BODIPY 493/503；Nile Red 尼罗红；Neutral lipds 中性脂滴；DiI 细胞膜探针；DiR； CAS NO：121207-31-6

产品信息

产品描述

BODIPY 493/503是一种亲脂性荧光探针，定位在极性脂上，能用于标记细胞中性脂内容物，特别定位在活细胞和固定细胞的脂滴上。BODIPY 493/503与落射荧光显微镜、共聚焦荧光显微镜和双质子荧光显微镜，以及流式细胞仪兼容。最大激发和发射波长分别是493/503nm，适用于活细胞和固定细胞标记。

产品特性

1）CAS NO.：121207-31-6

2）化学名：(T-4)-[2-[1-(3,5-dimethyl-2H-pyrrol-2-ylidene-κN)ethyl]-3,5-dimethyl-1H-pyrrolato-κN]difluoro-boron

3）同义名：4,4-Difluoro-1,3,5,7,8-Pentamethyl-4-Bora-3a,4a-Diaza-s-Indacene

4）分子式：C₁₄H₁₇BF₂N₂

5）分子量：262.1

6）纯度：≥98%

7）Ex/Em：493/503nm

8）溶解性：溶于DMSO或无水乙醇

9）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。 

运输：冰袋运输。

储存液的制备和保存

1）将低温保存的10mg BODIPY 493/503（Mw:262.1）置于室温回温至少20min，低速离心后加入一定量的无水乙醇或无水DMSO配制成适量浓度的母液，比如5mM（往10mg 粉末加入7.63ml DMSO，充分溶解即可）。根据单次用量将储存液分装，≤-20℃避光干燥保存。需注意溶液内湿度的逐渐积累会随着时间引起探针聚集，从而务必干燥保存储存液。

2）如果想长期保存，可以用无水乙醇溶解粉末，之后分装到小量，之后使用真空泵来挥发掉乙醇。之后置于≤-20℃避光干燥保存。

探针的标记（仅作参考）

由于BODIPY 493/503属于疏水染料，难以快速的分散进入水溶性溶液中，为了能均匀稳定的标记细胞，可参考以下方法标记活细胞。

应用示例

图1. 胞内中性LDs的定量和观察。A，A498细胞在含BSA（0.2%）或含BSA的油酸过夜培养。之后根据流式分析的操作步骤进行BODIPY染色；B，A498细胞在含BSA（0.2%）或含BSA的油酸过夜培养。之后根据荧光分析的操作步骤进行BODIPY染色；

BODIPY staining for flow cytometry

1. Grow cells under culture conditions relevant for the study. A 35 mm dish/well is sufficient for the cell numbers required in this assay. For our assays, 50,000 A498 cells in 35 mm well were sufficient.
2. Overnight incubation of cells with 30 μM oleic acid can serve as a positive control for increased neutral lipid content, as oleic acid is a potent inducer of triglyceride synthesis and storage. Fatty acid free BSA serves as a control.
3. At the time-point of interest, prepare 2 μM BODIPY staining solution in PBS. The volume of staining solution required for each sample corresponds to the volume of media used for culturing cells.
4. Wash cells with a quick rinse using 3 ml PBS to remove media/serum.
5. Incubate on BODIPY staining solution in the dark for 15 min at 37 °C. Include an unstained control for flow cytometry.

Note: From this point, protect samples from light as much as possible.

5. Wash cells with a quick rinse using 3 ml PBS to remove staining solution.
6. Trypsinize cells to generate a single cell suspension. For the A498 cell line used in this protocol, cells were incubated with Trypsin-EDTA (0.25%) for 5 min at 37 °C.
7. Add 5 ml of PBS and transfer cell suspension to a 15 ml conical tube.
8. Pellet cells at 250 × g, 5 min, 4 °C.
9. Aspirate supernatant, wash the cell pellet with a quick rinse using 3 ml PBS, and pellet cells at 250 × g, 5 min, 4 °C.
10. Carefully aspirate the supernatant and resuspend cells in 300 μl 1× flow cytometry buffer.
11. Pass cell suspension through a 35 μm filter into a FACS tube.
12. Perform flow cytometry. Obtain a minimum of 10,000 events per condition.
13. The investigator can analyze data as mean fluorescence (Figure A) or display the data as a histogram (Figure B).

