Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Deep Red 钙黄绿素深红色；Cy5；活细胞染色；Fluorescein diacetate (FDA)；Propidium Iodide（PI）碘化丙啶；

产品信息                                                                                    

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性最受欢迎的活细胞荧光染料，用来标记和监测活细胞功能，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验，比如，其无法和GFP转染细胞联合使用，因光谱一致。为了解决这一应用缺陷，我司特别开发出Calcein Red（货号：MX3013），Calcein Deep Red（货号：MX3016）这些衍生物，能够联合GFP或FITC等荧光素实现对活细胞的多重标记和功能分析。

我司（金畔生物）提供的钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯（Calcein Deep Red AM）自身无荧光，具有细胞膜渗透性。能够轻易进入活细胞，被细胞内酯酶水解生成钙黄绿素深红（Calcein Deep Red），产生强烈的深红色荧光（Ex/Em=643/663nm），用标准的Cy5滤片设置检测。

产品特性

1）  同义名：Calcein Deep Red AM；Calcein Deep Red AM Ester;钙黄绿素乙酰氧基甲酯（深红色），钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯；

2）  分子量：~600

3）  纯度：≥95%（HPLC）

4）  Ex/Em：643/663nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

应用实例

Fig 1.HeLa细胞（活细胞+固定细胞）经Calcein Deep Red AM（# MX3016）染色的图片。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2. 本品从冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
3. 本品对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。工作液必须现配现用。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1、储存液制备

储存液配制范围可为2～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mgCalcein Deep RedAM（Mw ~600）内加入333μl细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601A-100ML）即可。储存液需要根据单次用量分装，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此种情况下可稳定保存数月。

2、染色工作液制备

于正式实验前，或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制储存液，或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM储存液并回至室温使充分融化。用添加有2.5mM丙磺舒的HHBS（Hanks with 20mM Hepes buffer）或其他适当的缓冲液（pH 7.0）稀释储存液到5~10 µM工作浓度。

【注1：Calcein Deep Red染色工作液很不稳定，需要使用前配制。】

【注2：许多细胞都含有机阴离子转运体。因此高度推荐染色工作液内添加2.5mM丙磺舒（有机阴离子转运体抑制剂），以防止荧光探针泄露到细胞外。】

3、染色步骤

以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活细胞染色步骤，仅作参考。具体实验请根据自身要求做调整。

1. 细胞准备：于黑框/透明底的96孔微孔板内按照100~10,000个细胞/孔的量铺板。设置空白孔（不含细胞的培养基）。【注意】：每种细胞系需要根据实际情况来确认细胞增殖或细胞毒性诱导的最佳细胞密度。增殖分析，细胞密度相对少些；毒性分析，起始细胞密度高些。建议96孔板的单孔体积为100 µL。
2. 药物处理：加待测药物到细胞内处理适当时间（比如24h，48h或96h）。设置空白孔（不含细胞的培养基），加入相应量的待测药物。【注意】：药物添加前可不用清洗细胞。然而，若是药物是血清敏感性，那在添加药物前需要吸掉生长培养基和血清因子。替换之细胞用无血清培养基培养。
3. 吸掉培养基。【注意：探针加载前必须去除培养基】
4. 按照100 µL/孔（96孔板）的量加入Calcein Deep Red染色工作液。
5. 室温或37℃避光孵育1h。【注意1：适当的孵育时间取决于细胞类型和使用的细胞浓度。每个实验建议进行孵育时间优化。】【注意2：对于悬浮细胞，探针孵育结束后，于800rpm离心2min。】
6. 用含合适滤光片（Ex/Em= 643nm/663nm）的仪器进行荧光检测。【注意：如果荧光背景高，可在荧光信号检测前用含2.5mM丙磺舒的HHBS缓冲液替换Calcein Deep Red染色工作液。】

相关产品

Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝；Calcein, AM 钙黄绿素；Calcein Red钙黄绿素红；DAPI；活细胞染色探针； CAS NO：168482-84-6；

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性最受欢迎的活细胞荧光染料，用来标记和监测活细胞功能，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验，比如，其无法和GFP转染细胞联合使用，因光谱一致。为了解决这一应用缺陷，我司特别开发出Calcein Blue, AM、Calcein Red, AM等，实现联合Calcein, AM对活细胞的多重标记和功能分析。

Calcein Blue, AM本身仅呈微弱荧光（Ex/Em~322/435nm），具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素蓝（Calcein Blue），探针极性增强并能保留在细胞内数小时，此时荧光强度增强且荧光光谱迁移到更长波长（Ex/Em~360/445nm），光谱特征类似于DAPI、Hoechst 33342或Hoechst 33258。

产品特性

1） CAS NO：168482-84-6

2） 化学名：N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[(7-hydroxy-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-8-yl) methyl]-glycine, (acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Calcein Blue Acetoxymethyl ester钙黄绿素蓝乙酰氧基甲酯；

