标签归档：探针

ABI 4351372 TaqMan 基因表达Assay (FAM)

发表于由

Applied Biosystems Custom TaqMan 基因表达Assay是我们用于定量实时荧光定量 PCR 的预设计 TaqMan Assay的个性化定制版本。Custom TaqMan 基因表达Assay包括一对未标记的 PCR 引物和 5’ 端染色标记 (FAM) 的 TaqMan 探针，以及 3’ 端小沟结合物 (MGB) 和非荧光淬灭剂 (NFQ)。

特点包括：
?易于使用—仅添加 cDNA 和预混液运行 qPCR—无需熔点曲线
? 特异性—TaqMan 分析使用专利含 MGB 的探针，该探针比非 MGB 探针少 15 个碱基，提高了检测的特异性。
?灵敏性—TaqMan 检测是测量低表达水平或低丰度目标的理想方法
? 准确性—识别小倍数变化病具有高准确性定量
?金标准 TaqMan qPCR 化学—TaqMan 检测采用 Thermo Fisher Scientific 的生物信息学分析设计管线以确保高特异性和最小的交叉反应性，即使是具有高序列同源性的基因变体
? 使用您设计和订购的每种 Custom TaqMan 基因表达Assay的序列

大致运输时间
订购： 北美 4–6 天，欧洲 6–10 天

TaqMan 基因表达Assay是实时荧光定量 PCR 基因表达研究中的金标准，建立在超过 20 年经验的基础上。每种Assay均包括目标引物和序列特异性探针（已经过优化从而获得较佳的功能表现）。无需额外设计、优化或熔解曲线分析。可提供多种形式和种属，不断增加新的Assay设计以满足您的研究需求。TaqMan Assay已被超过 40,000 篇出版物引用，并且获得超过 350 项专利的支持。

推荐的预混液：TaqMan Fast Advanced 预混液

也见：Custom Plus TaqMan RNA Assay，它使用 TaqMan 分析设计管线的全部生物信息学能力进行设计。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
规格
适用于（设备）
7500 系统、7500 Fast 系统、7900HT 系统、StepOne?、StepOnePlus?、ViiA? 7 系统、QuantStudio? 3、QuantStudio? 5、QuantStudio? 6 Flex、QuantStudio? 7 Flex、QuantStudio 6 Pro、QuantStudio 7 Pro、QuantStudio? 12k Flex
环保功能
绿色可持续包装
产品线
TaqMan?
产品类型
Custom TaqMan 基因表达
运输条件
室温
浓度
20X
反应次数
750 Reactions, made to order
内容与储存
1含 20X（S 和 M 规格）或 60X（L 规格）预配制Assay（1 探针和 2 引物）混合物的试管。

在 -15 至 -25°C 下储存。

Cal-520 Potassium Salt 钙离子荧光探针

发表于由

描述

Cal-520 Potassium Salt

钙离子荧光探针

 

产品信息

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）
Cal-520 Potassium Salt钙离子荧光探针 MX4573-500UG 10×50μg

5093

产品描述

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。

新一代钙离子荧光探针：Cal-520，Cal-590和Cal-630是最强大且均一的细胞内钙流（Calcium mobilization）测定用荧光探针，与传统的钙离子探针（比如：Fluo-3 AM、Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有明显改善的信噪比和细胞内滞留性。

Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM具有细胞膜渗透性，能够预加载进入细胞。一旦进入细胞候，亲脂阻断基团AM被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内部。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。当细胞被激动剂刺激后，受体发出细胞内钙释放的信号，从而使得Cal-520，Cal-590和Cal-630的荧光增加。Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM的高灵敏度以及>100倍的荧光增强使其成为胞内钙离子测定的理想探针。高信噪比和更加的胞内滞留性使其成为评估GPCR和钙离子通道靶标以及筛选对应激动剂和拮抗剂的优秀工具。

Cal-520，Cal-590和Cal-630基本定位在细胞质，不像Rhod-2主要定位在线粒体。Cal-590和Cal-630的长激发/发射波长使其为完美的钙离子探针，能够与绿色荧光蛋白（GFP）标记细胞兼容多色检测。另外，Cal-520，Cal-590和Cal-630也与绝大多数现存的荧光仪器兼容。Cal-520在488nm处被良好激发，用FITC滤片检测；Cal-590经优化在555nm处被良好激发，用TRITC/Cy3滤片检测；Cal-630经优化在594nm处被良好激发，用Texas Red滤片检测；

Cal-520 Potassium Salt是钾盐形式的Cal-520，不具有细胞膜渗透性，溶于水。可通过微注射、膜片电极、划痕标记等方式加载进入细胞，从而检测胞内钙水平。

产品特征

同义名：Cal-520钾盐 分子量：921.08
解离常数：Kd=320nM 溶解性：H2O
Ex/Em：493/515

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录ICal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称 产品编号 激发波长（nm） 发射波长（nm） 解离常数Kd（nM）
Cal-520 MX4537-50UG 492 514 320
Cal-590 MX4535-50UG 558 584 561
Cal-630 MX4536-50UG 607 623 792

相关产品

货号 名称 规格
MX4504-50UG Fluo-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4505-50UG Fluo-8, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4507-50UG Rhod-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4508-50UG Rhod-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4537-50UG Cal-520 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针 50μg
MX4535-50UG Cal-590 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针 50μg
MX4536-50UG Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针 50μg
MX4573-500UG Cal-520 Potassium Salt钙离子荧光探针 10×50μg
MX4574-250UG Cal-590 Potassium Salt钙离子荧光探针 5×50μg
MX4575-250UG Cal-630 Potassium Salt钙离子荧光探针 5×50μg

 

36309-88-3 [Ru(dpp)3]Cl2 (Luminescent oxygen sensor) 氧指示探针

发表于由

[Ru(dpp)3]Cl2；Ru(ddp)；Oxygen sensor；氧指示探针；SOSG 单线态氧荧光探针；CAS: 36309-88-3；

[Ru(dpp)3]Cl2（中文全名：三(4,7-二苯基-1,10-菲咯啉)二氯化钌(II)，英文全名：(Tris(4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline)ruthenium(II) dichloride），是一款发光探针（最大吸收波长absorption λmax：455 nm，发光最大吸收波长 luminescence λmax: 613 nm），普遍用于氧（Oxygen）的检测和定量[1]。由于动态淬灭的作用，分子氧引起[Ru(dpp)3]Cl2的光显著降低。因此，通过测定光强度或衰减时间来检测分子氧[2]。[Ru(dpp)3]Cl2还被用于优化光学氧传感器，用于测定组织和皮肤瘤的氧流量，以及用于氧成像分析[3-6]。

产品特性

1）CAS NO.：36309-88-3

2）化学名：(OC-6-11)-tris(4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline-κN1,κN10)-ruthenium(2+), dichloride

3）同义名：Tris(4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline)ruthenium(II) dichloride 三(4,7-二苯基-1,10-菲咯啉)二氯化钌(II)；Ru(ddp)；

4）分子式：C72H48Cl2N6Ru

5）分子量：1169.17

6）外观：固体

7）溶解性：溶于DMSO（25mg/ml）、乙醇（25mg/ml）、DMF（25mg/ml）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：2-8ºC避光干燥保存，亦可置于-20℃避光干燥长期保存，至少1年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1) 本品对空气敏感，粉末内置惰性气体保护。建议配制的储存液也保存于惰性气体下。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

