LabAssay™ ALP
LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒
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LabAssay™ ALP 
LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒
碱性磷酸酶的活性检测试剂盒，常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶（ALP）广泛分布于肝脏、骨和小肠之中。组织中酶活性的变化是成骨等生理现象的重要标志。在骨代谢研究领域被用作骨形成指标之一。
本产品是以对硝基苯磷酸盐为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，通过使用酶标仪进行多样品检测。
◆检测原理
碱性磷酸酶存在下，碳酸盐缓冲溶液（pH 9.8）中的对硝基苯磷酸盐分解成对硝基苯酚和磷酸，产生的对硝基苯酚在碱性条件下呈黄色。通过测量405 nm处的吸光度，可以计算样品中的碱性磷酸酶活性。
◆产品性能
检测范围：>0.06 mmol/L
标准曲线范围：0.0625~0.5 mmol/L
重复性：C.V.<10%
样品：血清（小鼠、大鼠、人）
所需样品量：20 μL
检测时间：约20min
检测波长：405 nm
◆试剂盒成分
|
底物片（溶解时对硝基苯基磷酸二钠 6.7 mmol/L) |
10 片 |
|
底物溶解buffer （2.0 mmol/L 氯化镁 含有 0.1 mol/L 碳酸盐缓冲液 pH 9.8) |
50 mL × 1瓶 |
|
反应终止液（0.2 mol/L氢氧化钠溶液） |
50 mL × 1瓶 |
|
标准溶液 (0.5 mmol/L 对硝基苯酚溶液） |
5 mL × 1瓶 |
◆标准曲线示例
◆检测操作方法
根据下表中的条件进行反应。
|
Test |
标准 |
空白 |
|
|
底物缓冲液 |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
|
待测物 |
样品20 μL |
标准溶液20 μL |
蒸馏水 20 μL |
|
孔板混匀仪中震荡1 min，37°C下孵育15 min。 |
|||
|
反应终止液 |
80 μL |
80 μL |
80 μL |
|
孔板混匀仪中震荡1 min，使用酶标仪测量405 nm处吸光度 |
|||
◆数据
加标回收测试
ALP的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
● 人血清样品
|
添加量(mmol/L) |
平均值(mmol/L) |
回收量(mmol/L) |
回收率（%） |
|
－ |
0.429 |
－ |
－ |
|
0.097 |
0.527 |
0.098 |
101 |
|
0.197 |
0.587 |
0.158 |
80.2 |
|
0.297 |
0.672 |
0.243 |
81.8 |
|
0.507 |
0.866 |
0.437 |
86.2 |
● 小鼠血清样品
|
添加量(mmol/L) |
平均值(mmol/L) |
回收量(mmol/L) |
回收率（%） |
|
－ |
0.284 |
－ |
－ |
|
0.060 |
0.343 |
0.059 |
98.3 |
|
0.127 |
0.399 |
0.115 |
90.6 |
|
0.251 |
0.507 |
0.223 |
88.8 |
|
0.500 |
0.753 |
0.469 |
93.8 |
● 大鼠血清样品
|
添加量(mmol/L) |
平均值(mmol/L) |
回收量(mmol/L) |
回收率（%） |
|
－ |
0.374 |
－ |
－ |
|
0.060 |
0.439 |
0.065 |
108.3 |
|
0.127 |
0.483 |
0.109 |
85.8 |
|
0.251 |
0.598 |
0.224 |
89.2 |
|
0.500 |
0.855 |
0.481 |
96.2 |
稀释线性度测试
使用随附的缓冲液制备样品，使其处于检测范围内，用缓冲液连续梯度稀释4次，并检测结果。
● 人血清样品
● 小鼠血清样品
● 大鼠血清样品
样品检测案例
● 人样品
|
样品 |
检测值 (mean) |
SD |
CV (%) |
|
混合血清，男性 |
0.556 |
0.003 |
0.5 |
|
混合血浆(EDTA)，男性 |
0.07 |
0.001 |
1.2 |
※抗凝固剂的EDTA会产生负误差，所以请不要使用。
● 小鼠样品：CD-1(ICR)、雄性、血清
|
样品 |
检测值 (mean) |
SD |
CV (%) |
|
No.1 |
0.31 |
0.013 |
4.2 |
|
No.2 |
0.453 |
0.001 |
0.2 |
|
No.3 |
0.495 |
0.015 |
3 |
|
No.4 |
0.442 |
0.013 |
2.9 |
|
No.5 |
0.373 |
0.002 |
0.5 |
● 大鼠样品：SD、雄性、血清
|
样品 |
检测值(mean) |
SD |
CV (%) |
|
No.1 |
0.538 |
0.005 |
1 |
|
No.2 |
0.441 |
0.01 |
2.2 |
|
No.3 |
0.357 |
0 |
0 |
|
No.4 |
0.46 |
0.002 |
0.5 |
|
No.5 |
0.301 |
0.011 |
3.6 |
单位：mmol/L, n=2
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※ 产品已更新，旧编号为：291-58601
参考文献
● Ito, S. et al. : J. Pharmacol. Exp. Ther., 333, 341 (2010). ※小鼠肾组织提取液
● Matsuyama, A. et al. : Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 45, 75 (2018). ※MC3T3-E1细胞, C2C12细胞
● Chiba, T. et al. : J. Atheroscler. Thromb., 23, 1099 (2016). ※小鼠血浆
● Kohno, Y. et al. : Stem Cell Res. Ther., 8, 115 (2017). ※骨膜间充质干细胞
● Iwakura, T. et al. : J. Orthop. Res., 27, 208 (2009). ※人培养细胞提取液
● Furuya, Y. et al. : J. Biol. Chem., 286, 37023 (2011). ※小鼠血清
● Itoh, T. et al. : J. Biol. Chem., 284, 19272 (2009). ※小鼠培养细胞提取液
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 633-51021 | LabAssay™ ALP LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒 |
500 tests | for Cellbiology | – |
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