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323192-14-9 Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

发表于由

Cell-Tracker Green CMFDA；CellTracker™ Orange CMTMR；Cell movement 细胞运动；Cell location 细胞定位；Cell Tracker dye 细胞示踪探针；CAS NO：323192-14-9；

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Orange CMTMR，英文全名：5-(and-6)-(((4-chloromethyl)benzoyl)amino)tetramethylrhodamine) (mixed isomers)，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Orange CMTMR特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（541/565nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  CAS NO.：323192-14-9

2）  同义名：CellTracker™ Orange CMTMR;Xanthylium, 9-[2-carboxy-4(or 5)-[[4-(chloromethyl) benzoyl]amino]phenyl]-3,6-bis(dimethylamino)-, inner salt

3）  分子式：C32H28ClN3O4

4）  分子量：554.04 g/mol

5）  外观：紫色固体

6）  溶解性：溶于DMSO

7）  化学结构式： 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例

文献1）McKee AS et al.Host DNA released in response to aluminum adjuvant enhances MHC class II-mediated antigen presentation and prolongs CD4 T-cell interactions with dendritic cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Mar 19;110(12): E1122-31. PMID: 23447566

操作方法（多光子显微镜）：CD4 T cellswere isolated from OTII or B6 mice using the CD4 T-cell negative isolation kit andwere labeled with 20 μM CMTMR or 2 μM CFSE, washed three times, and injected i.v. into B6 or CD11c-YFP recipients. Twenty-four hours later, these recipient mice were immunized with 20 μg of AF647-labeled ova + 200 μg of Alhydrogel and 5 mg of either BSA or DNase. From 20–24 h following immunization, mice were killed and their draining popliteal LNs were surgically removed for imaging. 

文献2）Nikitina EY et al.Combination ofγ‐irradiation and dendritic cell administration induces a potent antitumor response in tumor‐bearing mice: Approach to treatment of advanced stage cancer. Int J Cancer. 2001 Dec 15;94(6):825-33. PMID: 11745485

操作方法（组织内细胞分布评估）：DCs were labeled with 20 μM cell tracker orange (CMTMR) by incubation in RPMI 1640 at 37℃ for 30 min. Cells were then washed in PBS once, incubated for 30 min more and injected (107/mouse) intravenously (i.v.) or subcutaneously (s.c.) near the tumor site. Eighteen hours later lung, spleen, liver, superficial inguinal and popliteal LN as well as tumor tissue were taken out and snap‐frozen in tissue freezing media at−80°C. Frozen tissue sections were examined by fluorescence microscopy using a 540 nm filter. Labeled cells were counted in 10 fields at the total magnification ×200.

Fig. DC labeled with cell tracker CMTMR inside MethA sarcoma. Unlabeled (I) or CMTMR‐labeled (II, III) DCs (107) were injected i.v. (II) or s.c. (III) into MethA sarcoma‐bearing mice 3 hr after irradiation of the tumor with 10 Gy. Tumors were excised 18 hr later and cryostat sections were performed. Slides were analyzed by fluorescence microscopy using a 540‐nm filter. One of the representative fields with a total magnification of 200× is shown. 

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对1mgCell-Tracker Green CMFDA（Mw:464.86 g/mol）冻干粉，加入215µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

相关产品

 名称 规格                  

           

 Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 1mg

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）        

2×50μg
Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

2×50μg
Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素

1g
Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末）

10mg

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒

发表于由

CFDA, SE；Calcein AM 钙黄绿素；Cell Division 细胞分化（分裂）；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒（CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit）是一款基于荧光探针CFDA, SE，用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。此方法目前广泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-thymidine incorporation）等细胞增殖检测方法。本试剂盒包含粉末形式的CFDA, SE探针，细胞培养级的溶剂，以及细胞标记液，使用方便，操作简单。按照每个样本的标记体积为1ml来算，我司（金畔生物）提供两种规格的试剂盒，分别可检测500个和1000个样品。

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品包装

编号 组分 保存方法

产品编号/规格
500T 1000T
A CFDA SE粉末 -20ºC避光保存 1管 1管×2
B CFDA SE溶剂 -20ºC避光保存 1ml 1ml×2
C 细胞标记液（10X） -20ºC~4℃保存 50ml×2 50ml×4

保存与运输方法

保存：-20ºC保存，开封前1年有效，其中组分A（CFDA SE粉末）需严格避光，组分B避免强光照射。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） CFDA SE溶剂在低温（如4℃，冰浴）等条件下会凝固而粘在离心管底、管壁或盖子上，可将其置于25℃温育片刻直至全部融解后使用。

2） CFDA SE粉末经溶剂溶剂配制成储存液后一个月内用完最好，最多不超过三个月。因CFDA SE容易被水解，并在水溶液中变质。使用过程中尽量避免接触水。而在标记过程中接触到水是在允许范围内。

3） 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. CFDA SE储存液（1000X）制备

a） 将低温保存的CFDA SE粉末置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。同时也提前将CFDA SE溶剂置于室温或25℃水浴片刻直至充分融解。

b） 吸取一定量CFDA SE溶剂（比如400μl）到CFDA SE粉末中，充分溶解，短暂低速离心，之后全部转移到剩下的CFDA SE溶剂中，混匀后，此即为CFDA SE储存液（1000X）。此配制过程需要避光。

c） 按照单次用量分装，用铝箔纸包好后，置于≤-20℃避光干燥保存，最好一个月内用完，最长不超过三个月。-70℃保存能适当延长保存周期。

2. CFDA SE标记液（1X）制备

准备适量无菌的细胞培养级去离子水，根据实验需要用量，配制适量的CFDA SE标记液（1X）。比如，取10ml 细胞标记液（10X），加入90ml 去离子水，充分混匀后，即得到CFDA SE标记液（1X），短期置于4℃保存，长期不用可置于-20℃保存。

3. 染色步骤

a） 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

b） PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后再同上离心吸掉上清。

c） 用1ml CFDA SE标记液（1X）重悬细胞，调整密度为1-5 x 106cells/mL，转移到15ml离心管内。

d） 用CFDA SE标记液（1X）将CFDA SE储存液（1000X）稀释到2X。比如，取2μl CFDA SE储存液（1000X）到1ml CFDA SE标记液（1X），混匀后即为CFDA SE储存液（2X）。

e） 将1ml CFDA SE储存液（2X）加入到步骤c）中含1ml 待标记细胞的15ml离心管内，轻轻混匀。

f） 37℃避光孵育15min。【具体的孵育时间可根据实际情况做适当调整，常用孵育时间10-30min。】

g） 立即加入10ml完全细胞培养液（含血清）来淬灭染色过程，室温颠倒几次混匀。

h） 室温离心去上清，再用5-10ml完全细胞培养液清洗一次。

i） 再加入5-10ml完全细胞培养液，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

j） 之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜（Ex/Em=492/517nm，FITC滤片）或流式细胞仪（FL1通道）来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

常见应用和数据示例：

根据荧光信号的稀释来检测细胞增殖和分化（示踪）（Cell proliferation and cell division by Dye Dilution Method），此方法主要用来体内外检测淋巴细胞（T细胞和B细胞）的增殖，也能用来检测NK细胞，成纤维细胞甚至细菌。也有用来研究可移植造血干细胞的增殖。

示例1（体外）.

Fig 1. Murine CD4+lymphocytes, labelled with CDFA-SE were cultured with antigen-presenting cells with different peptides to stimulate either the memory or the memory and naïve cells. Up to five cell divisions can be observed.

示例2（体内）.

Fig 2. Ability of CFSE-labeled ovalbumin (OVA)-specific T cell receptor transgenic CD8+ OT-I T cells, when adoptively transferred into C57BL/6 mice to respond to OVA, data shown 3 days after adoptive transfer. Left panel: CD8+, CD45.1+ OT-1 T cells in recipient mice. Right panel: CFSE proliferation profile. Note non-divided population of CD8+ T cells in recipient mice not receiving antigen (light grey histogram) and auto-fluorescence of non-labeled lymphocytes (dark grey histogram). The Figure depicts CD8+ T cells that have divided 1-6 times based on CFSE dilution peaks. [Quah BJ et al. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. J Vis Exp. 2010 Oct 12;(44).]

相关产品

产品名称 规格
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针 5mg
Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色） 50μg
PKH26 Red Fluorescent Probe for General Cell Membrane Labeling

PKH26红色荧光探针（用于常规细胞膜标记）

 100μl

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色）

发表于由

描述

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色）

 

产品信息

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色）

 MX4112-5MG 5mg

1598
Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色） MX4112-25MG 25mg

4698

 

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Blue CMAC，英文全名：7-amino-4-chloromethylcoumarin（7-氨基-4-氯甲基香豆素），是氨基香豆素的氯甲基衍生物，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Blue CMAC特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Blue CMAC的激发和发射光谱（353/466nm）与绿色荧光蛋白GFP或红色荧光蛋白RFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特征

1） CAS NO.：147963-22-2

2） 同义名：CellTracker Blue CMAC; 7-amino-4-chloromethylcoumarin; 7-氨基-4-氯甲基香豆素;

3） 分子式：C10H8ClNO2

4） 分子量：209.6 g/mol

5） 外观：白色至类白色固体

6） 溶解性：溶于DMSO

1） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 整个染色过程中需注意避光。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1 制备Cell-Tracker染色工作液

① 开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

② 用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为25mM。例如，对5mgCell-Tracker Blue CMAC（Mw: 209.63 g/mol）冻干粉，加入954µl DMSO充分溶解，即得到25mM母液。储存液根据单次用量分装避光冻存，减少反复冻融次数。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

2.2 悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤ 根据附表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3 贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

相关产品

货号 名称 规格
MX4107-100UG Cell-Tracker Green CMFDA活细胞示踪探针（绿色） 2×50μg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR活细胞示踪探针（橙色） 2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4110-30UG Cell-Tracker Deep Red活细胞示踪探针（深红色） 2×15µg
MX4111-1Kit Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色） 1kit
MX4112-5MG Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色） 5mg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA)二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide碘化丙啶（粉末） 10mg

 

 

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）PKH67；PKH26；Calcein AM钙黄绿素

发表于由

PKH67；PKH26；Calcein AM钙黄绿素；PKH67；CFDA SE；In vivo cell tracking体内细胞示踪；Sigma MINI26；Phanos Technologies；

产品信息

产品名称

               规格         

PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling     

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）

 100μl
200μl

500μl

 

产品名称

                  规格                              

Diluent C for General Membrane Labeling

稀释液C（用于常规细胞膜标记）

10ml

30ml

产品描述

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）（PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling）是一款基于荧光探针PKH67，用于常规细胞膜标记的检测试剂盒，适用于体外细胞标记，体外细胞增殖以及长期的体内细胞跟踪研究等。

PKH67是一种专利的膜标记探针，与PKH1和PKH2相比，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能稳定插入细胞膜脂质区域。正因具更长碳尾，内部数据连续性证明：PKH67具有比PKH2更低的细胞-细胞间转运发生。PKH67呈绿色荧光（见图1），最大激发波长为490nm，最大发射波长是502nm，与标准荧光素（Fluorescein）滤片兼容。PKH67非常适合用于细胞毒性实验，与碘化丙啶（PI，MX4205）或7-氨基放线菌素D（7-AAD，MX4215）这些细胞活力探针联合使用，或者与橙-红色荧光探针比如藻红蛋白（PE，MX4698）、红色荧光蛋白（RFP）等结合使用。根据染料稀释原理，PKH67常用于细胞增殖监测分析，包括抗原特异性的前体频率和带干细胞特性的静息/缓慢分化肿瘤细胞的鉴定。也能用于监测外泌体或脂质体吞噬，细胞-细胞膜转运、吞噬、抗原递呈，以及体内细胞运输研究。