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

BODIPY 480/508-Cholesterol；Filipin III 菲律宾菌素 III；Cholesterol fluorescent probe 胆固醇荧光探针；U 18666A；CAS NO：878557-19-8；

产品信息

产品描述

BODIPY 480/508-Cholesterol（简称：Bdp-Chol），CAS NO：878557-19-8，是一种具生物活性和细胞膜渗透性的胆固醇类似物，在C24位偶联了一个BODIPY荧光基团。HeLa细胞中，Bdp-Chol与胆固醇标记物-脱氢麦角甾醇（Dehydroergosterol, DHE）共定位；BHK细胞中，Bdp-Chol 从质膜运输进入内吞再循环小泡（ERC）。Bdp-Chol最大激发和发射波长分别是480nm和508nm，用于监测细胞内的固醇摄取和细胞器间固醇通量。

产品特征

1）   CAS NO.：878557-19-8

2）   化学名：(T-4)-[(3β)-24-(3,5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl-κN)-24-(3,5-dimethyl-2H-pyrrol-2-ylidene-κN)chol-

5-en-3-olato]difluoro-boron

3）   同义名：BODIPY-Cholesterol; Bdp-Chol; BCh2; TopFluor Cholesterol; Bodipy胆固醇；TopFluor胆固醇；

4）   分子式：C36H51BF2N2O

5）   分子量：576.6

6）   纯度：≥98%

7）   外观：固体

8）   Ex/Em：480/508nm

9）   溶解性：溶于DMSO（1mg/ml）、DMF（1mg/ml）、乙醇（0.5mg/ml）、DMSO:PBS(pH 7.2)(1:1)（0.5mg/ml）

10）  化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DMSO）配置成1mM储存液，根据单次用量分装，充入惰性气体后，≤-20℃避光冻存。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS、无血清培养基等稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：0.1-1μM。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

应用示例（来自文献，仅做参考）

用BODIPY-Cholesterol进行染色，方法如下：BODIPY-Cholesterol溶于DMSO配置1mM储存液，分装到玻璃瓶内，充氮气，置于-80℃冻存。精子悬液用BODIPY-Cholesterol（0.4 µM）标记，混匀后，37℃孵育10min。通过二步法不连续梯度等密度Percoll去除多余的染料。精子调整密度到1×106sperm/mL，孵育2h后进行流式评估。【文献来源：PMID: 31285440 PMCID: PMC6614389】

Figure 3
Representative images of viable (A and B) and non-viable (C) BODIPY-cholesterol labelled boar spermatozoa following 2h in non-capacitating and capacitating conditions. Note that labelling is higher in the apical sperm head than that in the post-equatorial region (indicated with arrows), which is most obvious in sperm that have not undergone capacitation (A). Upon incubation with capacitating conditions, BODIPY-cholesterol fluorescence reduces across the whole sperm head (B), which visually demonstrates the loss of this cholesterol analogue from the plasma membrane during capacitation. In non-viable spermatozoa, as assessed with propidium iodide (PI), BODIPY-cholesterol fluorescence was more intense across the entire sperm head, particularly in the equatorial region (C; indicated with an arrow), demonstrating potential intracellular labelling. Scale bar=10µm.

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产品特征

1）   CAS NO.：878557-19-8

2）   化学名：(T-4)-[(3β)-24-(3,5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl-κN)-24-(3,5-dimethyl-2H-pyrrol-2-ylidene-κN)chol-

5-en-3-olato]difluoro-boron

3）   同义名：BODIPY-Cholesterol; Bdp-Chol; BCh2; TopFluor Cholesterol; Bodipy胆固醇；TopFluor胆固醇；

4）   分子式：C36H51BF2N2O

5）   分子量：576.6

6）   纯度：≥98%

7）   外观：固体

8）   Ex/Em：480/508nm

9）   溶解性：溶于DMSO（1mg/ml）、DMF（1mg/ml）、乙醇（0.5mg/ml）、DMSO:PBS(pH 7.2)(1:1)（0.5mg/ml）

10）  化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DMSO）配置成1mM储存液，根据单次用量分装，充入惰性气体后，≤-20℃避光冻存。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS、无血清培养基等稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：0.1-1μM。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

