS	Epididymal Adipocyte Culture Medium 附睾脂肪细胞培养基		250 mL	-20℃

内脏脂肪细胞培养试剂盒

   内脏脂肪细胞培养基可诱导脂肪前体细胞分化为脂肪细胞。内脏脂肪细胞培养基 ver.2 包含1 ng/mL 的胰岛素和生理浓度的生长因子，比ver.2（10,000 ng/mL 胰岛素，无生长因子）更接近体内环境。两种培养基都不包含外源性诱导分化剂。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-VAC01-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit V-1 内脏脂肪细胞培养试剂盒 V-1	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VACH2-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit H-2 内脏脂肪细胞培养试剂盒 H-2	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VAC21-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit V-1 ver. 2 内脏脂肪细胞培养试剂盒 V-1 ver.2	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VAC22-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit V-1 ver. 2 内脏脂肪细胞培养试剂盒 V-1 ver.2	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VAC31-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit PM01 内脏脂肪细胞培养试剂盒 PM01	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VAC41-COS	Visceral Adipocyte Culture Kit PM02 内脏脂肪细胞培养试剂盒 PM02	3D 大鼠	1 set	–
PMC-VACM2-COS	Visceral Adipocyte Culture Medium ver. 2 内脏脂肪细胞培养基 ver 2		250 mL	-20℃
PMC-VACMR-COS	Visceral Adipocyte Culture Medium ver. 1 内脏脂肪细胞培养基 ver 1		250 mL	-20℃
CSR-COS-PM01	Cosmedium VAC SF-V1 (high insulin concentration, low serum) 前体脂肪细胞维持培养基（Visceral Adipocyte Culture Kit PM01配套）		250 mL	-20℃
CSR-COS-PM02	Cosmedium VAC SF-V2 (low insulin concentration, no serum) 前体脂肪细胞维持培养基（Visceral Adipocyte Culture Kit PM02配套）		250 mL	-20℃

前脂肪细胞培养试剂盒

    　前脂肪细胞培养试剂盒包含内脏脂肪、附睾脂肪和皮下白色脂肪细胞。可以用来比较不同器官脂肪的功能。每个试剂盒中的细胞都来自同一个动物。

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-VESH3-COS	Preadipocyte Culture Kit H-3 前体脂肪细胞培养试剂盒H-3	3D 大鼠	1 set (1.5×106cells×1)	-70℃
PMC-VESQ3-COS	Preadipocyte Culture Kit Q-3 前体脂肪细胞培养试剂盒Q-3	3D 大鼠	1 set (1.5×106cells×1)	-70℃

 

褐色脂肪细胞培养试剂盒

PMC-BAT10-COS 的培养基里含有诱导分化剂，而PMC-BAT11-COS 的培养基不含有任何诱导分化剂。两个试剂盒中的褐色脂肪前体细胞都能够分化并且表达解偶联蛋白-1(uncoupling protein-1，UCP-1)。

人皮下脂肪细胞用Lipid Assay Kit染色效果图

产品编号	产品名称	来源	规格	保存条件
PMC-BAT10-COS	Brown Adipocyte Culture Kit D-I 褐色脂肪培养试剂盒D-i	SD 大鼠	1 set	–
PMC-BAT11-COS	Brown Adipocyte Culture Kit N-i 褐色脂肪细胞培养试剂盒N-i	SD 大鼠	1 set	液氮
PMC-VACM2-COS	Visceral Adipocyte Culture Medium ver. 2 内脏脂肪细胞培养基 ver 2		250 mL	-20℃
PMC-VACMR-COS	Visceral Adipocyte Culture Medium ver. 1 内脏脂肪细胞培养基 ver 1		250 mL	-20℃
CSR-COS-PM01	Cosmedium VAC SF-V1 (high insulin concentration,low serum) 前体脂肪细胞维持培养基（Visceral Adipocyte Culture Kit PM01配套）		250 mL	-20℃
CSR-COS-PM02	Cosmedium VAC SF-V2 (low insulin concentration,no serum) 前体脂肪细胞维持培养基（Visceral Adipocyte Culture Kit PM02配套）		250 mL	-20℃
PMC-BATDM-COS	Brown Adipocyte Differentiation Medium 棕色脂肪细胞分化培养基		500 mL	-20℃
PMC-BATGM-COS	Brown Adipocyte Growth Medium 棕色脂肪细胞生长培养基		500 mL	-20℃
PMC-BATMM-COS	Brown Adipocyte Maintenance Medium 棕色脂肪细胞维持培养基		500 mL	-20℃
PMC-BATFM-COS	Brown Adipocyte Culture Medium 棕色脂肪细胞培养基		250 mL	-20℃

Cosmobio BINKIT® NK 细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）BINKIT® for NK cells expansion from PBMCs

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

TRAP Staining Kit

Introduction

The TRAP Staining Kit (Cat.No.PMC-AK04F-COS) is used for the staining of Tartrate-Resistant Acid Phosphatase in osteoclasts. Bone mass is controlled by the balance between the activity of osteoblasts bone formation and the activity of osteoclasts. Alkaline phosphatase (ALP: ALP staining kit, Cat.No.PMC-AK20-COS) and tartrate-resistant acid phosphate are used as markers for osteoblasts and osteoclasts, respectively.

Components

Component	Quantity	Storage
Tartrate-containing Buffer	50mL	4ºC Do not freeze
Chromogenic Substrate	10vials	4ºC

One kit contains regents for 10 × 96-well plates

 

Additional Materials Required

・10% Formalin Neutral Buffer Solution

・Phosphate Buffered Saline (PBS)

・Distilled or deionized water

Protocol (96-well plate format)

1. Removeculture  Wash each well once with 100uL of PBS.
2. Add50uL of the 10% Formalin Neutral Buffer Solution to each well and fix for 5 minutes at room
3. Washeach well with 250uL of deionized  (× 3 times)
4. Dissolve1 vial of Chromogenic Substrate with 5mL of Tartrate-containing
5. Add50uL of Chromogenic Substrates to each
6. Incubateat 37℃ for 20-60  Adjust incubation time until stained TRAP is clearly showing the result in figure 1.
7. Washwith deionized water to stop the

Note: Excess incubation will be cause of over stained.