应用示例（仅作参考）

①溶液内的氧生成：为了评估PCN外壳对PB核催化效率的影响，取3组具不同PCN外壳厚度的PB@PCN，加入24孔板[孔内含3% H2O2和[Ru(dpp)3]Cl2（10mg/L，10μL）]，37℃孵育15min。另外，PBS, PB (20 mg/L)和PB@PCN 3 mL + 808 nm辐射处理作为对照组。用小动物荧光成像系统（IVIS, λex = 488 nm, λem = 620 nm）来记录荧光。

②细胞内的氧生成：CT26细胞接种在24孔板，37℃培养24h，之后每孔加入Ru(dpp)3]Cl2（10mg/L，10μL）。12h之后，PBS清洗，然后加入200μL 1640培养基。之后，PBS, PB (20 mg/L)或PB@PCN（20mg/L）加入孔内，继续孵育24h。PBS清洗，用小动物荧光成像系统（λex = 488 nm, λem = 620 nm）记录荧光。

Fig . d Detection of PB@PCN-catalyzed O2 generation with different concentrations of H2O2 (0 (1), 1.5 w% (2), 3 w% (3), and 6 w% (4)) by ([Ru(dpp)3]Cl2).

①细胞内的氧生成：4T1细胞（5 × 103/孔）接种在96孔板（(1% O2, 5% CO2 balanced with N2），缺氧培养24h。细胞内加入[Ru(dpp)3]Cl2（5 × 10−6 M）处理4h，然后加入nano-Pt/VP@MLipo (200 × 10−9 M VP, 2.86 µg/mL Pt)处理4h。之后用Ex 488 nm, Em 610 nm观察细胞荧光，共聚焦荧光显微镜（CLSM）拍照。

Fig C) Nano‐Pt increased the intracellular oxygenation as examined using the oxygen indicator [Ru(dpp)3]Cl2. The red fluorescence of the dye was quenched in the presence of oxygen.

相关产品

名称 规格
1,3-diphenylisobenzofuran (DPBF) 1,3-二苯基异苯并呋喃 1g
DAF-FM DA (5mM in DMSO) 一氧化氮（NO）荧光探针 100T
[Ru(dpp)3]Cl2 (Luminescent oxygen sensor) 氧指示探针 25mg
Singlet Oxygen Sensor Green 单线态氧荧光探针 100μg

 

Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于由

Rhod-4, AM 红色钙离子探针; Rhod-2 AM钙离子荧光探针；Fluo-8； Fluo-4； HTS Screen Assay高通量筛选；

Rhod-2虽然是最受欢迎的红色荧光Ca2+荧光探针，但Rhod-2的线粒体定位和细胞中高基底Ca2+信号使其在某些细胞应用中严重受限制。另外，Rhod-2在488nm处很不理想的激发波长使其在某些只有488nm激发光源的仪器比如FLIPRTM上信号很弱。Rhod-4正是根据这些缺陷而改进的，具有以下特征：

1） Rhod-4的最大激发和发射波长是530nm和555nm。虽Rhod-4最大激发波长是530nm，但在488nm处

激发下的信号也相当强（见Fig 1）。除了能在514nm，532nm和546nm的长波长激发之外，Rhod-4用氩离子激发器在488nm激发下也能得到理想的荧光信号。Rhod-4随着增加的Ca2+浓度荧光信号而增强（555nm发射波长），一旦与Ca2+结合荧光约增强＞200倍。由于许多细胞受刺激后的Ca2+浓度提高通常是5~10倍，因此，Rhod-4是一款优秀的检测此范围内Ca2+浓度变化的高灵敏探针。

Fig 1, Rhod-4钠盐在含氯化钙体系内的激发光谱特征。

2） 一旦受激动剂刺激后，Rhod-4在细胞内的荧光明显强于Rhod-2（信噪比）。更重要的是，Rhod-4主要定位在细胞胞浆内，不像Rhod-2主要定位在线粒体。另外，Rhod-4具更低的温度依赖性的细胞加载特性，不管室温还是37℃产生相似的结果。这一特征使Rhod-4比Rhod-2在HTS应用中更有优势。

Rhod-4, AM是Rhod-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-4，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

基本特性

1） 同义名：Rhod-4, Acetoxymethyl Ester

2） 分子量：1015.96

3） 外观：红色固体

4） 最大激发/发射波长：530/555 nm

5） Kd（Ca2+结合）：525NM

6） 溶解性：溶于DMSO（2~5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Rhod-4, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Rhod-4, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Rhod-4, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Rhod-4, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Rhod-4, AM中加入12.3µl 无水DMSO）。准备Rhod-4, AM工作液之前，有时需要往Rhod-4, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Rhod-4, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Rhod-4, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Rhod-4, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液。

【注①】：Rhod-4,AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Rhod-4, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4） 将准备好的Rhod-4, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育30min-1h。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Rhod-4, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=530/555 nm来进行检测。

相关产品

名称 规格
Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
Pluronic®F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
Probenecid丙磺舒 1g
Probenecid Sodium, Water Soluble丙磺舒钠（水溶性） 2×77mg
1× HHBS (Hanks’ Balanced Salt Solution with 20mM HEPES), pH 7.2-7.4 500ml
Fura-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Fluo-3, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Fluo-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Fluo-8 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Indo-1, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Rhod-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Rhod-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯 50μg

 

Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于由

Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针；Fluo-2, AM；Fluo-2 Medium Affinity,Acetoxymethyl Ester；Fluo-3；Fluo-4；HTS Screen Assay 高通量筛选；

订购信息：

产品名称 规格
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 50μg
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 5×50μg

产品描述

Fluo-8，是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，其荧光强度比Fluo-4强两倍，比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+亲和力，几乎接近Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。

Fluo-8不仅维持Fluo-3，Fluo-4便捷的光谱检测特性，与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm，最大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca2+响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性，在室温或37℃孵育皆染色良好，不像Fluo-3，Fluo-4严格要求在37℃孵育，此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛，与许多细胞系和靶向样本兼容，不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。

Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以50μg小包装的冻干粉形式供货，用于细胞内Ca2+水平检测时，常用浓度为1-5μM。

基本特性：

1） 同义名：Fluo-8, Acetoxymethyl Ester;Fluo-2, AM; Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester;

2） 化学名：Bis(acetoxymethyl) 2,2′-((4-(6-(acetoxymethoxy)-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-2-(2-(bis(2-acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)phenoxy)ethoxy)phenyl)azanediyl)diacetate

3） 分子式：C50H50N2O23

4） 分子量：1046.93

5） 最大激发/发射波长：490/514 nm（Ca2+结合）

6） 溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

7） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

运输：室温运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）Fluo-8, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4）Fluo-8, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

A、试剂准备

1. 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2. HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1. 用无水DMSO溶解Fluo-8, AM配制成1-5mM的储存液，或将已配好的Fluo-8, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-8,AM中加入11.9µl无水DMSO）。

2. 用HHBS或其他生理缓冲液将Fluo-8, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液，提前加入适量的20% Pluronic F-127溶液，使其终浓度为0.02%。

【注①】：Fluo-8, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fluo-8, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注③】：Pluronic F-127可以防止Fluo-8, AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

3.【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4. 将准备好的Fluo-8, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃或者室温孵育20-60min。

【注①】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注②】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5. 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液）替换，以去除多余探针。

6. 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=490/520 nm来进行检测。

【注①】：Fluo-8, AM进入胞内后，经酯酶降解形成Fluo-8，并不是以共价结合的形式滞留在细胞质内。因此不可对加载染料的活细胞进行固定处理，再进行Ca2+水平检测。

