Nitrocefin 头孢硝噻吩；Cephalosporin 头孢菌素；beta-lactamases β-内酰胺酶活性；β-内酰胺类抗生素耐药菌筛选；CAS：41906-86-9
产品描述
头孢硝噻吩（Nitrocefin，CAS NO：41906-86-9），具有显色特性的一种头孢菌素（cephalosporin），通常用来检测由β-内酰胺类抗生素耐药菌代谢产生的β-内酰胺酶（beta-lactamases）活性。作用机制在于：几乎所有β-内酰胺酶能水解头孢硝噻吩β-内酰胺环上羰基碳和氮基间的酰胺键，这一过程通过颜色的变化可用肉眼来判断。完整结构的头孢硝噻吩处于紫外吸光区（~380nm，黄色），酶解产物迁移到可见光光谱区（~500nm，红色）。
产品特性
1. CAS NO：41906-86-9
2. 化学名：(6R)-3-[(1E)-2-(2,4-dinitrophenyl)ethenyl]-8-oxo-7R-[(2-thienylacetyl)amino]-5-thia-1-azabicyclo [4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid
3. 同义名：Nitrocephin
4. 分子式：C21H16N4O8S2
5. 分子量：516.51
6. 纯度：≥95%（HPLC）
7. 外观：橘色粉末
8. 溶解性：DMSO（30 mg/ml）、DMF（30 mg/ml）
9. 化学结构图：
保存与运输方法
保存：-20°C避光保存，储存于惰性气体下。至少2年稳定。
运输：冰袋运输。
使用方法
1. 头孢硝噻吩储存液（10mg/ml）制备
a）使用前从冰箱内取出产品置于室温回温至少20min并进行低速离心；b）吸取100μl高质量DMSO加入1mg头孢硝噻吩，充分溶解并混匀。可按照单次用量分装后，-20°C避光保存。
2. 头孢硝噻吩工作液（1mg/ml）制备
头孢硝噻吩的典型工作浓度为0.5-1.0mg/ml，此制备物一般呈黄色。
取20μl头孢硝噻吩（10mg/ml）储存液加入180μl PBS缓冲液（0.1M，中性pH），混匀后，即得到头孢硝噻吩（1mg/ml）工作液。多余的工作液可置于-20°C避光保存，必须在2周用完。
3. 快速检测分析
一旦接触β-内酰胺酶产生菌，待检样本一般可快速产生阳性反应。通常建议20-30min的反应时间，同时设置阴性对照。
3.1 玻片表面分析法
a）吸取一滴头孢硝噻吩工作液（1mg/ml）到干净的玻璃载玻片表面；b）使用无菌接种环挑取一固体培养克隆，并与液滴混匀；c）若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。【若有必要，可多滴头孢硝噻吩工作液，防止干燥】
3.2 直接接触分析法
a）直接吸取一滴头孢硝噻吩工作液（1mg/ml）到分离菌落表面；b）若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。
3.3 肉汤培养液分析法
a）取1ml肉汤培养液，加入3-5滴头孢硝噻吩工作液（1mg/ml）；b）若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。
3.4 细胞裂解液分析法
a）超声裂解1ml细胞悬液；b）加入3-5滴头孢硝噻吩工作液（1mg/ml）到裂解悬液；b）若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。
3.5 滤纸分析法
a）将一小片滤纸片（~3 x 3 cm）饱和吸收头孢硝噻吩工作液（1mg/ml），然后置于干净的培养皿内；b）跳取一分离的克隆，并涂抹到浸渍滤纸片上；c）若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。