Reactive oxygen species (ROS) 活性氧;DCFH-DA;HPF羟苯基荧光素;Mitosox 线粒体超氧化物探针;Dihydroethidium (DHE) 二氢乙锭;ROSGreenTM H2O2Probe;Life (Molecular Probe);
CellROX Deep Red Reagent是一种检测活细胞氧化应激的新型荧光探针。此细胞膜渗透性的染料在还原态时无荧光或呈微弱荧光,一旦被活性氧物质(ROS)氧化后发明亮稳定的荧光,最大吸收/发射波长约~ 644/ 665nm(见图I.CellROX Deep Red氧化后的荧光光谱图)。其荧光信号主要定位在细胞质。CellROX Deep Red Reagent的深红色荧光信号与其他活细胞染料和GFP兼容,使其适用于多重荧光试验来测定各种细胞现象,包括与细胞毒性和细胞死亡的参数。不同于其它的ROS探针,比如H2DCFDA(MX4802-50MG),CellROX Deep Red Reagent的荧光信号经醛类固定后也能保留,使其相对于传统的ROS探针来说在应用和操作流程更加灵活。CellROX Deep Red Reagent与各种检测平台兼容,比如传统荧光显微镜、高内涵筛选仪器(HCS)、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛选(HTS)。还与各种台式仪器兼容,比如Attune™仪器。
本品以稳定、即用型的DMSO溶液形式提供,浓度为2.5mM,操作简单,与荧光显微镜的标准工作流程兼容。每管染料(50µl)足够做1个96孔板或20张爬片。适用于任何细胞类型的氧化应激检测。
保存与运输方法
保存:≤-20ºC避光保存,保持干燥,1年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
- 本品对光和空气敏感,使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
- 需要自行准备的材料
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- 细胞和培养基
- 生理盐缓冲液(PBS,pH 7.2-7.6)
- 【可选】固定剂(比如,溶于PBS的3.7%甲醛)
- 实验步骤
以下步骤专门为BPAE,HepG2, U-2 OS和RAW巨噬细胞所开发,优化后的染色工作浓度为5µM,但是此实验适用于任何细胞类型。生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记效率。在初始实验,建议设置浓度梯度,以确定最佳的实验条件和适合研究细胞类型的工作浓度。
CellROX Deep RedReagent对光和空气敏感,使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。
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- 用待测化合物或药物处理细胞,孵育一定时间。【注】:待测化合物或药物处理后没有必要去除培养基。
- 加CellROX Deep RedReagent到细胞内使其终浓度为5µM,37℃孵育30min。
- 去除培养基,用PBS清洗3次。
- 【可选】可用3.7%甲醛固定细胞15min。需在CellROX Deep RedReagent染色2h内进行荧光信号检测。
- 【可选】此时可用NucBlue活细胞染料(一种细胞核复染剂)或其他复染剂如Hoechst 33342(CAT#:MX4204-10ML)对细胞染色。
应用示例
图II. CellROX Deep RedReagent测定牛肺动脉内皮细胞(BPAE)的氧化应激水平。在96孔板内接种BPAE细胞。之后用含维生素K3(100µM)或不含维生素K3的培养基37℃处理1h【在孵育的后30min时向某些对照和维生素K3处理孔内加入超氧化物清除剂MnTBAP(100µM)】。之后细胞用CellROX Deep RedReagent(5µM)和Hoechst 33342染色,将探针加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后,之后成像检测。
相关产品
名称 | 规格 | |
Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit活性氧(ROS)检测试剂盒 | 100~500T | |
H2DCFDA (DCFH-DA)活性氧(ROS)荧光探针 | 50mg | |
Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基荧光素 | 1mg | |
Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素 | 1mg | |
30% H2O2Solution 30%过氧化氢溶液(30%双氧水) | 500ml | |
tert-Butyl hydroperoxide (TBHP) Solution 叔丁基过氧化氢溶液 | 50ml | |
PMA (TPA, 5mg/ml) 佛波肉荳蔻醋酸(5mg/ml) | 100μl | |
Dihydrorhodamine 123 (DHR 123) 二氢罗丹明123 | 1mg | |
Luminol 鲁米诺 | 1g | |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | 500μg | |
CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection 氧化应激检测用探针(绿色) | 50µl | |
CellROX Deep Red Reagent, for oxidative stress detection 氧化应激检测用探针(深红色) | 50µl |