土壤DNA提取试剂盒

ISOIL for Beads Beating

◆原理

　　本品为土壤 DNA 提取试剂盒。利用珠状物的强物理性粉碎及试剂的溶菌作用，从具有坚固细胞壁的微生物中提取DNA。因此，可用于 PCR-DGGE 等分析上土壤微生物的群集构造，利用定量土壤 DNA 推算土壤生物量。

　　土壤等环境中存在各种各样的微生物。但其中 99% 以上为不能培养，或极难培养的微生物。依赖培养法分析土壤微生物具有一定的局限性。因此，像这类坏境样品一般采用不经培养，直接提取 DNA 进行分析的手法。近几年普遍盛行：利用土壤和污泥等环境样品直接提取出的 DNA，进行基因复制及 PCR-DGGE 等分析微生物群集构造。

　　海外制造商正在销售的集中土壤 DNA 提取试剂盒，都较难从黑土（占日本的国土的20%，耕地的50%）等火山灰土壤中提取 DNA，无法与日本的土壤相融合。本试剂盒适用于提取日本土壤 DNA，可短时间、高产率提取出高纯度 DNA。

       本品采用在界面活性剂存在下加热提取的方法作为 DNA 提取法。利用 Beads Beating（珠状粉碎），采用物理性菌体粉碎重组法。利用 Beads Beating 物理性截断，可从具有坚固细胞壁的微生物中，提取出反映实际土壤微生群集构造的土壤 DNA。因此，本品提取出的土壤 DNA，可用于 PCR-DGGE 等分析土壤微生物的群集构造和进行土壤诊断，利用定量土壤 DNA 推算土壤生物量等。DNA 提取时间大约需要60分钟。

       另外，使用本品时，请不要使用其他用途的 Beads Beating（珠状粉碎机）。

◆特征

　● 可从火山灰土壤中提取 DNA

　● 可有效提取高纯度 DNA

　● 最短40分钟，即可提取出 DNA

　● 容易按比例增加

　● 可高效提取 DNA

　● 适用于 PCR-DGGE 法及土壤 DNA 定量

◆内容

● ISOL

从发根提取 DNA 试剂盒

ISOHAIR EASY

　　本试剂可简便地从发根提取 DNA。提取到的 DNA 溶液无需纯化，可直接用作核酸扩增法的模板。

◆特点

　　从人的发根提取 DNA，操作简便，仅需30分钟左右。

◆使用实例

　　准备实验材料（使用乙醇清洗毛发）

以 ISOHAIR EASY 为例

　　1. 取３根毛发（带发根），使用剪刀剪断发根约 1.5 cm 处。

　　　 ※确认取得的毛发带有发根（右图）。^*1

　　2. 往 1.5 mL 离心管注入 300 μL乙醇，再用镊子^*2放入３条发根。

　　3. 倒转混合几次后，简单清洗一下。取出发根，置于滤纸或无尘纸上，挥发乙醇。

提取核酸

　　1. 将 ISOHAIR EASY 置于室温，使其溶解，倒转混合均匀后，降速，并静置于冰块上。

　　2. 往 0.2 mL 离心管注入 50 μL ISOHAIR EASY，再放入３条发根。

　　3. 孵化

　　　55°C、孵化 20 分钟^*3

　　　94°C、孵化 10 分钟

　　　置于冰块上迅速冷却至４°C

　　4. 使用移液管混合后，将上清液移至 1.5 mL 离心管（尽量不取出不溶物），用作 DNA 提取液。^*4

　　　 ※使用本产品可从3根毛发提取 1～6.5 ng/μL 的 DNA 。^*5

　　*1　无法肉眼观察到发根的材料或自然脱落的毛发可能无法提取到足够的核酸。

　　*2　为防止污染，每次使用镊子前请使用乙醇清洗。

　　*3　使用 ISOHAIR EASY 孵化毛发时，无法用肉眼观察到变化，实际上，已有 DNA 析出。

　　*4　若不溶物浮于上方，难以取出上清液，请将全部溶液移至 1.5 mL 离心管，进行离心（12,000 rpm× 2 min）后，取出上清液。

              0.2 mL 离心管的耐离心力较低，不建议使用。

　　*5　根据个人发质，毛发提取 DNA 量有所不同。即使是同一个人的毛发，每根毛发的提取 DNA 量也不同。

◆Data 1：实时 PCR 法的利用

　　使用 ISOHAIR EASY 从 A、B、C ３人的各３根毛发配制成２μLDNA提取液，将其作为模板，使用GeneAce SYBR^® qPCR Mix α No ROX，进行实时PCR，检测出Gap基因(GAPDH)。（装置：LightCyclerR 96）

反应液组成：

反应条件：

•溶解曲线分析

　　＜结果＞

溶解曲线

标准曲线

使用Human genomic DNA（Clontech公司），以控制标准曲线。

◆Data 2：LAMP 法的利用

　　使用 ISOHAIR EASY 及 A、B ２人的各３根毛发配制成４μlDNA提取液，将其作为模板，使用 Isothermal Master Mix，利用 LAMP 引物扩增目标域（IL28B基因），并对其扩增产物进行会合曲线分析。（装置：Genie^® II）

　　＜结果＞

溶解曲线

Annealing Derivative

（注）LAMP法的原理是使用4种引物及链置换DNA 合成酶，在一定温度下(65°C左右)，使其发生反应，从而扩增基因。

◆备注

• 本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗或其他用途。

◆产品列表

◆相关产品

• 毛发・爪提取人DNA试剂盒　ISOHAIR

• 教育用生物实验　ISOHAIR Jr.

Q：　　ISOHAIR（Code No. 315-03403）及 ISOHAIR EASY（Code No. 319-07781）的区别是什么？

A：　　「ISOHAIR」与「ISOHAIR EASY」的区别如下表所示。ISOHAIR EASY 可从发根简单地提取 DNA，必须使用有发根的样品。