Coelenterazine 400 a 腔肠素400a；DeepBlue C；海肾荧光素酶（Rluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；BRET2 生物发光共振能量转移 ；CAS NO：70217-82-2；

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

腔肠素400a（Coelenterazine 400a，CTZ 400a），常称为DeepBlue C，是一种天然腔肠素衍生物，是一款良好的海肾荧光素酶（Rluc）底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）底物。可用来实时监测钙离子浓度，报告基因分析，以及用作生物发光共振能量转移（BRET）的首选底物。腔肠素400a的最大射波峰值约在400nm，从而对GFP受体的发射峰干扰最小。腔肠素400a用在BRET2体系，该体系通常用来评估蛋白-蛋白相互作用，包括涉及G蛋白偶联受体介导的药物细胞信号通路分析，是一种有效的药物开发和筛选工具。

产品描述

1）   CAS NO：70217-82-2

2）   化学名：2,8-Dibenzyl-6-phenyl-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 6-phenyl-2,8-bis(phenylmethyl)-imidazo [1,2-a]pyrazin-3(7H)-one;

3）   同义名：CTZ 400a; 1-bisdeoxycoelenterazine; di-dehydrocoelenterazine; DeepBlueCTM; 腔肠素400a；

4）   分子式：C26H21N3O

5）   分子量：391.5 g/mol

6）   纯度：>97%

7）   外观：黄色至橙色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。

2）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。

3）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

4）   腔肠素400a（Coelenterazine 400a）的另一个通用名DeepBlueCTM是BioSignal Packard公司的商标名。

5）   不同的BRET系统对底物的选择上会有差异（附录3—用于PPI研究的BRET系统汇总表），腔肠素400a 主要用在BRET2系统。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 腔肠素400a的溶解事项

1）   腔肠素400a不溶于水，接触到空气，水分或任何氧化剂都不稳定。溶于甲醇或乙醇，千万不要溶于DMSO，因会发生未知反应引起腔肠素400a的快速降解并生成未知的代谢产物。

2）   毒性最小的溶剂是无水乙醇，可溶解粉末配制成0.1-1mg/ml溶液，之后加入需要的缓冲液，尽量保持缓冲液pH小于7.0，因碱性条件会快速降解腔肠素400a，有时沉淀会立即产生。

二、 腔肠素400a的保存事项

最好在使用前，才用无水乙醇溶解腔肠素400a粉末，然后用所选的缓冲液稀释并混匀。此时配好的工作缓冲液需静置20-30min使其稳定（因部分底物会发生自氧化）后才进行体外实验。该工作液能稳定保存几个小时（室温3-4h），仅微弱的信号衰减可能发生。

不建议将腔肠素400a的乙醇溶液置于-20℃或-70℃保存，因天然腔肠素及任何衍生物含有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。

附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

附录2 天然腔肠素及其衍生物的应用差异

附录3 用于PPI研究的BRET系统汇总表

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Coelenterazine (CTZ) 腔肠素；CTZ h 天然腔肠素h；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：50909-86-9；

产品信息

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

本品为专供体内成像研究的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine），不仅含有超纯的腔肠素h（＞99%），还提供特别设计的Inject-Diluent溶剂，能够最大程度的溶解腔肠素h，从而最小化体内注射体积。另外，与传统乙醇溶解的腔肠素h相比，用Inject-Diluent溶解的腔肠素h能得到更好的荧光信号。

产品组分

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品特别开发适用于体内实验。若仅做体外实验，可使用我司提供的天然腔肠素（Coelenterazine Native）（#MX4606-1MG）或腔肠素h（Coelenterazine h）（#MX4608-1MG）。

2）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

3）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1．   使用装有23 gauge或更小针头的0.5-1.0ml注射器，吸取150μl 温热（35-50℃）的Inject-Diluent。

2．  将150μl Inject-Diluent打入Native Coelenterazine瓶内，使用针头和注射器上下吸打或低速涡旋，直至看到完全透明溶液，此时得到腔肠素溶液浓度为3.33mg/ml。如果溶液没有完全透明，用水浴锅或加热板在60-80℃加热几分钟，检查完全透明。

3．   按下表1，用胰岛素注射器吸取15-75μl充分溶解的腔肠素h溶液（3.33mg/ml），通过尾静脉注射到动物体内。检查，排气，冲洗针头。使用胰岛素注射器的优势在于很低的液体滞留体积（＜2μl）。缓慢注射。

建议按照表1单只小鼠（25g体重）的腔肠素h溶液（3.33mg/ml）注射剂量表

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产品信息

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腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

本品为专供体内成像研究的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine），不仅含有超纯的腔肠素h（＞99%），还提供特别设计的Inject-Diluent溶剂，能够最大程度的溶解腔肠素h，从而最小化体内注射体积。另外，与传统乙醇溶解的腔肠素h相比，用Inject-Diluent溶解的腔肠素h能得到更好的荧光信号。