应用示例（来自文献，仅做参考）

用BODIPY-Cholesterol进行染色，方法如下：BODIPY-Cholesterol溶于DMSO配置1mM储存液，分装到玻璃瓶内，充氮气，置于-80℃冻存。精子悬液用BODIPY-Cholesterol（0.4 µM）标记，混匀后，37℃孵育10min。通过二步法不连续梯度等密度Percoll去除多余的染料。精子调整密度到1×106sperm/mL，孵育2h后进行流式评估。【文献来源：PMID: 31285440 PMCID: PMC6614389】

Figure 3
Representative images of viable (A and B) and non-viable (C) BODIPY-cholesterol labelled boar spermatozoa following 2h in non-capacitating and capacitating conditions. Note that labelling is higher in the apical sperm head than that in the post-equatorial region (indicated with arrows), which is most obvious in sperm that have not undergone capacitation (A). Upon incubation with capacitating conditions, BODIPY-cholesterol fluorescence reduces across the whole sperm head (B), which visually demonstrates the loss of this cholesterol analogue from the plasma membrane during capacitation. In non-viable spermatozoa, as assessed with propidium iodide (PI), BODIPY-cholesterol fluorescence was more intense across the entire sperm head, particularly in the equatorial region (C; indicated with an arrow), demonstrating potential intracellular labelling. Scale bar=10µm.

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描述

BODIPY 493/503 中性脂滴荧光探针

产品标签

BODIPY 493/503；Nile Red 尼罗红；Neutral lipds 中性脂滴；DiI 细胞膜探针；DiR； CAS NO：121207-31-6

产品信息

产品描述

BODIPY 493/503是一种亲脂性荧光探针，定位在极性脂上，能用于标记细胞中性脂内容物，特别定位在活细胞和固定细胞的脂滴上。BODIPY 493/503与落射荧光显微镜、共聚焦荧光显微镜和双质子荧光显微镜，以及流式细胞仪兼容。最大激发和发射波长分别是493/503nm，适用于活细胞和固定细胞标记。

产品特性

1）CAS NO.：121207-31-6

2）化学名：(T-4)-[2-[1-(3,5-dimethyl-2H-pyrrol-2-ylidene-κN)ethyl]-3,5-dimethyl-1H-pyrrolato-κN]difluoro-boron

3）同义名：4,4-Difluoro-1,3,5,7,8-Pentamethyl-4-Bora-3a,4a-Diaza-s-Indacene

4）分子式：C₁₄H₁₇BF₂N₂

5）分子量：262.1

6）纯度：≥98%

7）Ex/Em：493/503nm

8）溶解性：溶于DMSO或无水乙醇

9）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。 

运输：冰袋运输。

储存液的制备和保存

1）将低温保存的10mg BODIPY 493/503（Mw:262.1）置于室温回温至少20min，低速离心后加入一定量的无水乙醇或无水DMSO配制成适量浓度的母液，比如5mM（往10mg 粉末加入7.63ml DMSO，充分溶解即可）。根据单次用量将储存液分装，≤-20℃避光干燥保存。需注意溶液内湿度的逐渐积累会随着时间引起探针聚集，从而务必干燥保存储存液。

2）如果想长期保存，可以用无水乙醇溶解粉末，之后分装到小量，之后使用真空泵来挥发掉乙醇。之后置于≤-20℃避光干燥保存。

探针的标记（仅作参考）

由于BODIPY 493/503属于疏水染料，难以快速的分散进入水溶性溶液中，为了能均匀稳定的标记细胞，可参考以下方法标记活细胞。

应用示例

图1. 胞内中性LDs的定量和观察。A，A498细胞在含BSA（0.2%）或含BSA的油酸过夜培养。之后根据流式分析的操作步骤进行BODIPY染色；B，A498细胞在含BSA（0.2%）或含BSA的油酸过夜培养。之后根据荧光分析的操作步骤进行BODIPY染色；

BODIPY staining for flow cytometry

1. Grow cells under culture conditions relevant for the study. A 35 mm dish/well is sufficient for the cell numbers required in this assay. For our assays, 50,000 A498 cells in 35 mm well were sufficient.
2. Overnight incubation of cells with 30 μM oleic acid can serve as a positive control for increased neutral lipid content, as oleic acid is a potent inducer of triglyceride synthesis and storage. Fatty acid free BSA serves as a control.
3. At the time-point of interest, prepare 2 μM BODIPY staining solution in PBS. The volume of staining solution required for each sample corresponds to the volume of media used for culturing cells.
4. Wash cells with a quick rinse using 3 ml PBS to remove media/serum.
5. Incubate on BODIPY staining solution in the dark for 15 min at 37 °C. Include an unstained control for flow cytometry.