以不分裂细胞为研究对象，通过对体外细胞膜滞留周期和体内荧光强度减弱频率的关联性分析，预测PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。这与PKH1和PKH2的体内半衰期相近，这两个探针都成功用于监测周期长达1-2个月的体内淋巴细胞和巨噬细胞运输研究，因此，PKH67适用于需要绿色荧光细胞连接染料的短-中期体内示踪研究，以及体外细胞毒性、吞噬、增殖、抗原递呈，或其它共培养实验。

稀释液C（Diluent C）是本试剂盒配套提供的一种水溶性溶液，特别设计的一种标记媒介能维持细胞活力，同时最大化染料溶解性和标记过程中的染色效率。Diluent C对哺乳动物细胞来说是等渗的，不含去污剂或有机溶剂，也不含生理盐和缓冲剂。根据细胞类型，染料标记后膜的内在化程度，标记细胞可能呈现不同的状态，从明亮，到均匀点状或斑驳状。然而，PKH67荧光在生理范围内不依赖于pH，且每个细胞的荧光强度通常不受染料位置的影响。

Mini Kit建议用于小量或初步研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测25次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于5次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Midi Kit适用于中量研究，比如体外细胞增殖或毒性研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测50次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Maxi Kit适用于大量或体内研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测125次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

产品包装

组分

 名称

货号（规格）

100UL     

 200UL     500UL     
A      PKH67 Dye (1×10-3M in EtOH)     1×100μl 2×100μl

1×500μl
B Diluent C 1×10ml 2×30ml

2×30ml

保存与运输方法

保存：2-8ºC避光保存，1年有效。其中组分A（PKH67 Dye）需严格避光，盖子保持拧紧。

运输：冰袋运输。

注意事项

  1. PKH67是以溶于乙醇的储存液形式提供，保存的过程中需避光并拧紧盖子，以防止溶液挥发引起的染料浓度提高。使用前需检查是否有结晶，若有结晶，需在37℃水浴溶晶，超声或涡旋直至完全溶解。
  2. Diluent C使用前需置于室温回温之后再配制标记用的细胞和染料工作液。Diluent C是无菌溶液，不含任何防腐剂或抗生素，使用和保存过程中都注意无菌。
  3. PKH67不能保存在Diluent C内，保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制，现配现用。
  4. 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。
  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1. 自行准备仪器和试剂（试剂盒不提供，用于常规细胞膜标记）

﹒良好分散，均匀的单细胞悬液（悬浮于组织培养基）

﹒含血清的组织培养基（完全培养基）

﹒不含Ca2+、Mg2+和血清的培养基，或生理盐溶液（比如，DPBS或HBSS）

﹒血清，白蛋白或其他系统兼容的蛋白

﹒聚丙烯锥底离心管（4-15ml）

﹒能控温的离心机（高达1000×g）

﹒荧光分析用仪器（荧光酶标板，荧光或共聚焦显微镜，流式细胞仪）

﹒无菌层流净化罩

﹒血球计数板或自动细胞计数装置

﹒载玻片和盖玻片

2. 常规细胞膜标记

【染色流程】：

以下操作流程使用2ml最终染色体积，含2μM PKH67，以及1×107个细胞/ml。

以下所有步骤都在室温下进行（20-25℃）。

1. 取一锥底聚丙烯离心管制备2×107个细胞的单细胞悬浮液，用无血清培养基清洗细胞一次。

2. 400×g离心细胞5min，得到松散的细胞沉淀。

3. 细胞离心后，轻轻吸掉上清。注意不要移动任何细胞并且残留不超过25μl上清液。

4. 加1ml Diluent C到细胞沉淀中制备成2×细胞悬液，用枪轻轻吹匀以确保完全分散。不可涡旋和不可让细胞长期保留在Diluent C中。

5 染色前立即制备2×染色液（4μM in Diluent C）：通过将4μl PKH67乙醇储存液到1ml Diluent C中，充分混匀分散所得。

6. 快速加1ml2×细胞悬液（Step 1.4）到1ml2×染色液（Step 1.5），用枪立即混匀样本。混匀后样本得到的终浓度是1×107个细胞/ml和2μM PKH67。

7. Step 1.6中的细胞/染料悬液孵育1-5min，中间定期混合。染色过程非常快，更长时间无任何益处。

8. 加入等体积（2ml）血清或其他适当蛋白溶液（比如1% BSA）终止染色，孵育1min允许结合多余的探针。

9. 20-25℃，400×g离心细胞10min，轻轻吸掉上清，确保不会移动细胞。用10ml完全培养基重悬细胞，转移到一个干净无菌的锥底聚丙烯离心管中，20-25℃，400×g离心细胞5min。然后用10ml完全培养基清洗细胞沉淀＞2次，以确保完全去除未结合染料。

10. 最后一步清洗后，用10ml完全培养基重悬细胞沉淀，用来评估细胞回收，细胞活力和染色强度。离心和重悬沉淀到一理想终浓度的活细胞悬液。

染色示例（来自文献资源）

1）文献来源：Kelly DM, ten Bokum AM, O’Leary SM, O’Sullivan MP, Keane J. Bystander macrophage apoptosis after Mycobacterium tuberculosis H37Ra infection. Infect Immun. 2008;76(1):351-360. doi:10.1128/IAI.00614-07

PKH67染色目的：为了评估旁观者凋亡效应，靶向THP-1单核细胞用PKH67来标记，最终在荧光显微镜观察以确认标记是否成功。标记好的THP-1细胞（未感染的旁观者细胞量：0.5 × 105cells/ml），加入被H37Ra感染的THP-1巨噬细胞（感染效应细胞量：0.5 × 105cells/ml），接种到2孔的LabTek腔室玻片。效应巨噬细胞经H37Ra感染4h，之后剧烈清洗去除胞外细菌。之后与未感染的PKH67标记旁观者细胞共培养，37℃共培养24或48h。孵育后，上清液去除，细胞用2% PFA固定，然后用TUNEL TMR监测凋亡，细胞核用Hochest 33342复染。用荧光显微镜来评估绿色PKH67标记巨噬细胞的旁观凋亡效应。当某一个单细胞同时呈绿色（旁观者）和红色（凋亡），表明旁观者凋亡效应的存在。

Fig 2. Uninfected bystander apoptosis for macrophages that were in contact with infected macrophages. (A) Macrophages were infected for 4 h with M. tuberculosis strain H37Ra. Uninfected PKH67-labeled green THP-1 cells (0.5 × 105 cells/ml) were added to infected macrophages for 24 and 48 h. Adherent cells were then stained with Hoechst 33342 and with TUNEL TMR (red) to determine apoptosis levels. Superimposition of PKH67-labeled (green) bystander cell fields and TUNEL-positive (red) fields showed bystander apoptotic macrophages (orange). Nuclear staining (blue) (not shown) revealed the total number of cells per field. One representative field at a magnification of ×20 is shown. The arrows indicate apoptotic bystander macrophages. (B) Close-up of apoptotic bystander macrophage (arrow).

2）文献来源：Hellberg L, Fuchs S, Gericke C, et al. Proinflammatory stimuli enhance phagocytosis of apoptotic cells by neutrophil granulocytes. ScientificWorldJournal. 2011;11:2230-2236. doi:10.1100/2011/413271

PKH67染色目的：50ul肝素化全血用TLR-ligands和细胞因子刺激30min，之后，将1 × 106PKH67标记好的凋亡自体中性粒细胞加入全血中，置于37℃孵育。60min之后，红细胞用裂解液裂解掉，流式细胞术观察中性粒细胞内凋亡细胞的吞噬水平。

Fig 3. Phagocytosis of apoptotic neutrophils by neutrophils in whole blood. 50 μL heparinized whole blood was preincubated with the indicated stimuli for 30 min and, subsequently, 1 × 106 PKH67 stained apoptotic neutrophils were added. Phagocytosis was assessed after 60 min by using flow cytometry. (a) Effect of TLR-ligands on the phagocytosis rate. (b) Effect of various cytokines on the phagocytosis rate. Data show mean + SD from 3 independent experiments, *:P < 0.05. (c)–(f) Representative dot-plots for the quantitative assessment of ingestion of apoptotic cells by neutrophils in whole blood by using flow cytometry. (c) FSC/SSC gating of neutrophils. (d) Negative control: gated neutrophils without apoptotic cells. (e) neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils. (f) Neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils after exposure to Pam3CSK4.

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PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）Sigma MINI26；Phanos Technologies

发表于由

PKH67；PKH26；Calcein AM钙黄绿素；PKH67；CFDA SE；In vivo cell tracking体内细胞示踪；Sigma MINI26；Phanos Technologies；

产品信息

产品名称

            规格         

PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling     

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）

100μl
200μl

500μl

 

产品名称

 产品编号                 规格                            

Diluent C for General Membrane Labeling

稀释液C（用于常规细胞膜标记）

10ML

 10ml

30ML 30ml

产品描述

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）（PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling）是一款基于荧光探针PKH67，用于常规细胞膜标记的检测试剂盒，适用于体外细胞标记，体外细胞增殖以及长期的体内细胞跟踪研究等。

PKH67是一种专利的膜标记探针，与PKH1和PKH2相比，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能稳定插入细胞膜脂质区域。正因具更长碳尾，内部数据连续性证明：PKH67具有比PKH2更低的细胞-细胞间转运发生。PKH67呈绿色荧光（见图1），最大激发波长为490nm，最大发射波长是502nm，与标准荧光素（Fluorescein）滤片兼容。PKH67非常适合用于细胞毒性实验，与碘化丙啶（PI，MX4205）或7-氨基放线菌素D（7-AAD，MX4215）这些细胞活力探针联合使用，或者与橙-红色荧光探针比如藻红蛋白（PE，MX4698）、红色荧光蛋白（RFP）等结合使用。根据染料稀释原理，PKH67常用于细胞增殖监测分析，包括抗原特异性的前体频率和带干细胞特性的静息/缓慢分化肿瘤细胞的鉴定。也能用于监测外泌体或脂质体吞噬，细胞-细胞膜转运、吞噬、抗原递呈，以及体内细胞运输研究。

以不分裂细胞为研究对象，通过对体外细胞膜滞留周期和体内荧光强度减弱频率的关联性分析，预测PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。这与PKH1和PKH2的体内半衰期相近，这两个探针都成功用于监测周期长达1-2个月的体内淋巴细胞和巨噬细胞运输研究，因此，PKH67适用于需要绿色荧光细胞连接染料的短-中期体内示踪研究，以及体外细胞毒性、吞噬、增殖、抗原递呈，或其它共培养实验。

稀释液C（Diluent C）是本试剂盒配套提供的一种水溶性溶液，特别设计的一种标记媒介能维持细胞活力，同时最大化染料溶解性和标记过程中的染色效率。Diluent C对哺乳动物细胞来说是等渗的，不含去污剂或有机溶剂，也不含生理盐和缓冲剂。根据细胞类型，染料标记后膜的内在化程度，标记细胞可能呈现不同的状态，从明亮，到均匀点状或斑驳状。然而，PKH67荧光在生理范围内不依赖于pH，且每个细胞的荧光强度通常不受染料位置的影响。

Mini Kit建议用于小量或初步研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测25次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于5次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Midi Kit适用于中量研究，比如体外细胞增殖或毒性研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测50次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Maxi Kit适用于大量或体内研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测125次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