CAS：288574-78-7； Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针

发表于由

Zinpyr-1；TSQ；Zinquin；锌离子荧光探针；TPEN 金属离子螯合剂；CAS：288574-78-7；

产品信息

产品名称

 产品编号 CAS NO. 规格 价格（元）

Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针

 MX4550-1MG 288574-78-7 1mg

742
Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针 MX4550-5MG 288574-78-7 5mg

2100

产品描述

Zinpyr-1（ZP-1）是一种具细胞膜渗透性的荧光探针，选择性检测锌离子（Zn2+）（Kd= 0.7 ± 0.1 nM）。一旦与金属离子复合，诱发荧光信号产生。活细胞内，Zinpyr-1主要对高尔基或高尔基关联的囊泡染色。随着锌离子浓度增高，Zinpyr-1的激发波长从515nm迁移到507nm，发射波长范围在513-558nm。还能用作PET传感器。

产品特性

1） CAS NO.：288574-78-7

2） 化学名：4′,5′-bis[[bis(2-pyridinylmethyl)amino]methyl]-2′,7′-dichloro-3′,6′-dihydroxy-spiro[isobenzofuran -1(3H),9′-[9H]xanthen]-3-one

3） 同义名：ZP-1; 4′,5′-Bis[bis(2-pyridylmethyl)aminomethyl]-2′,7′-dichlorofluorescein;

4） 分子式：C46H36Cl2N6O5

5） 分子量：823.72

6） Ex/Em：515-507nm/513-558nm

7） 纯度：≥95%

8） 外观：固体

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）由于产品量少，收到本品后需直接在瓶内溶解配制母液。

2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（来自文献，仅作参考）

1）文献：Penninger P, Riedelberger M, Tsymala I, Arzani H, Jenull S, Kuchler K. Quantification of zinc intoxication of Candida glabrata after phagocytosis by primary macrophages. STAR Protoc. 2021;2(1):100352. Published 2021 Feb 20. doi:10.1016/j.xpro.2021.100352

实验目的：研究巨噬细胞吞噬引起Zn2+介导的真菌致病菌格拉布勒他念珠菌（C. glabrata）清除能力。用Zn2+特异性探针- Zinpyr-1和碘化丙啶（PI）双重检测Zn2+水平和细胞活力的变化。

使用方法：Zinpyr-1溶于DMSO配制成10mM储存液，按照10μl/管分装置于-20℃避光冻存，避免反复冻融。于实验前，将储存液用PBS稀释到10μM工作液。工作液现配现用。将含探针的染色工作液加入巨噬细胞（感染念珠菌）于37℃孵育30min。流式细胞仪分析染色结果，Zinpyr-1的激发和发射波长约为488nm和525nm。

Fig. Visualization of viable Candida glabrata inside phagolysosomes

(A) Gating strategy for analysis of C. glabrata by flow cytometry. The PI-Zinpyr panel compares untreated (black) with heat-stressed (red) C. glabrata.

(B) Percentage of dead C. glabrata, comparing untreated and heat-stressed fungal cells before interaction with BMDMs.

(C) Live and dead C. glabrata populations are analyzed for their zinc-dependent signal intensity (MdFI) equaling the intracellular amount of labile zinc in fungal cells. MdFI, median fluorescence intensity.

2）文献：Scott A. Sinclair et al. The use of the zinc-fluorophore, Zinpyr-1, in the study of zinc homeostasis in Arabidopsis roots. New Phytologist. Volume174, Issue1 April 2007 Pages 39-45

实验目的：使用锌离子荧光探针- Zinpyr-1来检测拟南芥根部Zn2+的分布。

使用方法：Zinpyr-1溶于DMSO配制成1mM储存液，置于-20℃避光冻存，避免反复冻融。之后用0.9%生理盐水稀释到工作浓度。7-8天的幼苗用含10mM EDTA的去离子水清洗3遍，之后浸入含5-20μM Zinpyr-1的工作液内，于室温避光孵育3h。之后用去离子水清洗，再浸入含75μM PI的溶液降细胞壁染红，再清洗。样本用0.9%生理盐水封片后，用共聚焦显微镜观察，用488nm激发器激发，分别用FITC和Texas red 滤片来观察。

Fig. Confocal laser-scanning microscope (CLSM) images of Arabidopsis roots of (a,b) wild-type, (c,d) hma2, hma4 and (e,f) hma4 seedlings exposed to 20 µm Zinpyr-1 for 3 h. The boxed regions in (a,c,e) illustrate the regions used to quantify average fluorescence intensity. x, xylem; p, pericycle; e, endodermis; c, cortex; ep, epidermis. Bars, 50 µm.

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Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein (PBSF) 过氧化氢探针 SOSG 单线态氧荧光探针；CAS: 728912-45-6； 

发表于由

Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein 五氟苯磺酰基荧光素; PBSF; Selective H2O2 probe; A selective H2O2 Sensor; ROSGreenTM H2O2 Probe; SOSG 单线态氧荧光探针；CAS: 728912-45-6； 

五氟苯磺酰基荧光素（Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein, PBSF），是由Maeda和合作者设计且开发的一款过氧化氢选择性探针（Selective H2O2 probe），不同于绝大多数的活性氧检测探针，PBSF以一种非氧化的机制发挥功能。一旦与过氧化氢（H2O2）发生反应，PBSF上的磺酸基连接被水解，释放出荧光素，从而荧光信号显著增强（作用机理见Fig 1）。PBSF选择性检测H2O2，不会识别羟基自由基（OH•）、叔丁基过氧化氢（TBHP）、超氧阴离子自由基（O2–）、单线态氧（1O2）和硝酸盐[1-2]。PBSF已用于细胞[1]、细菌[3]和植物[4]的过氧化氢检测。

产品特性

化学名：pentafluorobenzenesulfonic acid, 6’-hydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9’-[9H]xanthen]-3’-yl ester
CAS NO.：728912-45-6 分子式：C26H11F5O7S
分子量：562.4 外观：固体
纯度：≥98% 溶解性：溶于DMSO（30mg/ml），乙醇（20mg/ml）
激发波长：485 ±20 nm 发射波长：530 ±25 nm
化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（仅作参考）

1）文献来源：Huang Y, Liu Y, Shah S, Kim D, Simon-Soro A, Ito T, Hajfathalian M, Li Y, Hsu JC, Nieves LM, Alawi F, Naha PC, Cormode DP, Koo H. Precision targeting of bacterial pathogen via bi-functional nanozyme activated by biofilm microenvironment. Biomaterials. 2021 Jan;268:120581. PMID: 33302119;

实验目的：检测细菌的过氧化氢生成。

实验方法：1ml对数生长期的变形链球菌（S.mutans）或口腔链球菌（S. oralis）用PBSF（5 μM），同时用SYTO 60（10μM）于37℃孵育4h。之后吸取20μl 细菌悬浮液置于玻璃载玻片上，共聚焦显微镜观察和定量。H2O2用488/505nm检测，细菌用652/678nm观察。基于PBSF的荧光强度用ImageJ来定量H2O2生成。

2）文献来源：Do THT, Choi H, Palmgren M, et al. Arabidopsis ABCG28 is required for the apical accumulation of reactive oxygen species in growing pollen tubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2019 Jun;116(25):1254

实验目的：检测花粉管的过氧化氢生成。

实验方法：四分体花粉粒置于含萌发培养基的玻片上萌发1-3h，之后用含10μM 五氟苯磺酰基荧光素（PFBSF）的萌发培养基染色10min。

Fig atabcg28 pollen tube has dispersed pattern of hydrogen peroxide. (F and G) Hydrogen peroxide distribution in germinated wild-type (F) and atabcg28 (G) pollen stained with PFBSF. Note that the green fluorescent signal accumulated in the tip of wild-type pollen but was distributed throughout atabcg28 pollen.