4） 分子式：C21H23NO11

5） 分子量：465.41

6） 纯度：≥90%

7） Ex/Em：360/445nm

8） 溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

9） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Calcein Blue, AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein Blue, AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein Blue, AM工作液必须现配现用。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mg Calcein Blue, AM（Mw：465.41）内加入430μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601A-100ML），充分溶解，混匀。储存液根据单次用量分装-20℃保存，避免反复冻融，数月稳定（不要超过6个月）。

B， 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C， 染色步骤

大多数实验体系中Calcein Blue, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Blue, AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1） 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Blue, AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein Blue, AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Blue, AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2） 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA或Accutase消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。【注意】：贴壁细胞也可进行原位染色。

3） 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4） 用1/10细胞培养基体积的Calcein Blue, AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。

【注意】：1）若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Blue泄露到胞外；2）降低探针加载温度，可能会减少探针区室化现象。

5） 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。

6） 用含合适滤光片（Ex/Em=360/445nm）的仪器进行检测。

相关产品

描述

Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色）

产品关键词：

Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Red 钙黄绿素红；TRITC；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

产品信息

【好消息】：目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein, AM，HPLC＞97%）限时促销开始啦，本促销最终解释权归上海金畔生物科技有限公司。本品长时间销售供货给国内各大科研机构，以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装，按照5μM的工作浓度，用于96孔板内活细胞检测（工作体积100μl）可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元，非常划算。

【好消息】：我司（金畔生物）推出钙黄绿素系列产品，覆盖几种荧光光谱，满足你对活细胞进行多重标记和功能分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用荧光素同钙黄绿素之间的荧光重叠啦。有这么多的选择，不用烦烦烦啦。

产品描述

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性的活细胞荧光染料，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基团的存在不仅加强疏水性，使其能轻易穿透活细胞膜。而且封闭结合钙离子的分子部分，本身不发荧光。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素（calcein），能与胞内钙离子结合，产生强烈的绿色荧光。因不具有细胞膜渗透性，从而被保留在胞内。与其它活细胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相比，Calcein, AM最适合用于活细胞染色探针，因细胞毒性很低，而且不会抑制任何细胞功能如增殖或淋巴细胞趋化性。另外，使用Calcein, AM活性检测的实验结果十分可信，与标准的51Cr释放法所得结果一致。

由于死细胞缺乏酯酶，Calcein, AM仅对活细胞进行标记，这一特征使其非常适合用来检测细胞活力和细胞的短期示踪。常常与碘化丙啶PI联合使用，因其仅能穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核，嵌入细胞的DNA双螺旋区域，并产生红色荧光（Ex/Em= 535nm/617nm），仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。结合这些特点，Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。

本品以粉末形式提供，超纯级别（≥95%），可与碘化丙啶PI（货号：MX4205-10MG）联合使用，进行活细胞和死细胞的双重染色。

产品特性

1） CAS NO：148504-34-1

2）同义名：钙黄绿素乙酰甲酯；3′-O-乙酰胺-2′,7′-二(羧乙基)-4或5-羧基荧光素，二乙酰甲酯；

3）分子式：C46H46N2O23

4）分子量：994.86

5）纯度：≥95%（HPLC）

6）外观：白色或浅黄色结晶粉末

7）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Calcein-AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein-AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）内加入10μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601-100mL）即可。

B， 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C， 染色步骤

大多数实验体系中Calcein, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein, AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1） 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2） 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

3） 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4） 用1/10细胞培养基体积的Calcein, AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育15～30min。

【注意】：若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低Calcein泄露到胞外。

5） 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。用含合适滤光片（Ex/Em= 490nm/515nm）的荧光显微镜进行检测。

相关产品

描述

Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色）

产品关键词：

Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Red 钙黄绿素红；TRITC；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

产品信息                                                                                    

产品描述

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性最受欢迎的活细胞荧光染料，用来标记和监测活细胞功能，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验，比如，其无法和GFP转染细胞联合使用，因光谱一致。为了解决这一应用缺陷，我司特别开发出Calcein Red, AM，实现联合Calcein, AM对活细胞的标记和功能分析。

同样原理，Calcein Red, AM自身无荧光，具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素红（Calcein Red），能与胞内钙离子结合，产生强烈的红色荧光（Ex/Em=560/574），用标准的TRITC/Cy3滤片设置检测。

产品特性

1）  同义名：Calcein Red Acetoxymethyl ester钙黄绿素红乙酰甲酯；

2）  分子量：1015.79

3）  纯度：≥90%（HPLC）

4）  Ex/Em：560/574nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）Calcein Red AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein Red AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein Red AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A、 储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mg Calcein Red AM（Mw：1015.79）内加入196μl细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601-100mL）即可。储存液需要根据单次用量分装，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此种情况下可稳定保存数月。

B. 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mgPluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C. 染色步骤

大多数实验体系中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Red AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1. 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Red AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein Red AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2. 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

3. 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4. 用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。

【注意】：1）若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Red泄露到胞外；2）降低探针加载温度，可能会减少探针区室化现象。

6. 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗；

7. 用含合适滤光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的仪器进行检测。

描述

Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色）

产品关键词：

Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Red 钙黄绿素红；TRITC；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