产品包装

组分

 名称

货号（规格）

100UL     

 200UL     500UL     
A      PKH67 Dye (1×10-3M in EtOH)     1×100μl 2×100μl

1×500μl
B Diluent C 1×10ml 2×30ml

2×30ml

保存与运输方法

保存：2-8ºC避光保存，1年有效。其中组分A（PKH67 Dye）需严格避光，盖子保持拧紧。

运输：冰袋运输。

注意事项

  1. PKH67是以溶于乙醇的储存液形式提供，保存的过程中需避光并拧紧盖子，以防止溶液挥发引起的染料浓度提高。使用前需检查是否有结晶，若有结晶，需在37℃水浴溶晶，超声或涡旋直至完全溶解。
  2. Diluent C使用前需置于室温回温之后再配制标记用的细胞和染料工作液。Diluent C是无菌溶液，不含任何防腐剂或抗生素，使用和保存过程中都注意无菌。
  3. PKH67不能保存在Diluent C内，保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制，现配现用。
  4. 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。
  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1. 自行准备仪器和试剂（试剂盒不提供，用于常规细胞膜标记）

﹒良好分散，均匀的单细胞悬液（悬浮于组织培养基）

﹒含血清的组织培养基（完全培养基）

﹒不含Ca2+、Mg2+和血清的培养基，或生理盐溶液（比如，DPBS或HBSS）

﹒血清，白蛋白或其他系统兼容的蛋白

﹒聚丙烯锥底离心管（4-15ml）

﹒能控温的离心机（高达1000×g）

﹒荧光分析用仪器（荧光酶标板，荧光或共聚焦显微镜，流式细胞仪）

﹒无菌层流净化罩

﹒血球计数板或自动细胞计数装置

﹒载玻片和盖玻片

2. 常规细胞膜标记

【染色流程】：

以下操作流程使用2ml最终染色体积，含2μM PKH67，以及1×107个细胞/ml。

以下所有步骤都在室温下进行（20-25℃）。

1. 取一锥底聚丙烯离心管制备2×107个细胞的单细胞悬浮液，用无血清培养基清洗细胞一次。

2. 400×g离心细胞5min，得到松散的细胞沉淀。

3. 细胞离心后，轻轻吸掉上清。注意不要移动任何细胞并且残留不超过25μl上清液。

4. 加1ml Diluent C到细胞沉淀中制备成2×细胞悬液，用枪轻轻吹匀以确保完全分散。不可涡旋和不可让细胞长期保留在Diluent C中。

5 染色前立即制备2×染色液（4μM in Diluent C）：通过将4μl PKH67乙醇储存液到1ml Diluent C中，充分混匀分散所得。

6. 快速加1ml2×细胞悬液（Step 1.4）到1ml2×染色液（Step 1.5），用枪立即混匀样本。混匀后样本得到的终浓度是1×107个细胞/ml和2μM PKH67。

7. Step 1.6中的细胞/染料悬液孵育1-5min，中间定期混合。染色过程非常快，更长时间无任何益处。

8. 加入等体积（2ml）血清或其他适当蛋白溶液（比如1% BSA）终止染色，孵育1min允许结合多余的探针。

9. 20-25℃，400×g离心细胞10min，轻轻吸掉上清，确保不会移动细胞。用10ml完全培养基重悬细胞，转移到一个干净无菌的锥底聚丙烯离心管中，20-25℃，400×g离心细胞5min。然后用10ml完全培养基清洗细胞沉淀＞2次，以确保完全去除未结合染料。

10. 最后一步清洗后，用10ml完全培养基重悬细胞沉淀，用来评估细胞回收，细胞活力和染色强度。离心和重悬沉淀到一理想终浓度的活细胞悬液。

染色示例（来自文献资源）

1）文献来源：Kelly DM, ten Bokum AM, O’Leary SM, O’Sullivan MP, Keane J. Bystander macrophage apoptosis after Mycobacterium tuberculosis H37Ra infection. Infect Immun. 2008;76(1):351-360. doi:10.1128/IAI.00614-07

PKH67染色目的：为了评估旁观者凋亡效应，靶向THP-1单核细胞用PKH67来标记，最终在荧光显微镜观察以确认标记是否成功。标记好的THP-1细胞（未感染的旁观者细胞量：0.5 × 105cells/ml），加入被H37Ra感染的THP-1巨噬细胞（感染效应细胞量：0.5 × 105cells/ml），接种到2孔的LabTek腔室玻片。效应巨噬细胞经H37Ra感染4h，之后剧烈清洗去除胞外细菌。之后与未感染的PKH67标记旁观者细胞共培养，37℃共培养24或48h。孵育后，上清液去除，细胞用2% PFA固定，然后用TUNEL TMR监测凋亡，细胞核用Hochest 33342复染。用荧光显微镜来评估绿色PKH67标记巨噬细胞的旁观凋亡效应。当某一个单细胞同时呈绿色（旁观者）和红色（凋亡），表明旁观者凋亡效应的存在。

Fig 2. Uninfected bystander apoptosis for macrophages that were in contact with infected macrophages. (A) Macrophages were infected for 4 h with M. tuberculosis strain H37Ra. Uninfected PKH67-labeled green THP-1 cells (0.5 × 105 cells/ml) were added to infected macrophages for 24 and 48 h. Adherent cells were then stained with Hoechst 33342 and with TUNEL TMR (red) to determine apoptosis levels. Superimposition of PKH67-labeled (green) bystander cell fields and TUNEL-positive (red) fields showed bystander apoptotic macrophages (orange). Nuclear staining (blue) (not shown) revealed the total number of cells per field. One representative field at a magnification of ×20 is shown. The arrows indicate apoptotic bystander macrophages. (B) Close-up of apoptotic bystander macrophage (arrow).

2）文献来源：Hellberg L, Fuchs S, Gericke C, et al. Proinflammatory stimuli enhance phagocytosis of apoptotic cells by neutrophil granulocytes. ScientificWorldJournal. 2011;11:2230-2236. doi:10.1100/2011/413271

PKH67染色目的：50ul肝素化全血用TLR-ligands和细胞因子刺激30min，之后，将1 × 106PKH67标记好的凋亡自体中性粒细胞加入全血中，置于37℃孵育。60min之后，红细胞用裂解液裂解掉，流式细胞术观察中性粒细胞内凋亡细胞的吞噬水平。

Fig 3. Phagocytosis of apoptotic neutrophils by neutrophils in whole blood. 50 μL heparinized whole blood was preincubated with the indicated stimuli for 30 min and, subsequently, 1 × 106 PKH67 stained apoptotic neutrophils were added. Phagocytosis was assessed after 60 min by using flow cytometry. (a) Effect of TLR-ligands on the phagocytosis rate. (b) Effect of various cytokines on the phagocytosis rate. Data show mean + SD from 3 independent experiments, *:P < 0.05. (c)–(f) Representative dot-plots for the quantitative assessment of ingestion of apoptotic cells by neutrophils in whole blood by using flow cytometry. (c) FSC/SSC gating of neutrophils. (d) Negative control: gated neutrophils without apoptotic cells. (e) neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils. (f) Neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils after exposure to Pam3CSK4.

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产品编号

 产品名称 规格                  

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C58C1 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

发表于由

C58C1；MSU440；K599；Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin链霉素；Rifampicin利福平；

货号 产品名称 规格
MF2454-0500UL C58C1 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2454-2500UL C58C1 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞 50×50μl

菌株描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

发根农杆菌菌株C58C1含pRiA4b农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有链霉素、利福平抗性。

我司金畔生物提供的C58C1电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR) pRiA4b (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品包装

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2454-0500UL MF2454-2500UL
MF2454-A C58C1 Electrocompetent Cell 10×50μl 50×50μl
MF2454-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，1年有效。 

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。

7） C58C1具链霉素和利福平抗性，不可用于具链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。

8） 为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2) 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：质粒DNA最好用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。

4) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5) 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。

6) 6,000rpm离心1min，留取100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

 

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MF2462-0500UL Ar 1193 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞 10×50μl

 

附表1固体和液体TY培养基配方

组分Component TY（液体）/升 TY（固体）/升
胰蛋白胨Tryptone 5g 5g
酵母提取物Yeast extract 3g 3g
琼脂Agar / 15g
补水到1L，121℃，20min高压灭菌 补水到1L，121℃，20min高压灭菌
氯化钙CaCl2 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

 

附表2常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株 羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
MSU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

 

附表3常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液 工作液
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DMSO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 34mg/ml 34μg/ml

 

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色）监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具

发表于由

产品名称

 产品编号 规格

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色）

 MX4112-5MG 5mg

Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色） MX4112-25MG 25mg

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Blue CMAC，英文全名：7-amino-4-chloromethylcoumarin（7-氨基-4-氯甲基香豆素），是氨基香豆素的氯甲基衍生物，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Blue CMAC特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Blue CMAC的激发和发射光谱（353/466nm）与绿色荧光蛋白GFP或红色荧光蛋白RFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特征

1） CAS NO.：147963-22-2

2） 同义名：CellTracker Blue CMAC; 7-amino-4-chloromethylcoumarin; 7-氨基-4-氯甲基香豆素;

3） 分子式：C10H8ClNO2

4） 分子量：209.6 g/mol

5） 外观：白色至类白色固体

6） 溶解性：溶于DMSO

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 整个染色过程中需注意避光。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1 制备Cell-Tracker染色工作液

① 开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

② 用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为25mM。例如，对5mgCell-Tracker Blue CMAC（Mw: 209.63 g/mol）冻干粉，加入954µl DMSO充分溶解，即得到25mM母液。储存液根据单次用量分装避光冻存，减少反复冻融次数。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

2.2 悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤ 根据附表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3 贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

相关产品

货号 名称 规格
MX4107-100UG Cell-Tracker Green CMFDA活细胞示踪探针（绿色） 2×50μg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR活细胞示踪探针（橙色） 2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4110-30UG Cell-Tracker Deep Red活细胞示踪探针（深红色） 2×15µg
MX4111-1Kit Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色） 1kit
MX4112-5MG Cell-Tracker Blue CMAC活细胞示踪探针（蓝色） 5mg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA)二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide碘化丙啶（粉末） 10mg

 

Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色）Cell location 细胞定位 Cell Tracker dye 细胞示踪探针

发表于由

Cell-Tracker Deep Red；Cell-Tracker Green CMFDA；Cell-Tracker Red CMTPX；Cell movement 细胞运动；Cell location 细胞定位；Cell Tracker dye 细胞示踪探针； 

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格

Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色）

 MX4110-30UG 2×15µg
Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色） MX4110-75UG 5×15µg

Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色） MX4110-150UG 10×15µg

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Deep Red，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Deep Red特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Deep Red的激发和发射光谱（630/650nm）与绿色荧光蛋白GFP、红色荧光蛋白RFP都能很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1） 同义名：CellTracker™ Deep Red Dye; CellTracker™ 深红色染料；

2） 分子量：698.3 g/mol

3） 外观：深蓝色固体

4） Ex/Em：630/650nm

5） 溶解性：溶于DMSO（1mM）

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 注意事项

  • 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  • 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  • 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例

文献1）Sarah L. Richardson, Alzbeta Hulikova, Melanie Proven, Ria Hipkiss, Magbor Akanni, Noémi B. A. Roy, Pawel Swietach. Single-cell O2 exchange imaging shows that cytoplasmic diffusion is a dominant barrier to efficient gas transport in red blood cells.Proceedings of the National Academy of Sciences May 2020, 117 (18) 10067-10078; DOI: 10.1073/pnas.1916641117

Method (Single-Cell O2 Saturation Imaging)：Blood was first diluted 200-fold in Ca2+-free Hepes-buffered Tyrode, and cells were loaded with a mixture of CellTracker Deep-Red (5 µM) and CellTracker Green (15 µM) in dimethyl sulfoxide (DMSO). For some experiments, cells were also loaded with SYTO45 (Invitrogen) at 1:1,000 dilution of 5 mM stock. After allowing 10 min for dye loading, cells were spun down, resuspended in Ca2+-containing solution, and plated on a poly-L-lysine pretreated Perspex superfusion chamber that was mounted on a Leica LCS confocal system. Cells were superfused with solutions at 23 °C or 37 °C. CellTracker Deep-Red and Green dyes were excited simultaneously by 488- and 633-nm laser lines, and fluorescence was acquired by two photomultiplier tubes at 500 to 550 and 650 to 700 nm at 7.8 Hz in bidirectional x–y scan mode (128 × 128 pixels) to maximize temporal resolution with pinhole at 4 Airy units to maximize signal to background ratio. Fluorescence was ratioed and normalized to starting ratio.

