OverExpress C43(DE3)pLysS；OverExpress C43(DE3)；BL21 (DE3)；OverExpress C41(DE3)；表达感受态细胞；毒性蛋白表达；pET表达载体；
| 货号 |
产品名称 |
规格 |
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| MF2482-1000UL |
OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
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| MF2482-5000UL |
OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 |
50×100μl |
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菌株描述
OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌（E. Coli）菌株，有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。
OverExpress菌株含赋予毒性蛋白抗性的遗传突变。C41(DE3)菌株来源于BL21(DE3)，此菌株含一个突变，能降低T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的水平，从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。C43(DE3)菌株来源于C41(DE3)，通过筛选对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。C43(DE3)与C41(DE3)菌株相比，至少携带另一个不同突变，使其获得更广泛更高的毒性蛋白耐受能力。
正如BL21(DE3)菌株，OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3区，所有菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。
OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，能够表达少量T7溶菌酶（一种天然的T7 RNA聚合酶抑制剂）。T7溶菌酶能作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，降低目的基因的背景表达水平，但不会干扰IPTG诱导的表达，从而能够稳定重组表达的蛋白，特别是毒性蛋白。氯霉素（34 µg/ml）需加入菌株培养基内以维持pLysS质粒。
OverExpress C43(DE3) pLysS菌株基因型：F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)
产品描述
本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3) pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
| 组分编号 |
组分名 |
货号（规格） |
| MF2482-1000UL |
MF2482-5000UL |
| MF2482-A |
OverExpress C43(DE3)pLysS Competent Cell |
10×100μl |
50×100μl |
| MF2482-B |
Control Plasmid puC19,10pg/μl |
10μl |
10μl |
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。
2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
7） 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
8） 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
9） OverExpress C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基不含抗生素外，其他所用固体培养基、液体培养基均应添加34µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取50μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含34µg/ml氯霉素以及所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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| 货号 |
名称 |
规格 |
| MF2331-1000UL |
BL21 (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 |
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10×100μl |
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10×100μl |
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10×100μl |
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| MF2335-1000UL |
BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 |
10×100μl |
| MS0021-10G |
Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 |
10g |
| MS0018-10G |
Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 |
10g |
| MS0017-5G |
Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 |
5g |
| MS0019-10G |
Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 |
10g |
| MS0014-1G |
Rifampicin, USP Grade利福平 |
1g |
| MF2002-1G |
IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 |
1g |
附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）
1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。需注意对于OverExpress pLysS菌株，除筛选抗生素之外还要加入氯霉素（34 µg/ml）。
2）37℃，200rpm摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达，添加葡萄糖（终浓度为0.2% w/v）到生长培养基内。
3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。
4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。
5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。
5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。
6）37℃，120rpm培养3~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。
7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。
8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。
IPTG母液（1M）配制
称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。
氯霉素母液（34mg/ml）配制
称量适量氯霉素溶于乙醇配制成34mg/ml储存液，-20℃保存。工作浓度为34µg/ml。