产品组分

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品特别开发适用于体内实验。若仅做体外实验，可使用我司提供的天然腔肠素（Coelenterazine Native）（#MX4606-1MG）或腔肠素h（Coelenterazine h）（#MX4608-1MG）。

2）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

3）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1．   使用装有23 gauge或更小针头的0.5-1.0ml注射器，吸取150μl 温热（35-50℃）的Inject-Diluent。

2．  将150μl Inject-Diluent打入Native Coelenterazine瓶内，使用针头和注射器上下吸打或低速涡旋，直至看到完全透明溶液，此时得到腔肠素溶液浓度为3.33mg/ml。如果溶液没有完全透明，用水浴锅或加热板在60-80℃加热几分钟，检查完全透明。

3．   按下表1，用胰岛素注射器吸取15-75μl充分溶解的腔肠素h溶液（3.33mg/ml），通过尾静脉注射到动物体内。检查，排气，冲洗针头。使用胰岛素注射器的优势在于很低的液体滞留体积（＜2μl）。缓慢注射。

建议按照表1单只小鼠（25g体重）的腔肠素h溶液（3.33mg/ml）注射剂量表

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产品信息

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

产品特性

1）   CAS NO：50909-86-9

2）   化学名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3）   同义名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脱氧腔肠素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine;

Luciferin (Renilla) 海肾荧光素；

4）   分子式：C26H21N3O2

5）   分子量：407.5 g/mol

6）   纯度：>98%

7）   外观：黄色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，导致不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素h溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3）   体内动物实验，推荐使用我司（金畔生物）特别开发和优化的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（#MX4609-1MG）或注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（#MX4607-1MG）。

4）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

5）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1   腔肠素母液制备

将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500µg腔肠素h内加入102µl 酸化的醇溶液（100%甲醇或100%乙醇中含有20µl/ml 3N或6N HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。也可根据下游应用配制成适宜浓度的腔肠素母液（1~5mg/ml）。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存1~3周。若存放在惰性气体内可相对延长保存周期。

1.2   腔肠素工作液制备

直接用去气蒸馏水（degased distilled water），PBS或者其他类型生理缓冲液（pH 6.6-7.2）稀释，选择的稀释缓冲液需考虑到与酶系统配合。工作液需现配现用。比如，可直接用不含Ca2+/Mg2+的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暂存放。最佳反应液浓度请根据下游应用来调整。

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产品信息

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

产品特性

1）   CAS NO：50909-86-9

2）   化学名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3）   同义名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脱氧腔肠素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine;

Luciferin (Renilla) 海肾荧光素；

4）   分子式：C26H21N3O2

5）   分子量：407.5 g/mol

6）   纯度：>98%

7）   外观：黄色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，导致不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素h溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3）   体内动物实验，推荐使用我司（金畔生物）特别开发和优化的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（#MX4609-1MG）或注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（#MX4607-1MG）。

4）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

5）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1   腔肠素母液制备

将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500µg腔肠素h内加入102µl 酸化的醇溶液（100%甲醇或100%乙醇中含有20µl/ml 3N或6N HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。也可根据下游应用配制成适宜浓度的腔肠素母液（1~5mg/ml）。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存1~3周。若存放在惰性气体内可相对延长保存周期。

1.2   腔肠素工作液制备

直接用去气蒸馏水（degased distilled water），PBS或者其他类型生理缓冲液（pH 6.6-7.2）稀释，选择的稀释缓冲液需考虑到与酶系统配合。工作液需现配现用。比如，可直接用不含Ca2+/Mg2+的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暂存放。最佳反应液浓度请根据下游应用来调整。

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Coelenterazine (CTZ) 腔肠素；CTZ h 天然腔肠素h；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：50909-86-9；

产品信息

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

产品特性

1）   CAS NO：50909-86-9

2）   化学名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3）   同义名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脱氧腔肠素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine;

Luciferin (Renilla) 海肾荧光素；

4）   分子式：C26H21N3O2

5）   分子量：407.5 g/mol

6）   纯度：>98%

7）   外观：黄色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，导致不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素h溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3）   体内动物实验，推荐使用我司（金畔生物）特别开发和优化的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（#MX4609-1MG）或注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（#MX4607-1MG）。

4）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

5）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1   腔肠素母液制备

将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500µg腔肠素h内加入102µl 酸化的醇溶液（100%甲醇或100%乙醇中含有20µl/ml 3N或6N HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。也可根据下游应用配制成适宜浓度的腔肠素母液（1~5mg/ml）。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存1~3周。若存放在惰性气体内可相对延长保存周期。

1.2   腔肠素工作液制备

直接用去气蒸馏水（degased distilled water），PBS或者其他类型生理缓冲液（pH 6.6-7.2）稀释，选择的稀释缓冲液需考虑到与酶系统配合。工作液需现配现用。比如，可直接用不含Ca2+/Mg2+的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暂存放。最佳反应液浓度请根据下游应用来调整。

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