GT115化学感受态细胞；TOP10；DH10B；XL1-Blue；pCpG-free质粒；pCpG-mcs；pCpG-LacZ；

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菌株描述

SHuffle T7菌株是一款基因工程改造的K12衍生菌株，特别设计改进含二硫键蛋白在细胞质内的表达，适合于T7启动子驱动的蛋白表达。

该菌株染色体中整合一个拷贝的二硫键异构酶基因—DsbC，促进错误氧化的蛋白转化为正确形式。另外，细胞质中的DsbC也是一个分子伴侣，能协助不含二硫键蛋白的正确折叠。SHuffle T7菌株染色体中整合一个拷贝的T7 RNAP基因，可以表达噬菌体T7 TNA聚合酶，从而适用于T7启动子诱导的蛋白表达。LacIq基因的严格控制表达允许毒性基因得以克隆。SHuffle T7菌株具抵抗噬菌体T1（fhuA2）感染的特点，具链霉素和壮观霉素抗性。

SHuffle T7菌株基因型：F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB rpsL150(StrR) Δgor Δ(malF)3

产品描述

本品是大肠杆菌SHuffle T7菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19载体检测转化效率可达>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） SHuffle T7菌株具链霉素、壮观霉素抗性，不可用于具链霉素、壮观霉素抗性质粒的转化。

7） 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度、IPTG浓度（0.1~2mM）都需进行优化。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的质粒，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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