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Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein (PBSF) 过氧化氢探针

发表于由

Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein 五氟苯磺酰基荧光素; PBSF; Selective H2O2 probe; A selective H2O2 Sensor; ROSGreenTM H2O2 Probe; SOSG 单线态氧荧光探针；CAS: 728912-45-6； 

五氟苯磺酰基荧光素（Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein, PBSF），是由Maeda和合作者设计且开发的一款过氧化氢选择性探针（Selective H2O2 probe），不同于绝大多数的活性氧检测探针，PBSF以一种非氧化的机制发挥功能。一旦与过氧化氢（H2O2）发生反应，PBSF上的磺酸基连接被水解，释放出荧光素，从而荧光信号显著增强（作用机理见Fig 1）。PBSF选择性检测H2O2，不会识别羟基自由基（OH•）、叔丁基过氧化氢（TBHP）、超氧阴离子自由基（O2–）、单线态氧（1O2）和硝酸盐[1-2]。PBSF已用于细胞[1]、细菌[3]和植物[4]的过氧化氢检测。

产品特性

化学名：pentafluorobenzenesulfonic acid, 6’-hydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9’-[9H]xanthen]-3’-yl ester
CAS NO.：728912-45-6 分子式：C26H11F5O7S
分子量：562.4 外观：固体
纯度：≥98% 溶解性：溶于DMSO（30mg/ml），乙醇（20mg/ml）
激发波长：485 ±20 nm 发射波长：530 ±25 nm
化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（仅作参考）

1）文献来源：Huang Y, Liu Y, Shah S, Kim D, Simon-Soro A, Ito T, Hajfathalian M, Li Y, Hsu JC, Nieves LM, Alawi F, Naha PC, Cormode DP, Koo H. Precision targeting of bacterial pathogen via bi-functional nanozyme activated by biofilm microenvironment. Biomaterials. 2021 Jan;268:120581. PMID: 33302119;

实验目的：检测细菌的过氧化氢生成。

实验方法：1ml对数生长期的变形链球菌（S.mutans）或口腔链球菌（S. oralis）用PBSF（5 μM），同时用SYTO 60（10μM）于37℃孵育4h。之后吸取20μl 细菌悬浮液置于玻璃载玻片上，共聚焦显微镜观察和定量。H2O2用488/505nm检测，细菌用652/678nm观察。基于PBSF的荧光强度用ImageJ来定量H2O2生成。

2）文献来源：Do THT, Choi H, Palmgren M, et al. Arabidopsis ABCG28 is required for the apical accumulation of reactive oxygen species in growing pollen tubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2019 Jun;116(25):1254

实验目的：检测花粉管的过氧化氢生成。

实验方法：四分体花粉粒置于含萌发培养基的玻片上萌发1-3h，之后用含10μM 五氟苯磺酰基荧光素（PFBSF）的萌发培养基染色10min。

Fig atabcg28 pollen tube has dispersed pattern of hydrogen peroxide. (F and G) Hydrogen peroxide distribution in germinated wild-type (F) and atabcg28 (G) pollen stained with PFBSF. Note that the green fluorescent signal accumulated in the tip of wild-type pollen but was distributed throughout atabcg28 pollen.

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CAS NO.：68971-03-9 4-Di-1-ASP 线粒体荧光探针

发表于由

4-Di-1-ASP；DASPEI；Styryl dye 苯乙烯染料；JC-10 线粒体膜电位探针；MitoTracker® Green FM；罗丹明123 Rhodamine 123；CAS NO：68971-03-9；

产品描述

4-Di-1-ASP，英文全名4-(4-(Dimethylamino)styryl)-N-Methylpyridinium iodide，是一种苯乙烯染料，用于活细胞的线粒体染色。4-Di-1-ASP具有很大的荧光斯托克斯位移（Stokes shift），用作膜电位探针时被摄取速度相对较慢。4-Di-1-ASP可用于活大脑组织内的神经胶质瘤细胞染色。

产品特性

1） CAS NO.：68971-03-9

2） 同义名：4-(4-(Dimethylamino)styryl)-N-Methylpyridinium iodide 4-[4-(二甲氨基)苯乙烯基]-N-甲基碘化吡啶；

3） 分子式：C16H19IN2

4） 分子量：366.2

5） Ex/Em：474/606 nm (MeOH)

6） 外观：红色固体

7） 溶解性：溶于DMSO、DMF

8） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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  LysoSensor Yellow/Blue DND-160  黄/蓝色溶酶体荧光探针      

发表于由

为满足研究者研究活细胞内溶酶体生成和功能的动力学特征，特此开发Lysosensor探针，一种区分酸性细胞器的荧光pH指示剂。该系列染料属于向酸性探针，由于质子化聚集在酸性细胞器上。这一质子化也使得因弱碱性侧链而封闭荧光的探针得以荧光释放，促使荧光信号增强。因此，LysoSensor探针遇酸后荧光信号呈现pH依赖性的增强。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160（黄/蓝色溶酶体探针）是一种独特的比率型探针，呈现pH依赖性的双激发和双发射光谱峰（见Fig 1）。然而，活细胞中这一探针仅呈现pH依赖的双发射光谱（发射波长比率~450/510nm，激发波长~365nm）。在酸性细胞器中，LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈现黄色荧光，而在酸性偏低的细胞器中具有蓝色荧光。双发射波长的测定允许比率成像分析在酸性细胞器比如：溶酶体或精子顶体内的pH。其pKa值约为4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160，常常简写成PDMPO，普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉积和运输的一种示踪剂。

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160的pH依赖性光谱反应图（A）荧光激发光谱（B）荧光发射光谱。

本品为DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞的溶酶体染色，建议工作浓度为≥1µM，需根据实际情况做优化调整。

产品特征

1） 外观：溶液

2） 浓度：1mM in DMSO

3） 亚细胞定位：溶酶体

4） 颜色：黄色、蓝色

5） 检测仪器：荧光显微镜

6） Abs（nm）：329，384nm[最大双吸收波长，对pH敏感，见Fig 1]

7） Em（nm）：440，540nm [最大双发射波长，对pH敏感，见Fig 1]

保存与运输方法

保存：≤-20ºC避光干燥保存，收到货至少12个月有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 整个染色过程中需注意避光。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。第一次使用请将本品按单次用量分装保存，≤-20°C避光干燥保存，尽量避免反复冻融。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制
利用生长培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度，工作液需现配现用。对于Lysosensor系列溶酶体探针，推荐工作液浓度≥1µM；

【注意】：

1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2.染色步骤（贴壁细胞）

1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针培养基（必须完全覆盖住细胞），在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用不含探针的新鲜培养基替换上述染色液，并且用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。

3.染色步骤（悬浮细胞）
1）离心沉淀细胞，吸除上清。
2）利用适量 37℃预热的含探针培养基重悬细胞，在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养基重悬细胞。
4）用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。

【注意】：

另一种方法，悬浮细胞可能会粘附到经BD Cell-Tak处理的盖玻片上，此时，可用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