Fig. Measuring O2 exchange in RBCs using single-cell O2-saturating imaging. (C) Wild-type RBCs loaded with a mixture of Deep-Red and Green, showing fluorescence in oxygenated and deoxygenated microstreams. For these experiments, neither solution was fluorescently labeled. Grayscale ratio maps (Right) were calculated from these fluorescence maps (Left and Center). (D) On deoxygenation, Deep-Red fluorescence is reduced, whereas Green remains constant (wild-type RBCs; n = 356 cells).

文献2）Grote S, Ureña-Bailén G, Chan KC, et al. In Vitro Evaluation of CD276-CAR NK-92 Functionality, Migration and Invasion Potential in the Presence of Immune Inhibitory Factors of the Tumor Microenvironment. Cells. 2021;10(5):1020. Published 2021 Apr 26.

Method (Tracking of NK-92-Mediated Tumor Cell Invasion)：NK-92 as well as CD276-CAR NK-92 cells were assessed for their invasion potential. (CD276-CAR) NK-92 cells were stained using CellTracker™ Deep Red dye according to the staining protocol provided by the manufacturer. Melanoma 3D spheroids were co-incubated with NK-92 cells at an E:T ratio of 5:1 and monitored using the Celigo S imaging cytometer (Nexcelom, Lawrence, MA, USA) at indicated time points over a period of 120 h.

Fig 2. GFP-transduced WM115 melanoma cells were grown as 3D spheroids and co-incubated with CellTracker™ Deep Red-labeled NK-92 or CD276-CAR NK-92 cells for 120 h. Representative fluorescence pictures of spheroids at indicated time points are shown (a).

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。由于Cell-Tracker Deep Red染料的荧光信号高，最佳使用浓度在250nM-1µM。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1 制备Cell-Tracker染色工作液

① 开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

② 用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为1mM。例如，每管15µg Cell-Tracker Deep Red（Mw: 698.3 g/mol）冻干粉，加入20µl DMSO充分溶解，即得到1mM（1000×）母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到250nM-1µM的工作浓度（最佳浓度需优化）。预热染色工作液到37℃。

2.2 悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤ 根据附表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3 贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥ 根据表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 相关产品

货号 名称 规格
MX4107-100UG Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 2×50μg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色） 2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4110-30UG Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色） 2×15µg
MX4111-1Kit Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)

活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色）

 1kit
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末） 10mg

 

活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色） Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)

发表于由

Cell-Tracker Deep Red；Cell-Tracker Green CMFDA；Cell-Tracker Red CMTPX；Cell movement 细胞运动；Cell location 细胞定位；Cell Tracker dye 细胞示踪探针； 

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格

Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red) 活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色） MX4111-1Kit 1kit

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker荧光探针能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。Cell-Tracker荧光探针（除了Cell-Tracker Deep Red）含有一氯甲基或溴甲基基团，与巯基反应，利用谷胱甘肽S转移酶介导的催化作用。大多数细胞中谷胱甘肽含量很高（高达10mM），谷胱甘肽转移酶普遍存在。Cell-Tracker Deep Red含一琥珀酰亚胺酯反应基团，与蛋白上的胺基反应。一旦转化为不可逆产物，这些产物几次传代都能良好的保留在活细胞中。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker探针特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。

该试剂盒提供三种不同激发和发射波长的Cell-Tracker荧光探针，每种探针都以最小规格供货，方便初次进行示踪实验的客户，以最经济的方式优化出所需的最佳探针和实验条件。也特别适合同时做2-3种细胞示踪且用量少的客户。（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

试剂盒成分

组分编号 组分名称 外观 产品规格 储存条件
MX4111-A Cell-Tracker Green CMFDA 固体 50μg -20℃避光干燥保存
MX4111-B Cell-Tracker Red CMTPX 固体 50μg -20℃避光干燥保存
MX4111-C Cell-Tracker Deep Red 固体 15µg -20℃避光干燥保存

 保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

  • 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  • 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  • 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。由于Cell-Tracker Deep Red染料的荧光信号高，最佳使用浓度在250nM-1µM。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1 制备Cell-Tracker染色工作液

① 开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

② 用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为1-10mM。

a）对于Cell-Tracker Green CMFDA（Mw: 464.86 g/mol），每管50µg固体，加入10.7µl DMSO充分溶解，即得到10mM母液。若单次用不完，建议根据单次用量将储存液分装，≤-20℃避光保存。

b）对于Cell-Tracker Red CMTPX（Mw: 686.25 g/mol），每管 50µg固体，加入7.2µl DMSO充分溶解，即得到10mM母液。若单次用不完，建议根据单次用量将储存液分装，≤-20℃避光保存。

c）对于Cell-Tracker Deep Red（Mw: 698.3 g/mol），每管15µg固体，加入20µl DMSO充分溶解，即得到1mM母液。若单次用不完，建议根据单次用量将储存液分装，≤-20℃避光保存。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度（最佳浓度需优化）。预热染色工作液到37℃。

2.2 悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤ 根据附表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3 贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下避光孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥ 根据表1 选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 相关产品

货号 名称 规格
MX4107-100UG Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 2×50μg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色） 2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4110-30UG Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针（深红色） 2×15µg
MX4111-1Kit Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)

活细胞示踪三色组合试剂盒（绿色/红色/深红色）

 1kit
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末） 10mg

附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征

货号 名称 分子量 常用检测通道 Ex/Em（nm）[1]
MX4107-100UG Cell-Tracker Green CMFDA 464.9 FITC 492/517 [2]
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 554.0 TRITC 541/565
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 686.3 Rhodamine 577/602
MX4110-30UG Cell-Tracker Deep Red 698.3 Cy5 630/650
[1] 最大吸收和发射荧光，在水溶性缓冲液或甲醇内确定。在细胞环境内荧光值可能有些许变化。
[2] CMFDA本身无色和无荧光，直至胞内酯酶切割掉酯化基团。酯化基团的水解得到产物的荧光特征如表所述。

 

Indo-1 Pentasodium Salt, Cell Impermeant 钙离子荧光探针

发表于由

Indo-1 salt；Indo-1, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯；Indo-1,Acetoxymethyl Ester;紫外光激发Ca2+荧光探针；比率测定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Fura-2,AM；CAS NO：132319-56-3；

货号

 产品名称 规格 
MX4567-1MG   Indo-1 Pentasodium Salt, Cell Impermeant 钙离子荧光探针 1mg

基本介绍：

Indo-1是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Indo-1的最大发射波长向短波长迁移，由原来的475nm（Ca2+-free）迁移到401nm（Ca2+-saturated），而最大激发波长无明显变化，维持在346nm~330nm范围内，适宜用氩离子激发器的UV激发光谱（351~364nm）进行荧光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是发射波长比率型Ca2+荧光探针，特别适合流式细胞仪检测，因其可在控制单一激发波长的条件下轻易调整发射滤片，也特别适合多色荧光检测。使用发射波长下荧光强度的比率来测定细胞内Ca2+浓度，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。实际检测，推荐使用最大发射波长分别用405nm和485nm。

Indo-1 Pentasodium Salt是五钠盐形式的Indo-1，不具有细胞膜渗透性，溶于水。可通过微注射、膜片电极、划痕标记等方式加载进入细胞，从而检测胞内钙离子水平。

基本特性：

化学名：2-[4-[Bis(carboxylatomethyl)amino]-3-[2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]-5-methylphenoxy]ethoxy] phenyl]-1H-indole-6-carboxylate pentasodiumsalt

CAS NO.：N/A

分子式：C32H26Na5N3O12

分子量：759.52

解离常数（Kd）：230nM (Ca2+)

纯度：≥90% (HPLC)

溶解性：溶于水

Ex/Em：346/475 nm（Ca2+-free），330/401 nm（Ca2+-saturated）

摩尔吸光系数：33000cm-1M-1

化学结构式：

注意事项

  1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  2. 基于BAPTA结构的荧光探针比如Indo-1，可以通过EDC/EDAC（货号：MP4202-5G）在原位进行固定。经固定的荧光探针可用于下游的免疫荧光和免疫组化研究（参考文献：Tymianski M, et al. A novel use for a carbodiimide compound for the fixation of fluorescent and non-fluorescent calcium indicators in situ following physiological experiments. Cell Calcium. 1997 Mar;21(3):175-83. PMID: 9105727.）。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

相关产品：

货号 名称 规格
MX4504-50UG Fluo-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4505-50UG Fluo-8 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4506-50UG Indo-1, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4507-50UG Rhod-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MS4301-1G Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4304-5G Pluronic®F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 5g
MZ8471-1G Probenecid丙磺舒 1g
MZ8472-154MG Probenecid Sodium, Water Soluble丙磺舒钠（水溶性） 2×77mg      
MX4557-1MG Indo-1 Pentapotassium Salt Indo-1五钾盐 1mg
MX4567-1MG Indo-1 Pentasodium Salt, Cell Impermeant钙离子荧光探针    1mg

 

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）Calcein AM钙黄绿素 PKH67 CFDA SE

发表于由

PKH67；PKH26；Calcein AM钙黄绿素；PKH67；CFDA SE；In vivo cell tracking体内细胞示踪；Sigma MINI26；Phanos Technologies；

产品信息

产品名称

 产品编号               规格         

PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling     

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）

MX4023-100UL

 100μl
MX4023-200UL 200μl

MX4023-500UL 500μl

【好消息】：应客户的要求，我司对试剂盒内的Diluent C可单独供应，产品信息如下：

产品名称

 产品编号                 规格                              

Diluent C for General Membrane Labeling

稀释液C（用于常规细胞膜标记）

MX4022-10ML

 10ml

MX4022-30ML 30ml

产品描述

PKH67细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）（PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling）是一款基于荧光探针PKH67，用于常规细胞膜标记的检测试剂盒，适用于体外细胞标记，体外细胞增殖以及长期的体内细胞跟踪研究等。

PKH67是一种专利的膜标记探针，与PKH1和PKH2相比，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能稳定插入细胞膜脂质区域。正因具更长碳尾，内部数据连续性证明：PKH67具有比PKH2更低的细胞-细胞间转运发生。PKH67呈绿色荧光（见图1），最大激发波长为490nm，最大发射波长是502nm，与标准荧光素（Fluorescein）滤片兼容。PKH67非常适合用于细胞毒性实验，与碘化丙啶（PI，MX4205）或7-氨基放线菌素D（7-AAD，MX4215）这些细胞活力探针联合使用，或者与橙-红色荧光探针比如藻红蛋白（PE，MX4698）、红色荧光蛋白（RFP）等结合使用。根据染料稀释原理，PKH67常用于细胞增殖监测分析，包括抗原特异性的前体频率和带干细胞特性的静息/缓慢分化肿瘤细胞的鉴定。也能用于监测外泌体或脂质体吞噬，细胞-细胞膜转运、吞噬、抗原递呈，以及体内细胞运输研究。

