产品名称 | 规格 | ||
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 1kit (30~50 gels) |
产品描述
金畔生物的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(SDS-PAGE Gel Preparation Kit)提供了SDS-PAGE凝胶配制所需的各种试剂,用户只需准备制胶器具和蒸馏水,即可配制PAGE胶(聚丙烯酰胺凝胶)。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,还可用于配制Native PAGE凝胶。
本试剂盒约能配制30-50块常规大小的PAGE胶,具体配制的量需根据器具大小来决定。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 组分规格 | 保存方法 |
MP2019-A | 30% Acr-Bis (29:1) | 100ml | 4℃避光 |
MP2019-B | 1.5M Tris-HCl, pH8.8 | 100ml | 室温 |
MP2019-C | 10% SDS | 5ml | 室温 |
MP2019-D | Ammonium persulfate (APS) | 0.5g | 室温 |
MP2019-E | TEMED | 2×1ml | 4℃避光 |
MP2019-F | 1M Tris-HCl, pH6.8 | 15ml | 室温 |
保存与运输方法
保存:4℃~室温避光保存,各组分保存详见瓶子标签。1年稳定。
运输:室温运输。
注意事项
1) 过硫酸铵(Ammonium persulfate, APS)配制成10%溶液后,应分装成小份-20℃保存,通常6个月有效。同时尽量减少室温存放时间,防止失效。
2) TEMED容易挥发,使用后请务必拧紧瓶盖。另外,凝胶凝聚的速度与温度和光照关系密切,可适当调节TEMED的用量,控制不同室内环境下凝胶凝聚的速度。
3) TEMED易燃,具腐蚀性,请小心操作,并且注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
4) 配制PAGE胶的过程中,如果室温较低,可以置于37℃加速凝固。
5) 30% Acr-Bis (29:1)具轻微神经毒性,请小心操作,并且注意有效防护以避免直接接触人体。
6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
1) 配制10% APS溶液:直接往0.5g Ammonium persulfate (APS)中加入5ml蒸馏水,充分溶解,分装成小份保存在-20℃,通常6个月内有效。
2) 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围(表1)。
表1 不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围 |
|
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% | 50-150 kD |
8% | 30-90 kD |
10% | 20-80 kD |
12% | 12-60 kD |
15% | 10-40 kD |
15% | 10-40 kD |
3) 根据表2配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶。若配制非变性胶,参考下述配方不加10% SDS即可。
表2 配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶 |
|||||||
分离胶浓度 | 凝胶体积(ml) | 所需各组分体积(单位:ml) | |||||
蒸馏水 | 30% Acr-Bis | 1.5M Tris, pH8.8 | 10% SDS | 10% APS | TEMED | ||
6% | 5 | 2.6 | 1.0 | 1.3 | 0.05 | 0.05 | 0.004 |
10 | 5.3 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 0.008 | |
15 | 7.9 | 3.0 | 3.8 | 0.15 | 0.15 | 0.012 | |
20 | 10.6 | 4.0 | 5.0 | 0.2 | 0.2 | 0.016 | |
30 | 15.9 | 6.0 | 7.5 | 0.3 | 0.3 | 0.024 | |
50 | 26.5 | 10.0 | 12.5 | 0.5 | 0.5 | 0.04 | |
8% | 5 | 2.3 | 1.3 | 1.3 | 0.05 | 0.05 | 0.003 |
10 | 4.6 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 0.006 | |
15 | 6.9 | 4.0 | 3.8 | 0.15 | 0.15 | 0.009 | |
20 | 9.3 | 5.3 | 5.0 | 0.2 | 0.2 | 0.012 | |
30 | 13.9 | 8.0 | 7.5 | 0.3 | 0.3 | 0.018 | |
50 | 23.2 | 13.3 | 12.5 | 0.5 | 0.5 | 0.03 | |
10% | 5 | 1.9 | 1.7 | 1.3 | 0.05 | 0.05 | 0.002 |
10 | 4.0 | 3.3 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 0.004 | |
15 | 5.9 | 5.0 | 3.8 | 0.15 | 0.15 | 0.006 | |
20 | 7.9 | 6.7 | 5.0 | 0.2 | 0.2 | 0.008 | |
30 | 11.9 | 10.0 | 7.5 | 0.3 | 0.3 | 0.012 | |
50 | 19.8 | 16.7 | 12.5 | 0.5 | 0.5 | 0.02 | |
12% | 5 | 1.6 | 2.0 | 1.3 | 0.05 | 0.05 | 0.002 |
10 | 3.3 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 0.004 | |
15 | 4.9 | 6.0 | 3.8 | 0.15 | 0.15 | 0.006 | |
20 | 6.6 | 8.0 | 5.0 | 0.2 | 0.2 | 0.008 | |
30 | 9.9 | 12.0 | 7.5 | 0.3 | 0.3 | 0.012 | |
50 | 16.5 | 20.0 | 12.5 | 0.5 | 0.5 | 0.02 | |
15% | 5 | 1.1 | 2.5 | 1.3 | 0.05 | 0.05 | 0.002 |
10 | 2.3 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 0.004 | |
15 | 3.4 | 7.5 | 3.8 | 0.15 | 0.15 | 0.006 | |
20 | 4.6 | 10.0 | 5.0 | 0.2 | 0.2 | 0.008 | |
30 | 6.9 | 15.0 | 7.5 | 0.3 | 0.3 | 0.012 | |
50 | 11.5 | 25.0 | 12.5 | 0.5 | 0.5 | 0.02 |
4) 根据表3配制5% SDS-PAGE浓缩胶(也称为上层胶)。
表3 配制5% SDS-PAGE浓缩胶 |
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分离胶浓度 | 凝胶体积(ml) | 所需各组分体积(单位:ml) | |||||
蒸馏水 | 30% Acr-Bis | 1M Tris, pH6.8 | 10% SDS | 10% APS | TEMED | ||
5% | 2 | 1.4 | 0.33 | 0.25 | 0.02 | 0.02 | 0.002 |
3 | 2.1 | 0.5 | 0.38 | 0.03 | 0.03 | 0.003 | |
4 | 2.7 | 0.67 | 0.5 | 0.04 | 0.04 | 0.004 | |
6 | 4.1 | 1.0 | 0.75 | 0.06 | 0.06 | 0.006 | |
8 | 5.5 | 1.3 | 1.0 | 0.08 | 0.08 | 0.008 | |
10 | 6.8 | 1.7 | 1.25 | 0.1 | 0.1 | 0.01 |
5) 电泳:静置,等凝胶聚合后,小心拔出梳子,避免破坏加样孔。加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液(含15-20%
甲醇)。将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合,煮沸5-10min后加入样品孔。将电泳槽置于4℃或冰水浴中电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
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