Note: From this point, protect samples from light as much as possible.

5. Wash cells with a quick rinse using 3 ml PBS to remove staining solution.
6. Trypsinize cells to generate a single cell suspension. For the A498 cell line used in this protocol, cells were incubated with Trypsin-EDTA (0.25%) for 5 min at 37 °C.
7. Add 5 ml of PBS and transfer cell suspension to a 15 ml conical tube.
8. Pellet cells at 250 × g, 5 min, 4 °C.
9. Aspirate supernatant, wash the cell pellet with a quick rinse using 3 ml PBS, and pellet cells at 250 × g, 5 min, 4 °C.
10. Carefully aspirate the supernatant and resuspend cells in 300 μl 1× flow cytometry buffer.
11. Pass cell suspension through a 35 μm filter into a FACS tube.
12. Perform flow cytometry. Obtain a minimum of 10,000 events per condition.
13. The investigator can analyze data as mean fluorescence (Figure A) or display the data as a histogram (Figure B).

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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描述

BODIPY 665/676 脂质过氧化荧光探针

产品关键词

BODIPY 665/676；C11 BODIPY 581/591；Lipid Peroxidation Sensor；脂质过氧化感受器；铁死亡（Ferroptosis）；FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针；

产品信息

产品描述

BODIPY 665/676是一种亲脂性荧光探针，高亲和力结合游离脂肪酸和甘油三酯，具有长波长的最大吸收波长（λex=665nm）和最大荧光发射波长（Em=676nm）[1]。与常用的脂质过氧化探针C11 BODIPY 581/591（MX5211-1MG）相似，BODIPY 665/676容易被过氧化自由基氧化，一旦氧化，最大发射波长迁移到605nm（λex =580 nm）[2-4]。BODIPY 665/676最重要的优势在于发射波长是676nm，与绝大部分的荧光素之间无交叉，从而能避免比如自荧光的干扰。BODIPY 665/676具热稳定和高度疏水性特征，从而不会扩散出脂滴。激发器642nm与最大吸收波长665nm接近，由此，在很低的探针浓度下就能得到强荧光信号[5]。

产品特征

1）   同义名：(E,E)-3,5-bis-(4-phenyl-1,3-butadienyl)-4,4-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene

2）   分子量：448.32

3）   外观：蓝色固体

4）激发波长：665nm

5）发射波长：676nm

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，收到货至少12个月有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   整个染色过程中需注意避光。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（活细胞成像分析）

1.染色工作液的准备

1.1储存液的制备：将低温保存的BODIPY 665/676干粉从冰箱取出后置于室温至少20min，低速离心后，加入高质量DMSO配制成适宜浓度的储存液，比如：10mM储存液（即：往5mg BODIPY 665/676加入1.1153ml DMSO，充分溶解后混匀即可），根据单次用量分装，≤-20℃保存，尽量避免反复冻融。

1.2工作液的制备：BODIPY 665/676用于活细胞染色的建议工作浓度一般是1-10 μM，请根据细胞类型和实验目的，参阅文献，再根据实际应用摸索最佳工作浓度。用培养基或生理缓冲液稀释10mM储存液到所需的工作浓度，现配现用！

2.染色步骤

3.图像处理和分析

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   为了测定脂质过氧化（Lipid Peroxidation），MDA-MB 231细胞加入BODIPY 665/676（5 μM）孵育30 min。用PBS清洗细胞两次以去除多余的染料。用VariosKan酶标仪测定荧光值，结果以荧光强度（AU）来展示。【文献来源】：Consoli V, Sorrenti V, Pittalà V, Greish K, D’Amico AG, Romeo G, Intagliata S, Salerno L, Vanella L. Heme Oxygenase Modulation Drives Ferroptosis in TNBC Cells. Int J Mol Sci. 2022 May 20;23(10):5709. doi: 10.3390/ijms23105709. PMID: 35628518; PMCID: PMC9143660.