附录I 溶酶体探针总表

名称 Abs (nm)[1] Em(nm)[1] pKa
LysoTracker Blue DND-22蓝色 373 422 N/A
LysoTracker Green DND-26绿色 504 511 N/A
LysoTracker Red DND-99红色 577 590 N/A
LysoTracker Deep Red远红 647 668 N/A
LysoSensor Yellow/Blue DND-160黄/蓝色 329，384[2] 440，540[2] 4.2
LysoSensor Green DND-189绿色 443 505 5.2
[1]:在水溶性缓冲液或甲醇中测定的最大吸收和发射波长；在细胞环境内数值可能会有些许差异。[2]:最大双吸收和发射波长，对pH敏感

溶酶体系列探针常见问题

1. 如何选择合适的溶酶体探针？

答：对于溶酶体定位实验，请选择Lysotracker系列探针，根据自身的实验体系，结合lysotracker系列探针的荧光特征，选择合适激发和发射波长的荧光探针。Lysotracker Blue DND-22（MX4320-50UL）探针的光量子产率偏低，建议在非荧光选择受限的情况下，推荐选择其他几款Lysotracker探针。对于酸性细胞器（比如溶酶体）的pH测定实验，请选择Lysosensor系列探针。

2. 溶酶体探针染色后是否能做固定？

3. 溶酶体探针是否能用于流式分析和荧光光度计分析？

4. 溶酶体探针LysoTracker Green DND-26（MX4318-50UL） 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160

（MX4316-50UL）的建议孵育时间多少？

Cal-590 Potassium Salt 钙离子荧光探针

发表于由

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。
新一代钙离子荧光探针：Cal-520，Cal-590和Cal-630是最强大且均一的细胞内钙流（Calcium mobilization）测定用荧光探针，与传统的钙离子探针（比如：Fluo-3 AM、Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有明显改善的信噪比和细胞内滞留性。
Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM具有细胞膜渗透性，能够预加载进入细胞。一旦进入细胞候，亲脂阻断基团AM被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内部。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。当细胞被激动剂刺激后，受体发出细胞内钙释放的信号，从而使得Cal-520，Cal-590和Cal-630的荧光增加。Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM的高灵敏度以及>100倍的荧光增强使其成为胞内钙离子测定的理想探针。高信噪比和更加的胞内滞留性使其成为评估GPCR和钙离子通道靶标以及筛选对应激动剂和拮抗剂的优秀工具。

Cal-520，Cal-590和Cal-630基本定位在细胞质，不像Rhod-2主要定位在线粒体。Cal-590和Cal-630的长激发/发射波长使其为完美的钙离子探针，能够与绿色荧光蛋白（GFP）标记细胞兼容多色检测。另外，Cal-520，Cal-590和Cal-630也与绝大多数现存的荧光仪器兼容。Cal-520在488nm处被良好激发，用FITC滤片检测；Cal-590经优化在555nm处被良好激发，用TRITC/Cy3滤片检测；Cal-630经优化在594nm处被良好激发，用Texas Red滤片检测；

Cal-590 Potassium Salt是钾盐形式的Cal-590，不具有细胞膜渗透性，溶于水。可通过微注射、膜片电极、划痕标记等方式加载进入细胞，从而检测胞内钙水平。

产品特征

同义名：Cal-590钾盐 分子量：1123.03
解离常数：Kd=561 nM 溶解性：H2O
Ex/Em：574/588

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录ICal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称 产品编号 激发波长（nm） 发射波长（nm） 解离常数Kd（nM）
Cal-520 MX4537-50UG 492 514 320
Cal-590 MX4535-50UG 558 584 561
Cal-630 MX4536-50UG 607 623 792

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Cal-590 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针 50μg
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Cal-520 Potassium Salt钙离子荧光探针 10×50μg
Cal-590 Potassium Salt钙离子荧光探针 5×50μg
Cal-630 Potassium Salt钙离子荧光探针 5×50μg

 

CAS NO.：201860-17-5 FM绿色线粒体荧光探针

发表于由

MitoTracker Green FM绿色线粒体荧光探针；Mitotracker Deep Red 深红色线粒体荧光探针；Lysotracker Green 绿色溶酶体荧光探针；罗丹明123；JC-1 线粒体凋亡检测；CAS: 201860-17-5；

MitoTracker Green FM是线粒体绿色荧光染料，该染料在线粒体中的定位并不受线粒体膜电位的影响。该染料可以染活细胞，但是在醛类固定剂固定之后，会导致荧光信号丢失。

产品特性

1） CAS NO.：201860-17-5

2） 化学式：Benzoxazolium, 2-[3-[5,6-dichloro-1,3-bis[[4-(chloromethyl)phenyl]methyl]-1,3-dihydro-2H- benzimidazol-2-ylidene]-1-propenyl]-3-methyl-, chloride

3） 分子式：C34H28Cl5N3O

4） 分子量：671.88

5） 外观：红色固体

6） 溶解性：DMSO（1mM）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：≤-20°C避光干燥保存，收到货至少12个月有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 本品量非常少，使用前低速离心后直接加适当溶剂溶解使用，切勿分装称量。

2） 整个染色过程中需注意避光。

3） MitoTracker Green FM（MX4309）适用于活细胞染色，不兼容固定细胞染色，以及染色后固定。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液的配制

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。之后加入74.4µL高质量无水的DMSO溶解MitoTracker Green FM（Mw=671.88 g/mol），使其浓度为1mM。储存液最好能现用，若用不完，请根据单次用量分装，≤-20℃避光保存。

2. 工作液的配制

根据不同的实验目的使用不同的探针浓度，以下的起始操作条件仅作参考，可根据细胞类型和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。

利用培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度，工作液需现配现用。对于MitoTracker Green FM，使用相对偏低浓度（20-200nM）进行染色。若使用更高推荐浓度可能会染上其他细胞结构。

【注意】：1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

3.   染色步骤（贴壁细胞）

1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2）待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针培养基。于特定的生长状态下孵育15～45min（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）或荧光酶标仪下观察。

4.  染色步骤（悬浮细胞）

1）离心沉淀细胞，吸除上清。

2）利用37℃预热的含探针培养基重悬细胞，于特定的生长状态下孵育15～45min（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养基重悬细胞。

4）用含合适滤片的流式细胞仪、基于酶标板的分析仪或荧光显微镜。

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名称 规格
MitoTracker Red CMXRos红色线粒体荧光探针 50µg
MitoTracker Red CM-H2XRos红色线粒体荧光探针 50µg
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Dihydroethidium (DHE)二氢乙锭 5mg

 

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针

发表于由

EPG-4 TMA+Salt钾离子荧光探针，Asante Potassium Green-4，PBFI，SBFI钠离子指示剂/探针，Valinomycin 缬氨霉素

产品特征

单一波长激发的钾离子荧光探针，可见光成像，高K+/Na+选择性

产品信息

产品名称

                    规格                           

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针      

 500μg

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针

 2×50μg

 
Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针
Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针 10×50μg

产品描述

Enhanced Potassium Green-4 (EPG-4)是Asante Potassium Green-4（APG-4）的替代产品，是一种新型K+荧光探针，主要克服现有K+荧光探针PBFI、APG-1、APG-2对Na+选择性的缺陷，这些探针的选择性主要分布在2:1（K+:Na+），而EPG-4总的选择性接近100:1（K+:Na+）。作为结构上的一种权衡，EPG-4选择性的增强导致更大疏水性。穴醚内碳离子的增多引起疏水性提高。总的来说，这一选择性的改进赋予科研工作者用于特定实验（见参考文献）的一种有用工具。

