EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

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菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌，特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平，这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子（AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG）对应的tRNA，位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
2. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
3. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基无抗生素外，其余培养基（液）都应含氯霉素（34μg/ml），以防质粒丢失。
6. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~10mM。
7. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1. 将感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化后，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用移液枪吹打），冰浴静置25min。
2. 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意】：

   a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

   b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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