Fig 1. (A) Fluorescence images of JC-1 staining after 8 h of treatment. (B,C) Evaluation of treatment effects on mitochondrial membrane potential and lipid ROS accumulation (* p < 0.05, ** p < 0.005, vs. CTRL; ## p < 0.005, ### p < 0.0005 vs. erastin). The results are expressed as means ± SEM.

2）   为了评估中性脂滴含量和脂质过氧化，细胞用BODIPY 665/676（1μg/ml）于37℃孵育30 min。孵育结束后，细胞用FACSCalibur流式细胞仪分析。【文献来源：Canonico B, Cesarini E, Salucci S, Luchetti F, Falcieri E, Di Sario G, Palma F, Papa S. Defective Autophagy, Mitochondrial Clearance and Lipophagy in Niemann-Pick Type B Lymphocytes. PLoS One. 2016 Oct 31;11(10):e0165780. doi: 10.1371/journal.pone.0165780. PMID: 27798705; PMCID: PMC5087958.】

Fig 2. Fig 6. Evaluation of intracellular lipid content and lipophagy by BODIPY® 665/676 (BP).

(A) Single confocal optical sections (~0.8 μm thickness) showing overlay of LTG (green) and BP (red) and the relative merge with bright field (BF), from control, nutrient deprivation and rapamycin- treated tWT and tNP cells. Insets show lipid droplets bound to the outer cell surface, probably newly extruded from the cell, or just below the outer cell membrane, most likely about to be exocytosed by the cell. Bars: 10 μm; 5 μm for insets. (B) Pearson’s colocalization coefficient (PCC) for LTG and BP in control and pathologic cells for control, nutrient deprivation and rapamycin administration. Pearson’s coefficients were derived from three completely independent experiments with >10 fields per experiment contributing to the cumulative result. Each value is expressed as PCC ± SD; **P < 0.01 vs respective control. The difference between cell lines was determined to be significant by two-way ANOVA (***P < 0.001). Two-way ANOVA with Bonferroni post test revealed a P value < 0.01 (++P < 0.01) between tWT and tNP basal condition and rapamycin-treated cells. (C) Statistical histogram of MFI variation of intracellular BP in tWT and tNP cells for each experimental condition. Mean values were converted to arbitrary units (A.U.) setting control of wild-type cells as 100. Each value is expressed as a relative mean ± SD (Results from n ≥ 3 independent experiments); **P < 0.01 vs respective control.

3）为了测定脂质氧化（lipid Peroxides），细胞用总内皮细胞处理，之后用BODIPY 665/676（2μg/ml）于37℃孵育30 min。之后上流式，用FlowJo 10.0.0软件进行数据分析。【文献来源：Rodrigues, J., Wang, YF., Singh, A. et al. Estrogen enforces the integrity of blood vessels in the bone during pregnancy and menopause. Nat Cardiovasc Res 1, 918–932 (2022). https://doi.org/10.1038/s44161-022-00139-0】

参考文献

[1] Canonico B, Cesarini E, Salucci S, Luchetti F, Falcieri E, Di Sario G, et al. (2016) Defective Autophagy, Mitochondrial Clearance and Lipophagy in Niemann-Pick Type B Lymphocytes. PLoS ONE 11(10): e0165780.

[2] Meyer W, Schmidt J, Busche R, Jacob R, Naim HY. Demonstration of lipids in plastic resin-embedded sections of skin material. J Microsc. 2009; 233: 5–9. pmid:19196406

[3] Raudsepp P, Brüggemann DA, Andersen ML. Detection of radicals in single droplets of oil-in-water emulsions with the lipophilic fluorescent probe BODIPY(665/676) and confocal laser scanning microscopy. Free Radic Biol Med. 2014 May;70:233-40. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2014.02.026. Epub 2014 Mar 12. PMID: 24631488.

[4] Raudsepp P, Brüggemann DA, Andersen ML. Evidence for transfer of radicals between oil-in-water emulsion droplets as detected by the probe (E,E)-3,5-bis(4-phenyl-1,3-butadienyl)-4,4-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene, BODIPY(665/676.). J Agric Food Chem. 2014 Dec 24;62(51):12428-35. doi: 10.1021/jf504404a. Epub 2014 Dec 12. PMID: 25440428.

[5] Li, Peilong, “Application of Flow Cytometry as Novel Technology in Studying Lipid Oxidation in Oil-in-Water Emulsions” (2019). Masters Theses. 843.

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