以不分裂细胞为研究对象，通过对体外细胞膜滞留周期和体内荧光强度减弱频率的关联性分析，预测PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。这与PKH1和PKH2的体内半衰期相近，这两个探针都成功用于监测周期长达1-2个月的体内淋巴细胞和巨噬细胞运输研究，因此，PKH67适用于需要绿色荧光细胞连接染料的短-中期体内示踪研究，以及体外细胞毒性、吞噬、增殖、抗原递呈，或其它共培养实验。

稀释液C（Diluent C）是本试剂盒配套提供的一种水溶性溶液，特别设计的一种标记媒介能维持细胞活力，同时最大化染料溶解性和标记过程中的染色效率。Diluent C对哺乳动物细胞来说是等渗的，不含去污剂或有机溶剂，也不含生理盐和缓冲剂。根据细胞类型，染料标记后膜的内在化程度，标记细胞可能呈现不同的状态，从明亮，到均匀点状或斑驳状。然而，PKH67荧光在生理范围内不依赖于pH，且每个细胞的荧光强度通常不受染料位置的影响。

当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测25次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于5次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Midi Kit（CAT#：MX4023-200UL）适用于中量研究，比如体外细胞增殖或毒性研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测50次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

Maxi Kit（CAT#：MX4021-500UL）适用于大量或体内研究。当使用2ml染色体积（含2μM终浓度的PKH67），本试剂盒含有足量的染料用于检测125次细胞样本（2×107个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×107个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定最佳的染料浓度。

产品包装

组分

 名称

货号（规格）

MX4023-100UL     

 MX4023-200UL     MX4023-500UL     
MX4023-A      PKH67 Dye (1×10-3M in EtOH)     1×100μl 2×100μl

1×500μl
MX4023-B Diluent C 1×10ml 2×30ml

2×30ml

保存与运输方法

保存：2-8ºC避光保存，1年有效。其中组分A（PKH67 Dye）需严格避光，盖子保持拧紧。

运输：冰袋运输。

注意事项

  1. PKH67是以溶于乙醇的储存液形式提供，保存的过程中需避光并拧紧盖子，以防止溶液挥发引起的染料浓度提高。使用前需检查是否有结晶，若有结晶，需在37℃水浴溶晶，超声或涡旋直至完全溶解。
  2. Diluent C使用前需置于室温回温之后再配制标记用的细胞和染料工作液。Diluent C是无菌溶液，不含任何防腐剂或抗生素，使用和保存过程中都注意无菌。
  3. PKH67不能保存在Diluent C内，保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制，现配现用。
  4. 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。
  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1. 自行准备仪器和试剂（试剂盒不提供，用于常规细胞膜标记）

﹒良好分散，均匀的单细胞悬液（悬浮于组织培养基）

﹒含血清的组织培养基（完全培养基）

﹒不含Ca2+、Mg2+和血清的培养基，或生理盐溶液（比如，DPBS或HBSS）

﹒血清，白蛋白或其他系统兼容的蛋白

﹒聚丙烯锥底离心管（4-15ml）

﹒能控温的离心机（高达1000×g）

﹒荧光分析用仪器（荧光酶标板，荧光或共聚焦显微镜，流式细胞仪）

﹒无菌层流净化罩

﹒血球计数板或自动细胞计数装置

﹒载玻片和盖玻片

2. 常规细胞膜标记

【染色流程】：

以下操作流程使用2ml最终染色体积，含2μM PKH67，以及1×107个细胞/ml。

以下所有步骤都在室温下进行（20-25℃）。

1. 取一锥底聚丙烯离心管制备2×107个细胞的单细胞悬浮液，用无血清培养基清洗细胞一次。

2. 400×g离心细胞5min，得到松散的细胞沉淀。

3. 细胞离心后，轻轻吸掉上清。注意不要移动任何细胞并且残留不超过25μl上清液。

4. 加1ml Diluent C到细胞沉淀中制备成2×细胞悬液，用枪轻轻吹匀以确保完全分散。不可涡旋和不可让细胞长期保留在Diluent C中。

5 染色前立即制备2×染色液（4μM in Diluent C）：通过将4μl PKH67乙醇储存液到1ml Diluent C中，充分混匀分散所得。

6. 快速加1ml2×细胞悬液（Step 1.4）到1ml2×染色液（Step 1.5），用枪立即混匀样本。混匀后样本得到的终浓度是1×107个细胞/ml和2μM PKH67。

7. Step 1.6中的细胞/染料悬液孵育1-5min，中间定期混合。染色过程非常快，更长时间无任何益处。

8. 加入等体积（2ml）血清或其他适当蛋白溶液（比如1% BSA）终止染色，孵育1min允许结合多余的探针。

9. 20-25℃，400×g离心细胞10min，轻轻吸掉上清，确保不会移动细胞。用10ml完全培养基重悬细胞，转移到一个干净无菌的锥底聚丙烯离心管中，20-25℃，400×g离心细胞5min。然后用10ml完全培养基清洗细胞沉淀＞2次，以确保完全去除未结合染料。

10. 最后一步清洗后，用10ml完全培养基重悬细胞沉淀，用来评估细胞回收，细胞活力和染色强度。离心和重悬沉淀到一理想终浓度的活细胞悬液。

染色示例（来自文献资源）

1）文献来源：Kelly DM, ten Bokum AM, O’Leary SM, O’Sullivan MP, Keane J. Bystander macrophage apoptosis after Mycobacterium tuberculosis H37Ra infection. Infect Immun. 2008;76(1):351-360. doi:10.1128/IAI.00614-07

PKH67染色目的：为了评估旁观者凋亡效应，靶向THP-1单核细胞用PKH67来标记，最终在荧光显微镜观察以确认标记是否成功。标记好的THP-1细胞（未感染的旁观者细胞量：0.5 × 105cells/ml），加入被H37Ra感染的THP-1巨噬细胞（感染效应细胞量：0.5 × 105cells/ml），接种到2孔的LabTek腔室玻片。效应巨噬细胞经H37Ra感染4h，之后剧烈清洗去除胞外细菌。之后与未感染的PKH67标记旁观者细胞共培养，37℃共培养24或48h。孵育后，上清液去除，细胞用2% PFA固定，然后用TUNEL TMR监测凋亡，细胞核用Hochest 33342复染。用荧光显微镜来评估绿色PKH67标记巨噬细胞的旁观凋亡效应。当某一个单细胞同时呈绿色（旁观者）和红色（凋亡），表明旁观者凋亡效应的存在。

Fig 2. Uninfected bystander apoptosis for macrophages that were in contact with infected macrophages. (A) Macrophages were infected for 4 h with M. tuberculosis strain H37Ra. Uninfected PKH67-labeled green THP-1 cells (0.5 × 105 cells/ml) were added to infected macrophages for 24 and 48 h. Adherent cells were then stained with Hoechst 33342 and with TUNEL TMR (red) to determine apoptosis levels. Superimposition of PKH67-labeled (green) bystander cell fields and TUNEL-positive (red) fields showed bystander apoptotic macrophages (orange). Nuclear staining (blue) (not shown) revealed the total number of cells per field. One representative field at a magnification of ×20 is shown. The arrows indicate apoptotic bystander macrophages. (B) Close-up of apoptotic bystander macrophage (arrow).

2）文献来源：Hellberg L, Fuchs S, Gericke C, et al. Proinflammatory stimuli enhance phagocytosis of apoptotic cells by neutrophil granulocytes. ScientificWorldJournal. 2011;11:2230-2236. doi:10.1100/2011/413271

PKH67染色目的：50ul肝素化全血用TLR-ligands和细胞因子刺激30min，之后，将1 × 106PKH67标记好的凋亡自体中性粒细胞加入全血中，置于37℃孵育。60min之后，红细胞用裂解液裂解掉，流式细胞术观察中性粒细胞内凋亡细胞的吞噬水平。

Fig 3. Phagocytosis of apoptotic neutrophils by neutrophils in whole blood. 50 μL heparinized whole blood was preincubated with the indicated stimuli for 30 min and, subsequently, 1 × 106 PKH67 stained apoptotic neutrophils were added. Phagocytosis was assessed after 60 min by using flow cytometry. (a) Effect of TLR-ligands on the phagocytosis rate. (b) Effect of various cytokines on the phagocytosis rate. Data show mean + SD from 3 independent experiments, *:P < 0.05. (c)–(f) Representative dot-plots for the quantitative assessment of ingestion of apoptotic cells by neutrophils in whole blood by using flow cytometry. (c) FSC/SSC gating of neutrophils. (d) Negative control: gated neutrophils without apoptotic cells. (e) neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils. (f) Neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils after exposure to Pam3CSK4.

相关产品

产品编号

 产品名称 规格                  

MX3010-500T

 CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit                         500T
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MX3011-50UG

 Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色）

50μg
MX4021-100UL PKH26 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling

PKH26细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）

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MX4022-10ML

 Diluent C for General Membrane Labeling稀释液C 10ml
MX4023-100UL PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling

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 Celltracker CM-DiI活细胞示踪剂CM-DiI（红色） 1×50μg
MX4001-10MG DiO (DiOC18(3))细胞膜绿色荧光探针

10mg
MX4002-10MG DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针

10mg

 

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

发表于由

描述

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

 

产品关键词：

Cell-Tracker Green CMFDA；CellTracker™ Orange CMTMR；Cell movement 细胞运动；Cell location 细胞定位；Cell Tracker dye 细胞示踪探针；CAS NO：323192-14-9；

 

订购信息：

产品名称

 产品编号               规格                价格（元）     

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）   

 MX4108-100UG 2×50μg

1100

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

 MX4108-250UG 5×50μg

2400
Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色） MX4108-500UG 10×50μg

3900

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Orange CMTMR，英文全名：5-(and-6)-(((4-chloromethyl)benzoyl)amino)tetramethylrhodamine) (mixed isomers)，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Orange CMTMR特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（541/565nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  CAS NO.：323192-14-9

2）  同义名：CellTracker™ Orange CMTMR;Xanthylium, 9-[2-carboxy-4(or 5)-[[4-(chloromethyl) benzoyl]amino]phenyl]-3,6-bis(dimethylamino)-, inner salt

3）  分子式：C32H28ClN3O4

4）  分子量：554.04 g/mol

5）  外观：紫色固体

6）  溶解性：溶于DMSO

7）  化学结构式： 

 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

应用示例

文献1）McKee AS et al.Host DNA released in response to aluminum adjuvant enhances MHC class II-mediated antigen presentation and prolongs CD4 T-cell interactions with dendritic cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Mar 19;110(12): E1122-31. PMID: 23447566

 

操作方法（多光子显微镜）：CD4 T cellswere isolated from OTII or B6 mice using the CD4 T-cell negative isolation kit andwere labeled with 20 μM CMTMR or 2 μM CFSE, washed three times, and injected i.v. into B6 or CD11c-YFP recipients. Twenty-four hours later, these recipient mice were immunized with 20 μg of AF647-labeled ova + 200 μg of Alhydrogel and 5 mg of either BSA or DNase. From 20–24 h following immunization, mice were killed and their draining popliteal LNs were surgically removed for imaging. 