本品是EPG-4 TMA+Salt，不具有细胞膜渗透性，不可通过简单孵育加载细胞。能被可见光激发，最大激发波长为526nm，发射波长为546nm。能够用荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪等仪器所检测。

产品特性

1）   分子式：C68H96Cl2N6O13

2）   分子量：1291 g/mol

3）   纯度：≥85%（HPLC）

4）   荧光光谱：Ex/ Em =526/546nm（in methanol）

5）   吸收光谱：Amax=524nm

6）   摩尔吸光系数：80,000 M-1cm-1

7）   解离常数（Kd）：7mM

8）   溶解性：溶于H2O

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   EPG-4 TMA+Salt易溶于水，可用水或生理缓冲液溶解配制成母液，小量分装置于-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

参考文献

1） J. Humphries et al. Species-independent attraction to biofilms through electrical signaling. Cell 168, 200–209.e12 (2017) 

2） Prindle, A. et al. Ion channels enable electrical communication in bacterial community. Nature527, 59–65 (2015). 

3） M. Szabo, M.I. Wallace, Imaging potassium-flux through individual electropores in droplet interface bilayers, Biochim. Biophys. Acta (2015) 

4） Kilic K, Karatas H, Dönmez-Demir B et al (2018) Inadequate brain glycogen or sleep increases spreading depression susceptibility. Ann Neurol 83:61–73 

5） Hover, S., Foster, B., Fontana, J., Kohl, A., Goldstein, S. A. N., Barr, J. N., and Mankouri, J. (2018) Bunyavirus requirement for endosomal K+ reveals new roles of cellular ion channels during infection. PLoS Pathog 14, e1006845 

CAS NO：115534-33-3；TMA-DPH 膜流动性荧光探针

发表于由

TMA-DPH; Membrane fluidity 膜流动性荧光探针; Markergene M0271；DiI；DiR；CAS NO：115534-33-3；

TMA-DPH是一种用来检测人工和活体膜系统的膜流动性荧光探针，对脂蛋白及其类似系统的单分子层动力学研究特别有用。TMA-DPH的结构呈圆柱形，对周围脂质变化引起的再定位具极高的灵敏性，广泛运用于旋转运动研究中的荧光偏振分析。最大激发和发射波长分别为355nm和430nm。建议工作浓度范围0.5-5µM，初次实验需尝试覆盖建议工作浓度范围的几个浓度，从而确定能得到理想染色的最佳浓度。

产品特性

1）CAS NO：115534-33-3

2）化学名：N,N,N-trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrien-1-yl)-benzenaminium, 4-methylbenzenesulfonate;

Benzenaminium, N,N,N-trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrienyl)-, salt with 4-methylbenzenesulfonic acid (1:1) ;

3）同义名：N,N,N-Trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrien-1-yl)phenylammonium (p-toluenesulfonate)

4）分子式：C21H24N • C7H7O3S

5）分子量：461.62g/mol

6）纯度：≥95%

7）外观：黄色固体

8）溶解性：溶于甲醇（1mg/ml），DMSO（10mg/ml）

9）Ex/Em：355/430 nm

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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品牌 产品名称 规格
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二、 细胞膜荧光探针【见我司整理的细胞膜荧光探针产品专题】

产品名称 Ex/Em(nm) 规格
DiO (DiOC18(3))细胞膜绿色荧光探针 484/501 25mg
DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针 550/567 10mg
DiIC16(3) perchlorate细胞膜橙红色荧光探针 550/567 25mg
DiD Perchlorate (DiIC18(5))细胞膜红色荧光探针 644/663 25mg
DiR Iodide (DiIC18(7))细胞膜深红色荧光探针 748/780 25mg
DiA细胞膜荧光探针 491/613 25mg
Celltracker CM-DiI活细胞示踪剂CM-DiI（红色） 553/570 1×50μg

CAS NO：115534-33-3；TMA-DPH 膜流动性荧光探针

发表于由

TMA-DPH; Membrane fluidity 膜流动性荧光探针; Markergene M0271；DiI；DiR；CAS NO：115534-33-3；

产品描述

TMA-DPH是一种用来检测人工和活体膜系统的膜流动性荧光探针，对脂蛋白及其类似系统的单分子层动力学研究特别有用。TMA-DPH的结构呈圆柱形，对周围脂质变化引起的再定位具极高的灵敏性，广泛运用于旋转运动研究中的荧光偏振分析。最大激发和发射波长分别为355nm和430nm。建议工作浓度范围0.5-5µM，初次实验需尝试覆盖建议工作浓度范围的几个浓度，从而确定能得到理想染色的最佳浓度。

产品特性

1）CAS NO：115534-33-3

2）化学名：N,N,N-trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrien-1-yl)-benzenaminium, 4-methylbenzenesulfonate;

Benzenaminium, N,N,N-trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrienyl)-, salt with 4-methylbenzenesulfonic acid (1:1) ;

3）同义名：N,N,N-Trimethyl-4-(6-phenyl-1,3,5-hexatrien-1-yl)phenylammonium (p-toluenesulfonate)

4）分子式：C21H24N • C7H7O3S

5）分子量：461.62g/mol

6）纯度：≥95%

7）外观：黄色固体

8）溶解性：溶于甲醇（1mg/ml），DMSO（10mg/ml）

9）Ex/Em：355/430 nm

保存与运输方法

保存：-20℃避光保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针 550/567 10mg
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CAS NO：53213-82-4；DiOC6(3) 内质网荧光探针

发表于由

DiOC6(3)；壬基吖啶橙NAO；JC-10 线粒体膜电位探针；MitoTracker®Green FM 绿色线粒体荧光探针；罗丹明123 Rhodamine 123；CAS NO：53213-82-4；

产品描述

DiOC6(3)，英文全名3,3′-Dihexyloxacarbocyanine Iodide，CAS NO. 53213-82-4，是一种具细胞膜渗透性、发绿色荧光的亲脂性染料。作为一种膜探针，DiOC6(3)在高浓度下能对活细胞和固定细胞的内质网（高尔基体）染色，也能对囊泡膜和线粒体染色。而在更低浓度下，偏向选择性染色线粒体。DiOC6(3)能用来标记活细胞，然而，由于光动力学毒性会快速破损，经其标记的细胞仅能短时间暴露在光下。神经元和酵母细胞中，DiOC6(3)曾用来研究内质网（ER）结构的相互作用和动力学；当染料浓度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株内，DiOC6(3)能特异性染酵母核膜，而且具足够灵敏性来揭式核膜（已知称为karmellae）的变化。

应用特征

DiOC6(3), a carbocyanine dye from the DiOC family, cannot be exclusive to the mitochondrial membrane potential measurement in intact cells, except by dissipating the plasmatic and ER membrane potentials as well as the DpH. DiOC6(3) is widely used as a cytofluorometric DCm indicator. To produce rigorous and reproducible results, the dye and the cell concentrations have to be monitored with care. When DiOC6(3) is used at low concentrations (10–20 nM), this dye rapidly reaches equilibrium in the mitochondria with low quenching effects. The use of higher concentrations (more than 50 nM) may result in non-mitochondrial staining (plasma membrane and endoplasmic reticulum) and in fluorescence quenching. Moreover, similar to probes previously mentioned, the use of relatively high concentrations of dye leads to a high accumulation in the inner mitochondrial membrane, resulting in a quenching of the fluorescence and, occasionally, in an inhibition of either mitochondrial respiration or complex I (except for TMRM and TMRE) (30). Many factors, such as the cell/dye ratio, cell size variability or the magnitude of plasma membrane potential may affect the fluorescence intensity of cells stained with DiOC6(3) (31). If the cell population studied is homogeneous and asynchronous, this potential pitfall is not of crucial interest; otherwise, internal standards and normalization procedures have to be used to allow the detection of DCm dissipation and DiOC6(3) fluorescence decrease (30). [Reference: Cottet-Rousselle C et al. Cytometric assessment of mitochondria using fluorescent probes. Cytometry A. 2011 Jun;79(6):405-25.]

