NEB酶-Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）

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NEB酶-Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）
产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）

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NEB酶-Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）

特性

 使用探针法 qPCR，快速、灵敏、精准的对目标 RNA 进行检测和定量

 选择更简单
 ·适用于不需要 ROX 染料校正的仪器
 ·预混液试剂和便捷的操作的流程使反应体系的建立更便捷
 ·无干扰的可见示踪染料可避免加样错误
        产品性能优异
 · Luna® 系列产品均经过严格测试，以优化产品的特异性、灵敏度、准确性和重复性
 · 该产品对于不同来源的样品性能稳定
 · 通过与市面上其它 qPCR 和 RT-qPCR 试剂的综合评测，展现了 Luna 产品的卓越性能
        使用 Luna 温启动反转录酶优化您的 RT-qPCR 实验
 · 新型、热稳定反转录酶（RT）有效改善实验表现
 · 温启动反转录酶和热启动 Taq 酶共同提升反应特异性和功效

概述

 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）经过优化，适用于水解探针法的 RNA 实时定量。一步法 RT-qPCR 为 RNA 检测和定量提供了一种便捷、强大的方法。在同一管中，RNA 首先由反转录酶转化为 cDNA，然后使用 DNA 依赖型 DNA 聚合酶扩增 cDNA，从而可以进行 qPCR 定量。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性，将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量 PCR 每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度，通过已知稀释浓度样品的标准曲线，可对靶基因进行绝对定量。

在 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）中，热启动 Taq DNA 聚合酶与新型温启动反转录酶联合使用，利用可逆结合的核酸适配体抑制剂控制这两种酶的活性。这种温度依赖型激活可避免热循环之前的非特异性扩增，从而可以放心的在室温下建立反应体系。改造过的 Luna 温启动反转录酶的热稳定性比许多其它反转录酶更高，其最佳反应温度为 55℃。对于困难模板，可以升高反应温度至 60°C，且不会影响 Luna 性能。
注意：为确保 Luna 温启动反转录酶的完全激活，建议孵育温度不低于 50℃
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）浓度为 2×，包含热启动 Taq DNA聚合酶、dNTP 和所有必需的缓冲液成分。配方中不含校正染料，与不需要 ROX 校正的仪器兼容（如果需要 ROX 校正，可自行添加 ROX 染料）。反应预混液中的 dUTP 用于防止模板残留污染，非荧光可见示踪染料让反应的建立可视化。该可见染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠，因此不会干扰 qPCR 检测。
Luna 温启动反转录酶预混液的浓度为 20×，其中包含 Luna 温启动反转录酶以及用于防止 RNA 降解的小鼠 RNase 抑制剂（详情请见产品手册中的模板制备）。适用于各种 RNA 样品类型（总 RNA，poly（A）-RNA 等）和来源
图 1：Luna RT-qPCR 产品具有更高灵敏度、可重复性及更优异的表现。
 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）                             
使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 产品检测人 GAPDH 基因，模板为 8 个 10 倍梯度稀释的
Jurkat 总 RNA（1 μg– 0.1 pg），每个浓度的样品做 8 个重复。实验按照试剂盒建议的操作流程进行，反应中包含一个 55℃ 温育 10 分钟的反转录步骤以便于 Luna WarmStart 反转录酶发挥作用。NTC = 无模板对照。
图 2：NEB 的 Luna RT-qPCR 产品在多重检测中功效强大
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）                             
 使用 Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit 分别检测 GAPDH 基因、核糖体蛋白 L32g 和 PI-3 激酶相关的 SMG1 基因的表达情况。模板为 7 个分别 10 倍稀释的 Jurkat 总 RNA （1 μg – 1 pg），每个浓度的样品做 4 个重复。实验结果如上图所示，左边是叠加的结果，右边是每个基因单独的检测结果。无论是单重还是多重 qPCR，低拷贝的模板（SMG1）使用的引物浓度为 0.4 μM，高拷贝的模板（L32G 和 GAPDH）使用的引物浓度为 0.2 μM。单重 qPCR 可以直接比较，多重 qPCR 可以比较拷贝数的差异。NTC = 阴性对照
图 3：通过与市场上探针法 RT-qPCR 试剂相比，Luna 产品展现出更好的稳定性和特异性
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）                             
使用市售的 RT-qPCR 试剂对 7 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）进行测试。测试均根据产品说明书进行，数据来源于两个实验人员。实验结果对扩增效率、低起始量和缺乏无模板对照的扩增进行了评估（ΔCq = 无模板对照的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。此外，还评估了稳定性、可重复性、所有扩增曲线质量（质量分数）。柱状图展示了达到可接受的性能标准的目标百分比。图中展示了 NEB 和其它供应商的结果：Quanta，qScript™ XLT 1-Step RT-qPCR ToughMix®；ABI，TaqMan® RNA-to-Ct 1-Step Kit；QIAGEN，QuantiFast® Probe RT-PCR Kit；Bio-Rad，iTaq™ Universal Probes One-Step Kit；Promega®，GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System。NEB 的 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒*性能优于其它测试试剂。
 
 
*数据来源于 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB #E3006）。Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）（NEB #E3007）的性能与之相同

试剂盒组分

 以下试剂随产品提供

储存温度 （°C）

浓度

Luna® Probe One-Step Reaction Mix （No ROX）

-20

2 X

Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix

-20

20 X

Nuclease-free Water

-20

储存温度： -20°C