 

文献2）Nikitina EY et al.Combination ofγ‐irradiation and dendritic cell administration induces a potent antitumor response in tumor‐bearing mice: Approach to treatment of advanced stage cancer. Int J Cancer. 2001 Dec 15;94(6):825-33. PMID: 11745485

操作方法（组织内细胞分布评估）：DCs were labeled with 20 μM cell tracker orange (CMTMR) by incubation in RPMI 1640 at 37℃ for 30 min. Cells were then washed in PBS once, incubated for 30 min more and injected (107/mouse) intravenously (i.v.) or subcutaneously (s.c.) near the tumor site. Eighteen hours later lung, spleen, liver, superficial inguinal and popliteal LN as well as tumor tissue were taken out and snap‐frozen in tissue freezing media at−80°C. Frozen tissue sections were examined by fluorescence microscopy using a 540 nm filter. Labeled cells were counted in 10 fields at the total magnification ×200.

Fig. DC labeled with cell tracker CMTMR inside MethA sarcoma. Unlabeled (I) or CMTMR‐labeled (II, III) DCs (107) were injected i.v. (II) or s.c. (III) into MethA sarcoma‐bearing mice 3 hr after irradiation of the tumor with 10 Gy. Tumors were excised 18 hr later and cryostat sections were performed. Slides were analyzed by fluorescence microscopy using a 540‐nm filter. One of the representative fields with a total magnification of 200× is shown. 

 

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对1mgCell-Tracker Green CMFDA（Mw:464.86 g/mol）冻干粉，加入215µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 

3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

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 名称 规格                  

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 Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 1mg

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2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

2×50μg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素

1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末）

10mg

 

 

 

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

发表于由

描述

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）

 

产品关键词：

Cell-Tracker Green CMFDA；CellTracker™ Orange CMTMR；Cell movement 细胞运动；Cell location 细胞定位；Cell Tracker dye 细胞示踪探针；CAS NO：323192-14-9；

 

订购信息：

产品名称

 产品编号               规格                价格（元）     

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）   

 MX4108-100UG 2×50μg

1100

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2400
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产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Orange CMTMR，英文全名：5-(and-6)-(((4-chloromethyl)benzoyl)amino)tetramethylrhodamine) (mixed isomers)，能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Orange CMTMR特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（541/565nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  CAS NO.：323192-14-9

2）  同义名：CellTracker™ Orange CMTMR;Xanthylium, 9-[2-carboxy-4(or 5)-[[4-(chloromethyl) benzoyl]amino]phenyl]-3,6-bis(dimethylamino)-, inner salt

3）  分子式：C32H28ClN3O4

4）  分子量：554.04 g/mol

5）  外观：紫色固体

6）  溶解性：溶于DMSO

7）  化学结构式： 

 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

应用示例

文献1）McKee AS et al.Host DNA released in response to aluminum adjuvant enhances MHC class II-mediated antigen presentation and prolongs CD4 T-cell interactions with dendritic cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Mar 19;110(12): E1122-31. PMID: 23447566

 

操作方法（多光子显微镜）：CD4 T cellswere isolated from OTII or B6 mice using the CD4 T-cell negative isolation kit andwere labeled with 20 μM CMTMR or 2 μM CFSE, washed three times, and injected i.v. into B6 or CD11c-YFP recipients. Twenty-four hours later, these recipient mice were immunized with 20 μg of AF647-labeled ova + 200 μg of Alhydrogel and 5 mg of either BSA or DNase. From 20–24 h following immunization, mice were killed and their draining popliteal LNs were surgically removed for imaging. 

 

文献2）Nikitina EY et al.Combination ofγ‐irradiation and dendritic cell administration induces a potent antitumor response in tumor‐bearing mice: Approach to treatment of advanced stage cancer. Int J Cancer. 2001 Dec 15;94(6):825-33. PMID: 11745485

操作方法（组织内细胞分布评估）：DCs were labeled with 20 μM cell tracker orange (CMTMR) by incubation in RPMI 1640 at 37℃ for 30 min. Cells were then washed in PBS once, incubated for 30 min more and injected (107/mouse) intravenously (i.v.) or subcutaneously (s.c.) near the tumor site. Eighteen hours later lung, spleen, liver, superficial inguinal and popliteal LN as well as tumor tissue were taken out and snap‐frozen in tissue freezing media at−80°C. Frozen tissue sections were examined by fluorescence microscopy using a 540 nm filter. Labeled cells were counted in 10 fields at the total magnification ×200.

Fig. DC labeled with cell tracker CMTMR inside MethA sarcoma. Unlabeled (I) or CMTMR‐labeled (II, III) DCs (107) were injected i.v. (II) or s.c. (III) into MethA sarcoma‐bearing mice 3 hr after irradiation of the tumor with 10 Gy. Tumors were excised 18 hr later and cryostat sections were performed. Slides were analyzed by fluorescence microscopy using a 540‐nm filter. One of the representative fields with a total magnification of 200× is shown. 

 

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对1mgCell-Tracker Green CMFDA（Mw:464.86 g/mol）冻干粉，加入215µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 

3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

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Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

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Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

 

产品关键词：

Cell-Tracker Red CMTPX；Cell-Tracker Green CMFDA；Cell movement细胞运动；Cell location细胞定位；Cell Tracker dye细胞示踪探针；

 

订购信息：

产品名称

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                          Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）             MX4109-100UG 2×50μg        980
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Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Red CMTPX能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Red CMTPX特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（577/602nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  同义名：CellTracker™ Red CMTPX Dye;

2）  分子式：C42H40ClN3O4

3）  分子量：686.25 g/mol

4）  外观：紫色固体

5）  溶解性：溶于DMSO

6）  化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例

文献1）Yang X et al. Nanofiber membrane supported lung-on-a-chip microdevice for anti-cancer drug testing.Lab Chip. 2018 Jan 30;18(3):486-495.

Method (Live cell staining by cell tracker)：Cell Tracker Green CMFDA was used to mark A549 cells, and Cell Tracker Red CMTPX was used to mark HFL1 and HUVEC cells. Cells were marked using the following method. Before cell seeding, the cell suspension was placed into a serum-free medium containing 1 μg mL−1 Cell Tracker dye, and incubated for 30 min at a temperature of 37 °C. After centrifugation, the dye solution was replaced by fresh medium and the cells resuspended and counted.

 

Fig.Schematic diagram of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on the microchip. B: Three-dimensional fluorescence image of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on PLFB-10S. C: Fluorescence image of A549 cells and HFL1 cells in the direction of the Z axis layer by layer. Green: A549 cells marked by Cell Tracker Green CMFDA. Red: HFL1 cells marked by Cell Tracker Red CMTPX (bar = 100 μm).

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对50µgCell-Tracker Red CMTPX（Mw:686.25 g/mol）冻干粉，加入7.2µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

 

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

相关产品

货号 名称 规格                
MX4107-1MG          Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 1mg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）      2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末） 10mg

 

 

 

Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

发表于由

描述

Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

 

产品关键词：

Cell-Tracker Red CMTPX；Cell-Tracker Green CMFDA；Cell movement细胞运动；Cell location细胞定位；Cell Tracker dye细胞示踪探针；

 

订购信息：

产品名称

 产品编号     规格    价格（元）   
                          Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）             MX4109-100UG 2×50μg        980
                      Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）       MX4109-250UG 5×50μg        2280
Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） MX4109-500UG 10×50μg

3580

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Red CMTPX能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Red CMTPX特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（577/602nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  同义名：CellTracker™ Red CMTPX Dye;

2）  分子式：C42H40ClN3O4

3）  分子量：686.25 g/mol

4）  外观：紫色固体

5）  溶解性：溶于DMSO

6）  化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例

文献1）Yang X et al. Nanofiber membrane supported lung-on-a-chip microdevice for anti-cancer drug testing.Lab Chip. 2018 Jan 30;18(3):486-495.

Method (Live cell staining by cell tracker)：Cell Tracker Green CMFDA was used to mark A549 cells, and Cell Tracker Red CMTPX was used to mark HFL1 and HUVEC cells. Cells were marked using the following method. Before cell seeding, the cell suspension was placed into a serum-free medium containing 1 μg mL−1 Cell Tracker dye, and incubated for 30 min at a temperature of 37 °C. After centrifugation, the dye solution was replaced by fresh medium and the cells resuspended and counted.

 

Fig.Schematic diagram of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on the microchip. B: Three-dimensional fluorescence image of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on PLFB-10S. C: Fluorescence image of A549 cells and HFL1 cells in the direction of the Z axis layer by layer. Green: A549 cells marked by Cell Tracker Green CMFDA. Red: HFL1 cells marked by Cell Tracker Red CMTPX (bar = 100 μm).

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对50µgCell-Tracker Red CMTPX（Mw:686.25 g/mol）冻干粉，加入7.2µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

 

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

相关产品

货号 名称 规格                
MX4107-1MG          Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 1mg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）      2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末） 10mg

 

 

 

Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

发表于由

描述

Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）

 

产品关键词：

Cell-Tracker Red CMTPX；Cell-Tracker Green CMFDA；Cell movement细胞运动；Cell location细胞定位；Cell Tracker dye细胞示踪探针；

 

订购信息：

产品名称

 产品编号     规格    价格（元）   
   Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）             MX4109-100UG 2×50μg        980
Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色）       MX4109-250UG 5×50μg       2280
Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） MX4109-500UG 10×50μg

3580

产品描述

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker Red CMTPX能自由穿透细胞膜进入细胞，在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。该产物几次传代都能良好的保留在活细胞。在细胞群内，染料只会转移到子代细胞，不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker Red CMTPX特地设计使其至少72h（典型有3~6代）能展示荧光，此染料表现出理想的示踪特征：稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞，且在生理pH下呈明亮荧光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激发和发射光谱（577/602nm）与绿色荧光蛋白GFP很好的分开，适用于多重标记（见附表1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征）。

产品特性

1）  同义名：CellTracker™ Red CMTPX Dye;

2）  分子式：C42H40ClN3O4

3）  分子量：686.25 g/mol

4）  外观：紫色固体

5）  溶解性：溶于DMSO

6）  化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

  1. 荧光染料都存在淬灭的问题，保存和操作过程中注意避光。
  2. 避免使用含氨基和巯基的缓冲液。
  3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例

文献1）Yang X et al. Nanofiber membrane supported lung-on-a-chip microdevice for anti-cancer drug testing.Lab Chip. 2018 Jan 30;18(3):486-495.

Method (Live cell staining by cell tracker)：Cell Tracker Green CMFDA was used to mark A549 cells, and Cell Tracker Red CMTPX was used to mark HFL1 and HUVEC cells. Cells were marked using the following method. Before cell seeding, the cell suspension was placed into a serum-free medium containing 1 μg mL−1 Cell Tracker dye, and incubated for 30 min at a temperature of 37 °C. After centrifugation, the dye solution was replaced by fresh medium and the cells resuspended and counted.

 

Fig.Schematic diagram of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on the microchip. B: Three-dimensional fluorescence image of the co-culture of A549 cells and HFL1 cells on PLFB-10S. C: Fluorescence image of A549 cells and HFL1 cells in the direction of the Z axis layer by layer. Green: A549 cells marked by Cell Tracker Green CMFDA. Red: HFL1 cells marked by Cell Tracker Red CMTPX (bar = 100 μm).

