Fluo-4 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fluo-4,Acetoxymethyl Ester; 可见光激发波长 Ca ²⁺荧光探针；Fluo-3；Fluo-8, AM；Rhod-2, AM；CAS NO：273221-67-3；

Fluo-4是可见光激发波长Ca2+荧光探针Fluo-3的改良版本，通过将Fluo-3结构上的氯离子（Cl-）替换为电子吸引力更强的氟离子（F-），使得最大激发波长往短波长偏移10nm左右。正由于这个波长更接近氩激光器的波长，则当使用氩激光器来激发探针Fluo-4，能够得到更强的荧光强度，比Fluo-3强一倍。另外，Fluo-4的Ca2+亲和力几乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上几乎同Fluo-3。Ca2+结合后的最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。可通过激光共聚焦显微镜或流式细胞仪来检测胞内钙离子水平的变化。

Fluo-4, AM是Fluo-4的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-4，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

可见光激发Ca2+荧光探针的优势：

与紫外光激发的荧光探针相比，如Fura-2和Indo-1，可见光激发Ca2+探针具有以下特点：

1）适用于大多数的激光共聚焦测钙系统，包括共聚焦激发扫描显微镜以及流式细胞仪等。

2）具有更强的染料吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化，从而降低对活细胞的光毒性。

3）Ca2+依赖性荧光强度增强，对Ca2+变化水平检测敏感度更高。

4）降低样品自荧光以及光散射的干扰。

5）兼容光激活探针以及UV-激发试剂，因此更方便于多参数检测。

6）无光谱偏移。

Fluo-4, AM相比较于Fluo-3的优势：

1） 激发和发射波长往短波长偏移10nm，更接近氩激光器的波长，。因此，当使用488nm进行荧光激发，得到更强的荧光信号，比Fluo-3强一倍。

2） 50μg小包装供应，使用方便，且能很好保证产品的稳定性。

Fluo-4, AM的应用图片：

Fig. 1, U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 µL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 µl of 4 µMFluo-3, AMorFluo-4, AMin HHBS at 37 °C, 5% CO2incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 µl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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