产品特性

1） CAS NO.：53213-82-4

2） 化学名：Benzoxazolium, 3-hexyl-2-(3-(3-hexyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl)-, iodide

3） 同义名：3,3′-Dihexyloxacarbocyanine Iodide; DiOC6(3) Iodide;

4） 分子式：C29H37IN2O2

5） 分子量：572.52

6） 纯度：≥97%（HPLC）

7） Ex/Em：484/501nm（in methanol）

8） 外观：红色粉末或块状

9） 溶解性：溶于DMSO，DMF，无水乙醇，微溶于水

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件和具体的应用来做出调整。

1.染色液制备

1）储存液制备：用 DMSO或无水乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取10mg DiOC6(3)（Mw：572.52 g/mol）溶于3.49ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】：工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4.显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见下表：

荧光探针 最大激发/最大发射波长

（Ex/Em）

滤光片编号
Omeaga公司 Chroma公司
DiI 549/565nm XF108, XF32 41002, 31002
DiOC18(3) 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
DiOC6(3) 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
DiD 644/665nm XF110, XF47 41008, 31023
DiR 750/780nm XF112 41009

5.流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

DiOC6(3) 内质网荧光探针 罗丹明123 Rhodamine 123 CAS NO：53213-82-4

发表于由

DiOC6(3)；壬基吖啶橙NAO；JC-10 线粒体膜电位探针；MitoTracker®Green FM 绿色线粒体荧光探针；罗丹明123 Rhodamine 123；CAS NO：53213-82-4；

产品信息

产品名称 产品编号 规格
DiOC6(3) 内质网荧光探针 MX4009-10MG 10mg
DiOC6(3) 内质网荧光探针 MX4009-50MG 50mg

产品描述

DiOC6(3)，英文全名3,3′-Dihexyloxacarbocyanine Iodide，CAS NO. 53213-82-4，是一种具细胞膜渗透性、发绿色荧光的亲脂性染料。作为一种膜探针，DiOC6(3)在高浓度下能对活细胞和固定细胞的内质网（高尔基体）染色，也能对囊泡膜和线粒体染色。而在更低浓度下，偏向选择性染色线粒体。DiOC6(3)能用来标记活细胞，然而，由于光动力学毒性会快速破损，经其标记的细胞仅能短时间暴露在光下。神经元和酵母细胞中，DiOC6(3)曾用来研究内质网（ER）结构的相互作用和动力学；当染料浓度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株内，DiOC6(3)能特异性染酵母核膜，而且具足够灵敏性来揭式核膜（已知称为karmellae）的变化。

应用特征

DiOC6(3), a carbocyanine dye from the DiOC family, cannot be exclusive to the mitochondrial membrane potential measurement in intact cells, except by dissipating the plasmatic and ER membrane potentials as well as the DpH. DiOC6(3) is widely used as a cytofluorometric DCm indicator. To produce rigorous and reproducible results, the dye and the cell concentrations have to be monitored with care. When DiOC6(3) is used at low concentrations (10–20 nM), this dye rapidly reaches equilibrium in the mitochondria with low quenching effects. The use of higher concentrations (more than 50 nM) may result in non-mitochondrial staining (plasma membrane and endoplasmic reticulum) and in fluorescence quenching. Moreover, similar to probes previously mentioned, the use of relatively high concentrations of dye leads to a high accumulation in the inner mitochondrial membrane, resulting in a quenching of the fluorescence and, occasionally, in an inhibition of either mitochondrial respiration or complex I (except for TMRM and TMRE) (30). Many factors, such as the cell/dye ratio, cell size variability or the magnitude of plasma membrane potential may affect the fluorescence intensity of cells stained with DiOC6(3) (31). If the cell population studied is homogeneous and asynchronous, this potential pitfall is not of crucial interest; otherwise, internal standards and normalization procedures have to be used to allow the detection of DCm dissipation and DiOC6(3) fluorescence decrease (30). [Reference: Cottet-Rousselle C et al. Cytometric assessment of mitochondria using fluorescent probes. Cytometry A. 2011 Jun;79(6):405-25.]

产品特性

1） CAS NO.：53213-82-4

2） 化学名：Benzoxazolium, 3-hexyl-2-(3-(3-hexyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl)-, iodide

3） 同义名：3,3′-Dihexyloxacarbocyanine Iodide; DiOC6(3) Iodide;

4） 分子式：C29H37IN2O2

5） 分子量：572.52

6） 纯度：≥97%（HPLC）

7） Ex/Em：484/501nm（in methanol）

8） 外观：红色粉末或块状

9） 溶解性：溶于DMSO，DMF，无水乙醇，微溶于水

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件和具体的应用来做出调整。

1.染色液制备

1）储存液制备：用 DMSO或无水乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取10mg DiOC6(3)（Mw：572.52 g/mol）溶于3.49ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】：工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4.显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见下表：

货号 荧光探针 最大激发/最大发射波长

（Ex/Em）

滤光片编号
Omeaga公司 Chroma公司
MX4002-10MG DiI 549/565nm XF108, XF32 41002, 31002
MX4001-10MG DiOC18(3) 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
MX4009-10MG DiOC6(3) 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
MX4004-25MG DiD 644/665nm XF110, XF47 41008, 31023
MX4005-25MG DiR 750/780nm XF112 41009

5.流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

CAS：288574-78-7；Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针

发表于由

Zinpyr-1；TSQ；Zinquin；锌离子荧光探针；TPEN 金属离子螯合剂；CAS：288574-78-7；

产品信息

产品名称

 CAS NO. 规格

Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针

 288574-78-7 1mg

Zinpyr-1, Cell Permeant 锌离子荧光探针 288574-78-7 5mg

产品描述

Zinpyr-1（ZP-1）是一种具细胞膜渗透性的荧光探针，选择性检测锌离子（Zn2+）（Kd= 0.7 ± 0.1 nM）。一旦与金属离子复合，诱发荧光信号产生。活细胞内，Zinpyr-1主要对高尔基或高尔基关联的囊泡染色。随着锌离子浓度增高，Zinpyr-1的激发波长从515nm迁移到507nm，发射波长范围在513-558nm。还能用作PET传感器。

产品特性

1） CAS NO.：288574-78-7

2） 化学名：4′,5′-bis[[bis(2-pyridinylmethyl)amino]methyl]-2′,7′-dichloro-3′,6′-dihydroxy-spiro[isobenzofuran -1(3H),9′-[9H]xanthen]-3-one

3） 同义名：ZP-1; 4′,5′-Bis[bis(2-pyridylmethyl)aminomethyl]-2′,7′-dichlorofluorescein;

