SYTOX Green；SYTOX 9；碘化丙啶 PI；死细胞染料绿菁；荧光增白剂28；Calcofluor White M2R；CFW；

产品信息

产品描述

SYTOX Green核酸染料（SYTOX Green Nucleic Acid Stain），是一种高亲和力的核酸染料，轻易渗透进入受损的细胞质膜，但不能穿透活细胞膜。特别适用于革兰氏阳性菌（G⁺）和革兰氏阴性菌（G^–），由于它们需要极其明亮的荧光信号。探针只需简单孵育，使用氩离子激光器的488nm激光或任何其它450-490nm光源激发，死细胞的核酸则呈明亮的绿色荧光。结合以上特征，以及荧光增强＞500倍（与核酸结合）的优点，使其称为一种简单、定量的一步法死细胞指示剂，当用荧光显微镜、荧光光度计、荧光酶标板和流式细胞仪检测。

SYTOX Green核酸染料可与蓝色和红色荧光的表面标记联合使用，用于多指标分析。也能将SYTOX Green与任一种具细胞渗透性的SYTO 59-64红色荧光核酸染料联合双色标记死细胞和活细胞。SYTOX Green是一种优秀的DNA复染剂，用于染色体标记以及固定细胞和组织的染色。

本品以DMSO储存液形式提供，浓度为5mM。只需用合适的生理缓冲液稀释到工作浓度进行简单孵育即可。适用于哺乳动物细胞、革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。

产品特性

1） 同义名：SYTOX Green dye；SYTOX Green死细胞染料；死细胞染料绿菁；SYTOX Green细胞核染料；

2） 外观：橙色至红色溶液

3） 荧光特征：E_X/E_m=504/523nm（与DNA结合），荧光产量为0.53（图1），需注意细菌或哺乳动物细胞中SYTOX Green的光谱特征可能发生变化。

图1. SYTOX Green与DNA结合的荧光激发和发射光谱。

于10mM Tris-HCl，1mM EDTA, pH 7.5
的反应体系内，将1个染料分子与50个DNA碱基对结合之后检测所得的光谱。

保存与运输方法

保存:-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

应用示例
文献来源1）A Double Staining Method Using SYTOX Green and Calcofluor White for Studying Fungal Parasites of Phytoplankton Mélanie Gerphagnon, Delphine Latour, Jonathan Colombet, Télesphore Sime-Ngando Applied and Environmental Microbiology Jun 2013, 79 (13) 3943-395
实验目的：利用二种荧光染料（CFW+ SYTOX green）双重标记来定量检测孢子囊内的游动孢子含量。
实验方法：首先，用经典的核酸染料DAPI（1 μg/ml−1）和特异性染色质荧光素增白剂（calcofluor white , CFW, 2.5% v/v）。之后，结合核酸染料SYTOX green和CFW染色。SYTOX green的不同浓度（0.1 μM, 0.2 μM, 和0.5 μM）和孵育时间（30 min，1 h）进行优化。CFW工作浓度为2.5% (vol/vol) 。CFW要么与SYTOX green同时加入样本，或观察前5min再加入样本。染色步骤和结果总结见图1。最佳的染色条件是：先用0.1 μM SYTOX green 孵育55min，再加入CFW共同孵育5min。

 Fig 1. Different concentration and incubation time procedures tested for double staining method and epifluorescence microscopy observation of zoosporic content and sporangia of phytoplankton parasitic chytrid. Optimal procedures are indicated with bold characters. Bars, 10 μm.文献来源2）Johnson MB, Criss AK. Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells. J Vis Exp. 2013;(79):50729.
实验目的：使用SYTOX Green和DAPI来评估细菌活力。
实验方法：用DAPI (10 μg/ml in Morse’s Defined Medium)室温避光标记细菌20min；用标记好的细菌感染24孔板内贴壁培养的细胞，不要用醛或有机溶剂来固定细胞；用MOPS/MgCl2清洗一次；用Alexa Fluor 647结合的抗体或凝集素标记感兴趣的细菌，室温避光操作10min，来检测外部细菌；吸走细胞培养基，加入SYTOX Green（0.4 μM in MOPS/MgCl2）。室温避光孵育5min。MOPS/MgCl2清洗2次；MOPS/MgCl2再清洗1次；于30min内用荧光显微镜收集图片。

Fig 2. (A-B) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to propidium iodide and SYTO9 as in protocol 1, with (A) or without (B) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to propidium iodide and appear red. Viable bacteria are stained with SYTO9 and appear green. (C-D) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to DAPI and SYTOX Green as in protocol 2, with (C) or without (D) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to DAPI and SYTOX Green and appear blue + green. Viable bacteria are stained with DAPI only and appear blue only.

染色流程（更多内容见说明书）

以下步骤适用于任何细胞类型，需注意不同细胞类型所需的探针工作浓度范围有差异（见表2）。生长培养基、细胞密度、是否存在其它细胞、和其它因素都可能影响染色。总的来说，不在磷酸盐的缓冲液中能得到最好的结果。玻璃器皿上残留的去污剂也有可能影响许多有机体的真实染色，导致含或不含细胞的溶液中都能发现明亮荧光的材料。确保用温和去污剂来清洗玻璃器皿，用热自来水完全冲洗干净，最后用去离子水清洗数次。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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