使用方法

1．细胞准备

在合适的培养基内培养细胞。贴壁细胞可以在含盖玻片的培养皿内爬片生长，装入足量的生长培养基。

2．操作步骤

以下描述的是将染料加到培养细胞以及在荧光显微镜下成像的步骤。各种因素，比如将染料加载到细胞或组织，可能都需根据特定的细胞类型对某些条件做出修改。

探针的最佳染色浓度需根据用途来调整。建议刚开展实验需要测定至少1个10倍范围内的浓度。一般来说，长期染色（≥3天）或使用快速分裂的细胞需5-25µM的染料。对于短期实验（比如活力测定），使用低浓度染料（0.5-5µM）。为了维持正常的细胞形态和降低潜在的伪影，尽可能使用低浓度的染料。

2.1制备Cell-Tracker染色工作液

①开瓶前将产品从冰箱取出，放到室温使其回温至少20min。

②用高质量的无水DMSO溶解粉末使其浓度为10mM。例如，对50µgCell-Tracker Red CMTPX（Mw:686.25 g/mol）冻干粉，加入7.2µlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用无血清培养基稀释母液到0.5-25µM的工作浓度。预热染色工作液到37℃。

 

2.2悬浮细胞染色步骤

① 离心收集细胞，吸掉上清液。用预热的Cell-Tracker染色工作液轻轻的重悬细胞。

② 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

③ 离心细胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入选择的培养基，将标记好的细胞分配到载玻片或到选择的培养器皿内。

⑤根据附表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

2.3贴壁细胞染色步骤

① 吸走培养基。

② 轻轻加入预热的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在适合特定细胞类型的生长条件下孵育15-45min。

④吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入选择的培养基。

⑥根据表1选择合适激发和发射波长的滤片来进行成像检测。

 3．荧光显微镜观察

Cell-Tracker荧光探针可用带标准光学和图像增强的各种落射荧光光学显微镜检测。根据染料选择合适的滤片。见附表1 Cell-Tracker荧光探针的光谱特征。

 

相关产品

货号 名称 规格                
MX4107-1MG          Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针（绿色） 1mg
MX4108-100UG Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针（橙色）      2×50μg
MX4109-100UG Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针（红色） 2×50μg
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素 1g
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶（粉末） 10mg

 

 

 

Pluronic? F-68, Cell Culture Tested 细胞培养级

发表于由

描述

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested  细胞培养级

 

产品信息

产品名称

 产品编号 规格          报价（元） 促销价（元）

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级

 MS4304-5G      5g       240   240 

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级

 MS4304-10G 10g 420

350
Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 MS4304-25G 25g 840

590
Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 MS4304-100G 100g 1200

1020

​

产品描述

Pluronic® F-68，也称为：泊洛沙姆188（Poloxamer 188）、Kolliphor® HS 188、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，是一种非离子表面活性剂（平均分子量~8400），能够促进非水溶性染料和其他材料在生理培养环境内的溶解能力。Pluronic® F-68大批量应用在细胞培养中，因其能够防止培养基搅拌过程中产生的气泡吸附到细胞上，能够减少泡沫生成，或提高细胞膜对流体动力剪切力的耐受性。

产品特性

1） CAS NO：9003-11-6

2） 同义名：Pluronic F-68 Polyol;Poloxamer 188、Kolliphor® HS 188、Polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer; 泊洛沙姆188、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚醚F68

3） 分子式：(C3H6O•C2H4O)x

4） 平均分子量：~8400

5） 溶解性：溶于水

6） 熔点：52℃

7） CMC：0.04mM

8） 外观：白色至类白色固体

9） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：室温干燥保存，至少2年有效。 

运输：室温运输。

产品使用

① 储存液配制：本品可能需要加热来促进溶解以达到所需浓度，由于浓度越高粘性越大（取决于温度）。配制好的溶液请不要冻存。可配制成10%水溶液，室温保存。

② 工作液配制：于使用前，取适量储存液加入培养基或其它体系中，常用工作浓度为0.1%（w/v）。具体工作浓度请做适当优化。

注意事项

1） Pluronic是BASF公司的注册商标名。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格        
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MS4304-5G Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 5g
MS4305-100ML Pluronic® F-68, 10% (100×), Sterile-filtered 100mL

 

 

Pluronic? F-68, Cell Culture Tested 细胞培养级

发表于由

描述

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested  细胞培养级

 

产品信息

产品名称

 产品编号 规格          报价（元） 促销价（元）

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级

 MS4304-5G      5g       240   240 

Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级

 MS4304-10G 10g 420

350
Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 MS4304-25G 25g 840

590
Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 MS4304-100G 100g 1200

1020

​

产品描述

Pluronic® F-68，也称为：泊洛沙姆188（Poloxamer 188）、Kolliphor® HS 188、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，是一种非离子表面活性剂（平均分子量~8400），能够促进非水溶性染料和其他材料在生理培养环境内的溶解能力。Pluronic® F-68大批量应用在细胞培养中，因其能够防止培养基搅拌过程中产生的气泡吸附到细胞上，能够减少泡沫生成，或提高细胞膜对流体动力剪切力的耐受性。

产品特性

1） CAS NO：9003-11-6

2） 同义名：Pluronic F-68 Polyol;Poloxamer 188、Kolliphor® HS 188、Polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer; 泊洛沙姆188、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚醚F68

3） 分子式：(C3H6O•C2H4O)x

4） 平均分子量：~8400

5） 溶解性：溶于水

6） 熔点：52℃

7） CMC：0.04mM

8） 外观：白色至类白色固体

9） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：室温干燥保存，至少2年有效。 

运输：室温运输。

产品使用

① 储存液配制：本品可能需要加热来促进溶解以达到所需浓度，由于浓度越高粘性越大（取决于温度）。配制好的溶液请不要冻存。可配制成10%水溶液，室温保存。

② 工作液配制：于使用前，取适量储存液加入培养基或其它体系中，常用工作浓度为0.1%（w/v）。具体工作浓度请做适当优化。

注意事项

1） Pluronic是BASF公司的注册商标名。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格        
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MS4304-5G Pluronic® F-68, Cell Culture Tested细胞培养级 5g
MS4305-100ML Pluronic® F-68, 10% (100×), Sterile-filtered 100mL

 

 

MTT 噻唑兰 Alamar Blue 阿尔玛蓝 XTT WST-1 Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂

发表于由

CCK-8细胞增殖及毒性检测;WST-8；MTT 噻唑兰；Alamar Blue 阿尔玛蓝；XTT；WST-1；

产品名称 产品编号 规格
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-1ML 1ml (100T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-5ML 5ml (500T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-10ML 10ml (1000T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-50ML 50ml (5×1000T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-100ML 100ml (10×1000T)

产品描述

Cell Counting Kit (CCK-8)，中文名CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂，简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名为2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的快速高灵敏度试剂盒。

WST-8是MTT（噻唑兰）的升级产品，检测原理（见下图）为：在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与活细胞数量（细胞增殖）成正比，与细胞毒性成反比。通过酶标仪在450nm波长处测定OD值来反映细胞增殖，以及细胞毒性水平。

CCK-8法应用非常广泛，包括药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，一年有效。-20℃避光保存，二年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 第一次做实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2） 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

3） 培养时间根据细胞种类不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况白细胞较难显色，因此需要较长的CCK-8反应时间或增大细胞数量（~105个细胞/孔）。悬浮细胞比贴壁细胞较难显色，对于悬浮细胞，加入CCK-8培养1-4小时后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定来决定。若显色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞，CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但培养30分钟左右可取出肉眼观察显色程度（根据细胞类型而定，需要摸索一定条件）。注意：CCK-8的最佳反应时间以实际显色的最佳时间为准。

4） 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。

5） 加CCK-8速度要快，减少试剂在移液器上的残留。为使CCK-8试剂和培养基充分混匀，建议在加入CCK-8后轻轻震摇培养板。为了避免加样时由于CCK-8在枪头上残留所引入的误差，可以在加样前用培养基稀释CCK-8并混匀后加样。

6） CCK-8的核心成分WST-8会与还原剂反应生成WST-8甲臢，若实验体系内含有还原剂，请务必检测背景OD值（即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入CCK-8在一定时间内检测）和不加药物的培养基（只加CCK-8）进行比较。如果OD值明显偏高，则说明的确存在反应。

7） 若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加入CCK-8。含酚红的培养基不影响CCK-8测定细胞活性。

8） 如果样品为高浑浊的细胞悬液，建议设定600nm（或600nm以上）作为参比波长，扣除参比波长的OD值即可。

9） CCK-8对细胞毒性非常低，其与活细胞脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD值不断增加（由于脱氢酶是持续产生的）。另外，其他实验比如中兴红法或结晶紫法，也可在CCK-8检测完成后继续进行。

10）若需要测定细胞的具体数量，建议先做一个标准曲线。

11）如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

12）关于CCK-8的更多问题，请见附录I. CCK-8使用常见问题集锦。

13）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

1） 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

2） 按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

3） 接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）

2. 细胞活性检测

1） 在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃，5% CO2）。

2） 向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3） 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4） 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5） 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

3. 细胞增殖-毒性检测

1） 在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

2） 向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3） 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4） 向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5） 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6） 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7） 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

【注意】：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：实验孔（含有细胞的培养基、CCK-8溶液和药物）的吸光度
A（空白）：空白孔（不含细胞和药物的培养基，含CCK-8溶液）的吸光度
A（0加药）：对照孔（含有细胞的培养基、CCK-8溶液，不含药物）的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性

相关产品

货号 名称 规格
MS4006-100ML Crystal Violet Stain Solution 结晶紫染色液 100ml
MX3002-50ML 0.4% Trypan Blue Solution 0.4%台盼蓝染色液 50ml
MX3004-250MG MTT 噻唑兰 250mg
MX3005-500T MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T
MX3006-5ML Alamar Blue 阿尔玛蓝细胞增殖及毒性检测试剂 5ml (500T)
MX3007-100T WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 100T
MX3008-5ML Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂 5ml (500T)
MX3015-500T 中性红细胞增殖与毒性检测试剂盒 500T

附录I. CCK-8使用常见问题集锦

1） CCK-8与其他细胞增殖-毒性检测方法的优势在哪里？

检测方法

特征比较

 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法
甲臢产物的水溶性 差，需有机溶剂溶解后再检测 好 好 好
产品性状 粉末 2瓶溶液 单瓶溶液（或粉末+溶液） 单瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用（或现配现用） 即开即用
检测灵敏度 高 很高 很高 非常高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷

2） 单孔接种多少个细胞？

当使用96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔（100μL培养基）。检测白细胞的灵敏度相对较低，因此建议接种量不低于2500个/孔（100μL培养基），建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。若使用24孔板或6孔板，请先计算每孔相应的接种量，然后按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8。

3） 如何设定空白对照？

在不含细胞的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验（细胞毒性实验）时，还应考虑药物的吸收，可以在不含细胞、加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。

4） 哪些物质会影响CCK-8的测定？

当有还原性物质存在时会增加CCK-8的测定，增加OD值；当有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，降低OD值。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

5） 做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？

有时会有影响。如果药物具有还原性就会和CCK-8发生显色反应，增加OD值。解决方法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度。如果它的吸光度比不含药物的培养基（只加CCK-8）的吸光度高，则说明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。

6） CCK-8对细胞的毒性大小如何？

CCK-8对细胞毒性相当低，同样的细胞在CCK-8检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，比如结晶紫检测法，中性红检测法或DNA荧光检测法等。由于每种细胞对CCK-8的耐受力不同，因此若需要长时间孵育，先检测下细胞在加入CCK-8后的活力。