4） 分子式：C46H36Cl2N6O5

5） 分子量：823.72

6） Ex/Em：515-507nm/513-558nm

7） 纯度：≥95%

8） 外观：固体

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）由于产品量少，收到本品后需直接在瓶内溶解配制母液。

2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（来自文献，仅作参考）

1）文献：Penninger P, Riedelberger M, Tsymala I, Arzani H, Jenull S, Kuchler K. Quantification of zinc intoxication of Candida glabrata after phagocytosis by primary macrophages. STAR Protoc. 2021;2(1):100352. Published 2021 Feb 20. doi:10.1016/j.xpro.2021.100352

实验目的：研究巨噬细胞吞噬引起Zn2+介导的真菌致病菌格拉布勒他念珠菌（C. glabrata）清除能力。用Zn2+特异性探针- Zinpyr-1和碘化丙啶（PI）双重检测Zn2+水平和细胞活力的变化。

使用方法：Zinpyr-1溶于DMSO配制成10mM储存液，按照10μl/管分装置于-20℃避光冻存，避免反复冻融。于实验前，将储存液用PBS稀释到10μM工作液。工作液现配现用。将含探针的染色工作液加入巨噬细胞（感染念珠菌）于37℃孵育30min。流式细胞仪分析染色结果，Zinpyr-1的激发和发射波长约为488nm和525nm。

Fig. Visualization of viable Candida glabrata inside phagolysosomes

(A) Gating strategy for analysis of C. glabrata by flow cytometry. The PI-Zinpyr panel compares untreated (black) with heat-stressed (red) C. glabrata.

(B) Percentage of dead C. glabrata, comparing untreated and heat-stressed fungal cells before interaction with BMDMs.

(C) Live and dead C. glabrata populations are analyzed for their zinc-dependent signal intensity (MdFI) equaling the intracellular amount of labile zinc in fungal cells. MdFI, median fluorescence intensity.

2）文献：Scott A. Sinclair et al. The use of the zinc-fluorophore, Zinpyr-1, in the study of zinc homeostasis in Arabidopsis roots. New Phytologist. Volume174, Issue1 April 2007 Pages 39-45

实验目的：使用锌离子荧光探针- Zinpyr-1来检测拟南芥根部Zn2+的分布。

使用方法：Zinpyr-1溶于DMSO配制成1mM储存液，置于-20℃避光冻存，避免反复冻融。之后用0.9%生理盐水稀释到工作浓度。7-8天的幼苗用含10mM EDTA的去离子水清洗3遍，之后浸入含5-20μM Zinpyr-1的工作液内，于室温避光孵育3h。之后用去离子水清洗，再浸入含75μM PI的溶液降细胞壁染红，再清洗。样本用0.9%生理盐水封片后，用共聚焦显微镜观察，用488nm激发器激发，分别用FITC和Texas red 滤片来观察。

Fig. Confocal laser-scanning microscope (CLSM) images of Arabidopsis roots of (a,b) wild-type, (c,d) hma2, hma4 and (e,f) hma4 seedlings exposed to 20 µm Zinpyr-1 for 3 h. The boxed regions in (a,c,e) illustrate the regions used to quantify average fluorescence intensity. x, xylem; p, pericycle; e, endodermis; c, cortex; ep, epidermis. Bars, 50 µm.

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Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针

发表于由

EPG-4 TMA+Salt钾离子荧光探针，Asante Potassium Green-4，PBFI，SBFI钠离子指示剂/探针，Valinomycin 缬氨霉素

产品特征

单一波长激发的钾离子荧光探针，可见光成像，高K+/Na+选择性

产品名称

                   规格                             

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针      

 500μg

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针

 2×50μg

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针 5×50μg

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt 钾离子指示探针 10×50μg

Enhanced Potassium Green-4 (EPG-4)是Asante Potassium Green-4（APG-4）的替代产品，是一种新型K+荧光探针，主要克服现有K+荧光探针PBFI、APG-1、APG-2对Na+选择性的缺陷，这些探针的选择性主要分布在2:1（K+:Na+），而EPG-4总的选择性接近100:1（K+:Na+）。作为结构上的一种权衡，EPG-4选择性的增强导致更大疏水性。穴醚内碳离子的增多引起疏水性提高。总的来说，这一选择性的改进赋予科研工作者用于特定实验（见参考文献）的一种有用工具。

本品是EPG-4 TMA+Salt，不具有细胞膜渗透性，不可通过简单孵育加载细胞。能被可见光激发，最大激发波长为526nm，发射波长为546nm。能够用荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪等仪器所检测。

产品特性

1）   分子式：C68H96Cl2N6O13

2）   分子量：1291 g/mol

3）   纯度：≥85%（HPLC）

4）   荧光光谱：Ex/ Em =526/546nm（in methanol）

5）   吸收光谱：Amax=524nm

6）   摩尔吸光系数：80,000 M-1cm-1

7）   解离常数（Kd）：7mM

8）   溶解性：溶于H2O

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   EPG-4 TMA+Salt易溶于水，可用水或生理缓冲液溶解配制成母液，小量分装置于-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

参考文献

1） J. Humphries et al. Species-independent attraction to biofilms through electrical signaling. Cell 168, 200–209.e12 (2017) 

2） Prindle, A. et al. Ion channels enable electrical communication in bacterial community. Nature527, 59–65 (2015). 

3） M. Szabo, M.I. Wallace, Imaging potassium-flux through individual electropores in droplet interface bilayers, Biochim. Biophys. Acta (2015) 

4） Kilic K, Karatas H, Dönmez-Demir B et al (2018) Inadequate brain glycogen or sleep increases spreading depression susceptibility. Ann Neurol 83:61–73 

5） Hover, S., Foster, B., Fontana, J., Kohl, A., Goldstein, S. A. N., Barr, J. N., and Mankouri, J. (2018) Bunyavirus requirement for endosomal K+ reveals new roles of cellular ion channels during infection. PLoS Pathog 14, e1006845 

Rhod-2三钾盐（Rhod-2 Tripotassium Salt）是一种水溶性、高亲和力的可见光激发的钙离子荧光探针

发表于由

Rhod-2 钙离子荧光探针；Rhod-4, AM；Fluo-8； Fluo-4； TPEN 重金属螯合剂；HTS Screen Assay高通量筛选；

订购信息：

产品名称 规格                 
Rhod-2 Trisodium Salt 钙离子荧光探针       1mg
Rhod-2 Tripotassium Salt 钙离子荧光探针    1mg

产品描述

Rhod-2三钾盐（Rhod-2 Tripotassium Salt）是一种水溶性、高亲和力的可见光激发的钙离子荧光探针。类似于Fluo-3或Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着Ca2+浓度变化发生明显迁移，荧光信号一旦与Ca2+结合后明显增强，Ex/Em=549/578 nm。Rhod-2三钾盐不具细胞膜渗透性，可通过微注射或划痕标记加载进入细胞。

基本特性：

1）   化学名：2,2′-((2-(2-(2-(bis(carboxylatomethyl)amino)-5-(6-(dimethylamino)-3-(dimethyliminio)-3H-xanthen -9-yl)phenoxy)ethoxy)-4-methylphenyl)azanediyl)diacetate tripotassium salt

2）   同义名：Rhod-2, Tripotassium Salt; Rhod-2 Potassium Salt; Rhod-2钾盐；

3）   分子式：C40H39N4K3O11

4）   分子量：869.05

5）   外观：暗红色固体

6）   Kd（Ca2+结合）：570NM

7）   溶解性：溶于水

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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