产品信息

【好消息】：目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein, AM，HPLC＞97%）限时促销开始啦，本促销最终解释权归上海金畔生物科技有限公司。本品长时间销售供货给国内各大科研机构，以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装，按照5μM的工作浓度，用于96孔板内活细胞检测（工作体积100μl）可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元，非常划算。

【好消息】：我司（金畔生物）推出钙黄绿素系列产品，覆盖几种荧光光谱，满足你对活细胞进行多重标记和功能分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用荧光素同钙黄绿素之间的荧光重叠啦。有这么多的选择，不用烦烦烦啦。

产品描述

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性的活细胞荧光染料，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基团的存在不仅加强疏水性，使其能轻易穿透活细胞膜。而且封闭结合钙离子的分子部分，本身不发荧光。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素（calcein），能与胞内钙离子结合，产生强烈的绿色荧光。因不具有细胞膜渗透性，从而被保留在胞内。与其它活细胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相比，Calcein, AM最适合用于活细胞染色探针，因细胞毒性很低，而且不会抑制任何细胞功能如增殖或淋巴细胞趋化性。另外，使用Calcein, AM活性检测的实验结果十分可信，与标准的51Cr释放法所得结果一致。

由于死细胞缺乏酯酶，Calcein, AM仅对活细胞进行标记，这一特征使其非常适合用来检测细胞活力和细胞的短期示踪。常常与碘化丙啶PI联合使用，因其仅能穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核，嵌入细胞的DNA双螺旋区域，并产生红色荧光（Ex/Em= 535nm/617nm），仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。结合这些特点，Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。

本品以粉末形式提供，超纯级别（≥95%），可与碘化丙啶PI（货号：MX4205-10MG）联合使用，进行活细胞和死细胞的双重染色。

产品特性

1） CAS NO：148504-34-1

2）同义名：钙黄绿素乙酰甲酯；3′-O-乙酰胺-2′,7′-二(羧乙基)-4或5-羧基荧光素，二乙酰甲酯；

3）分子式：C46H46N2O23

4）分子量：994.86

5）纯度：≥95%（HPLC）

6）外观：白色或浅黄色结晶粉末

7）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Calcein-AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein-AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）内加入10μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601-100mL）即可。

B， 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C， 染色步骤

大多数实验体系中Calcein, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein, AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1） 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2） 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

3） 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4） 用1/10细胞培养基体积的Calcein, AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育15～30min。

【注意】：若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低Calcein泄露到胞外。

5） 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。用含合适滤光片（Ex/Em= 490nm/515nm）的荧光显微镜进行检测。

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描述

Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色）

产品关键词：

Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Red 钙黄绿素红；TRITC；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

产品信息

【好消息】：目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein, AM，HPLC＞97%）限时促销开始啦，本促销最终解释权归上海金畔生物科技有限公司。本品长时间销售供货给国内各大科研机构，以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装，按照5μM的工作浓度，用于96孔板内活细胞检测（工作体积100μl）可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元，非常划算。

【好消息】：我司（金畔生物）推出钙黄绿素系列产品，覆盖几种荧光光谱，满足你对活细胞进行多重标记和功能分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用荧光素同钙黄绿素之间的荧光重叠啦。有这么多的选择，不用烦烦烦啦。

产品描述

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性的活细胞荧光染料，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基团的存在不仅加强疏水性，使其能轻易穿透活细胞膜。而且封闭结合钙离子的分子部分，本身不发荧光。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素（calcein），能与胞内钙离子结合，产生强烈的绿色荧光。因不具有细胞膜渗透性，从而被保留在胞内。与其它活细胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相比，Calcein, AM最适合用于活细胞染色探针，因细胞毒性很低，而且不会抑制任何细胞功能如增殖或淋巴细胞趋化性。另外，使用Calcein, AM活性检测的实验结果十分可信，与标准的51Cr释放法所得结果一致。

由于死细胞缺乏酯酶，Calcein, AM仅对活细胞进行标记，这一特征使其非常适合用来检测细胞活力和细胞的短期示踪。常常与碘化丙啶PI联合使用，因其仅能穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核，嵌入细胞的DNA双螺旋区域，并产生红色荧光（Ex/Em= 535nm/617nm），仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。结合这些特点，Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。

本品以粉末形式提供，超纯级别（≥95%），可与碘化丙啶PI（货号：MX4205-10MG）联合使用，进行活细胞和死细胞的双重染色。

产品特性

1） CAS NO：148504-34-1

2）同义名：钙黄绿素乙酰甲酯；3′-O-乙酰胺-2′,7′-二(羧乙基)-4或5-羧基荧光素，二乙酰甲酯；

3）分子式：C46H46N2O23

4）分子量：994.86

5）纯度：≥95%（HPLC）

6）外观：白色或浅黄色结晶粉末

7）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Calcein-AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein-AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）内加入10μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601-100mL）即可。

B， 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C， 染色步骤

大多数实验体系中Calcein, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein, AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1） 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2） 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

3） 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4） 用1/10细胞培养基体积的Calcein, AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育15～30min。

【注意】：若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低Calcein泄露到胞外。

5） 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。用含合适滤光片（Ex/Em= 490nm/515nm）的荧光显微镜进行检测。

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