7） 如果没有450nm的滤光片，还可以使用哪些其他滤光片？

还可使用430-490nm之间的滤光片，但450nm滤光片的检测灵敏度最高。

8） CCK-8能否对活细胞进行染色？

不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性四唑盐（WST-8），并通过电子载体1-methoxy PM将活细胞中的电子交换到培养基中的WST-8上，因WST-8及其生成的甲臢染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK-8不能对活细胞进行染色。

9） 必须设定参比波长？设定参比波长的目的是什么？

不一定，CCK-8在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊产生的吸收。

10）每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？

可能存在以下几个原因：a）当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。通常情况最外一圈孔只加培养基，不作为测定孔用；b）有可能因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8，轻轻敲击培养板以帮助混匀；c）每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1000~100,000个/孔范围内摸索条件。

11）如果OD值太低，可以采取什么办法？

可采取2种办法：a）适当增加细胞数量；b）延长加入CCK-8后的孵育时间。

12）如果OD值太高，但不能减少细胞数量，如何解决？

可以缩短加入CCK-8后的孵育时间。比如，可以把加入CCK-8后的孵育时间由原来的3h缩短到2h。

13）CCK-8显色过程种如何终止反应？

有以下几种方法（96孔板）：a）显色反应后，将培养板置于4℃冰箱；b）每孔加10 μL0.1M的HCL溶液；c）每孔加10 μL 1% w/v SDS溶液。反应终止后请在24h内测定OD值。

14）必须预培养细胞吗？

不一定。如果需要保持细胞的最佳状态，建议预培养细胞。如果不做预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。有的科研人员不做预培养，但做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

15）预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？

一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数板计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数板进行计数。

16）CCK-8对于不同的细胞灵敏度是否一样？

不一样。悬浮细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8后1-4h吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的染色时间或增加细胞数量来解决。

17）悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

18）应该每次做标准曲线吗？

建议每次都做。虽然细胞相同，但是细胞状态不一样。对于状态不一样的细胞建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能有轻微的差异，此时也建议分别做标准曲线。

19）实验之前是否需要先检测以下培养基和CCK-8之间是否有反应？

建议使用一个孔做下检测，因有时培养基种可能含氧化还原物质。正式实验之前有必要先确认下培养基和CCK-8是否有反应。一般正常的OD值应该在0.4以下。

20）有时在药物作用下，细胞已经死亡，但脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？

不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反应活细胞数量。如果细胞已经死亡，即使脱氢酶的活性还有，测定出来的细胞数量将会比真实值高，不能反应真实的活细胞数量，建议采用别的方法测定。

21）可否使用384孔板进行实验？

可以。向每孔加入培养基总体积10%的CCK-8。如果加入CCK-8体积太少，可以先将CCK-8稀释一倍，然后加入培养基总体积20%的量。

22）CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性？

有。但请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此，结果可能不同。

23）CCK-8能否检测细菌细胞？

可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。向每孔100μL大肠杆菌培养液中加入10μL CCK-8，培养1-4h或过夜。

24）CCK-8的稳定性如何？

CCK-8在2-8℃能稳定保存1年，推荐用此方法检测；长期不用也可置于-20℃稳定保存2年。

Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂 Alamar Blue 阿尔玛蓝

发表于由

CCK-8细胞增殖及毒性检测;WST-8；MTT 噻唑兰；Alamar Blue 阿尔玛蓝；XTT；WST-1；

产品名称 产品编号 规格
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-1ML 1ml (100T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-5ML 5ml (500T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-10ML 10ml (1000T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-50ML 50ml (5×1000T)
Cell Counting Kit (CCK-8) 细胞增殖及毒性检测试剂 MX3008-100ML 100ml (10×1000T)

Cell Counting Kit (CCK-8)，中文名CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂，简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名为2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的快速高灵敏度试剂盒。

WST-8是MTT（噻唑兰）的升级产品，检测原理（见下图）为：在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与活细胞数量（细胞增殖）成正比，与细胞毒性成反比。通过酶标仪在450nm波长处测定OD值来反映细胞增殖，以及细胞毒性水平。

CCK-8法应用非常广泛，包括药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，一年有效。-20℃避光保存，二年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 第一次做实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2） 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

3） 培养时间根据细胞种类不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况白细胞较难显色，因此需要较长的CCK-8反应时间或增大细胞数量（~105个细胞/孔）。悬浮细胞比贴壁细胞较难显色，对于悬浮细胞，加入CCK-8培养1-4小时后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定来决定。若显色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞，CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但培养30分钟左右可取出肉眼观察显色程度（根据细胞类型而定，需要摸索一定条件）。注意：CCK-8的最佳反应时间以实际显色的最佳时间为准。

4） 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。

5） 加CCK-8速度要快，减少试剂在移液器上的残留。为使CCK-8试剂和培养基充分混匀，建议在加入CCK-8后轻轻震摇培养板。为了避免加样时由于CCK-8在枪头上残留所引入的误差，可以在加样前用培养基稀释CCK-8并混匀后加样。

6） CCK-8的核心成分WST-8会与还原剂反应生成WST-8甲臢，若实验体系内含有还原剂，请务必检测背景OD值（即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入CCK-8在一定时间内检测）和不加药物的培养基（只加CCK-8）进行比较。如果OD值明显偏高，则说明的确存在反应。

7） 若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加入CCK-8。含酚红的培养基不影响CCK-8测定细胞活性。

8） 如果样品为高浑浊的细胞悬液，建议设定600nm（或600nm以上）作为参比波长，扣除参比波长的OD值即可。

9） CCK-8对细胞毒性非常低，其与活细胞脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD值不断增加（由于脱氢酶是持续产生的）。另外，其他实验比如中兴红法或结晶紫法，也可在CCK-8检测完成后继续进行。

10）若需要测定细胞的具体数量，建议先做一个标准曲线。

11）如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

12）关于CCK-8的更多问题，请见附录I. CCK-8使用常见问题集锦。

13）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

1） 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

2） 按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

3） 接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）

2. 细胞活性检测

1） 在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃，5% CO2）。

2） 向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3） 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4） 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5） 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

3. 细胞增殖-毒性检测

1） 在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

2） 向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3） 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4） 向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5） 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6） 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7） 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

【注意】：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：实验孔（含有细胞的培养基、CCK-8溶液和药物）的吸光度
A（空白）：空白孔（不含细胞和药物的培养基，含CCK-8溶液）的吸光度
A（0加药）：对照孔（含有细胞的培养基、CCK-8溶液，不含药物）的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性

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MS4006-100ML Crystal Violet Stain Solution 结晶紫染色液 100ml
MX3002-50ML 0.4% Trypan Blue Solution 0.4%台盼蓝染色液 50ml
MX3004-250MG MTT 噻唑兰 250mg
MX3005-500T MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T
MX3006-5ML Alamar Blue 阿尔玛蓝细胞增殖及毒性检测试剂 5ml (500T)
MX3007-100T WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 100T
MX3008-5ML Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂 5ml (500T)
MX3015-500T 中性红细胞增殖与毒性检测试剂盒 500T

附录I. CCK-8使用常见问题集锦

1） CCK-8与其他细胞增殖-毒性检测方法的优势在哪里？

检测方法

特征比较

 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法
甲臢产物的水溶性 差，需有机溶剂溶解后再检测 好 好 好
产品性状 粉末 2瓶溶液 单瓶溶液（或粉末+溶液） 单瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用（或现配现用） 即开即用
检测灵敏度 高 很高 很高 非常高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷

2） 单孔接种多少个细胞？

当使用96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔（100μL培养基）。检测白细胞的灵敏度相对较低，因此建议接种量不低于2500个/孔（100μL培养基），建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。若使用24孔板或6孔板，请先计算每孔相应的接种量，然后按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8。

3） 如何设定空白对照？

在不含细胞的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验（细胞毒性实验）时，还应考虑药物的吸收，可以在不含细胞、加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。

4） 哪些物质会影响CCK-8的测定？

当有还原性物质存在时会增加CCK-8的测定，增加OD值；当有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，降低OD值。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

5） 做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？

有时会有影响。如果药物具有还原性就会和CCK-8发生显色反应，增加OD值。解决方法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度。如果它的吸光度比不含药物的培养基（只加CCK-8）的吸光度高，则说明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。

6） CCK-8对细胞的毒性大小如何？

CCK-8对细胞毒性相当低，同样的细胞在CCK-8检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，比如结晶紫检测法，中性红检测法或DNA荧光检测法等。由于每种细胞对CCK-8的耐受力不同，因此若需要长时间孵育，先检测下细胞在加入CCK-8后的活力。

7） 如果没有450nm的滤光片，还可以使用哪些其他滤光片？

还可使用430-490nm之间的滤光片，但450nm滤光片的检测灵敏度最高。

8） CCK-8能否对活细胞进行染色？

不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性四唑盐（WST-8），并通过电子载体1-methoxy PM将活细胞中的电子交换到培养基中的WST-8上，因WST-8及其生成的甲臢染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK-8不能对活细胞进行染色。

9） 必须设定参比波长？设定参比波长的目的是什么？

不一定，CCK-8在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊产生的吸收。

10）每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？

可能存在以下几个原因：a）当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。通常情况最外一圈孔只加培养基，不作为测定孔用；b）有可能因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8，轻轻敲击培养板以帮助混匀；c）每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1000~100,000个/孔范围内摸索条件。

11）如果OD值太低，可以采取什么办法？

可采取2种办法：a）适当增加细胞数量；b）延长加入CCK-8后的孵育时间。

12）如果OD值太高，但不能减少细胞数量，如何解决？

可以缩短加入CCK-8后的孵育时间。比如，可以把加入CCK-8后的孵育时间由原来的3h缩短到2h。

13）CCK-8显色过程种如何终止反应？

有以下几种方法（96孔板）：a）显色反应后，将培养板置于4℃冰箱；b）每孔加10 μL0.1M的HCL溶液；c）每孔加10 μL 1% w/v SDS溶液。反应终止后请在24h内测定OD值。

14）必须预培养细胞吗？

不一定。如果需要保持细胞的最佳状态，建议预培养细胞。如果不做预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。有的科研人员不做预培养，但做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

15）预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？

一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数板计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数板进行计数。

16）CCK-8对于不同的细胞灵敏度是否一样？

不一样。悬浮细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8后1-4h吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的染色时间或增加细胞数量来解决。

17）悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

18）应该每次做标准曲线吗？

建议每次都做。虽然细胞相同，但是细胞状态不一样。对于状态不一样的细胞建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能有轻微的差异，此时也建议分别做标准曲线。

19）实验之前是否需要先检测以下培养基和CCK-8之间是否有反应？

建议使用一个孔做下检测，因有时培养基种可能含氧化还原物质。正式实验之前有必要先确认下培养基和CCK-8是否有反应。一般正常的OD值应该在0.4以下。

20）有时在药物作用下，细胞已经死亡，但脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？

不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反应活细胞数量。如果细胞已经死亡，即使脱氢酶的活性还有，测定出来的细胞数量将会比真实值高，不能反应真实的活细胞数量，建议采用别的方法测定。

21）可否使用384孔板进行实验？

可以。向每孔加入培养基总体积10%的CCK-8。如果加入CCK-8体积太少，可以先将CCK-8稀释一倍，然后加入培养基总体积20%的量。

22）CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性？

有。但请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此，结果可能不同。

23）CCK-8能否检测细菌细胞？

可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。向每孔100μL大肠杆菌培养液中加入10μL CCK-8，培养1-4h或过夜。

24）CCK-8的稳定性如何？

CCK-8在2-8℃能稳定保存1年，推荐用此方法检测；长期不用也可置于-20℃稳定保存2年。