免疫组化试剂盒（小鼠一抗来源）（Mouse IHC Kit）是一款特异性检测一抗源为小鼠单克隆或多克隆的免疫组化试剂盒，检测原理基于高特异性和灵敏度的生物素-链霉亲和素信号放大系统，以及辣根过氧化物酶催化底物DAB显色，从而识别目标抗原的过程。本品适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片以及血液标本。

类似于Invitrogen Histostain-Plus IHC Kit，使用 LAB-SA (Labeled Streptavidin-Biotin)+DAB显色系统，适用于广谱的免疫组化检测。

产品组成

组分编号	组分名称	产品规格
		60T	300T
	10% goat serum for blocking 10%山羊血清	3ml	2×7.5ml
	Biotin-conjugated anti-rabbit antibody 生物素化抗小鼠二抗	3ml	2×7.5ml
	HRP-conjugated streptavidin HRP标记链霉亲和素	3ml	2×7.5ml
	20×DAB reaction buffer 20×DAB底物缓冲液	160µl	800µl
	20×DAB stock solution 20×DAB底物浓缩液	160µl	800µl
	20×H2O2stock solution 20×过氧化氢浓缩液	160µl	800µl

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，1年有效，不可冻存。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 建议检测目的标本的同时，设置阴性对照和阳性对照。

2. DAB具潜在致癌性，操作时注意防护，避免直接接触皮肤。

3. DAB工作液需现配现用，避光放置，需在30min内完成染色。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、用户自行准备试剂

1.1 二甲苯、乙醇、无水甲醇

1.2 蒸馏水或去离子水

1.3 30% H2O2

1.4 1×PBS, pH 7.2-7.4

1.5 一抗（宿主为小鼠）

1.6 苏木素染色液

1.7 中性树胶封片

二、染色步骤（以石蜡切片为例）

1. 标本制备

石蜡切片用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复（按照一抗说明书推荐方法或实验室标准流程进行操作）。

染色前用1×PBS浸泡组织或细胞涂片10min。从此步开始，严禁标本或组织切片干燥

2. 染色流程

2.1 将石蜡切片放入3% H2O2-甲醇溶液中浸泡10min，目的消除内源性过氧化氢酶活性。

2.2 用PBS清洗3次，2 min/次。

2.3 加一滴（50μl）10%山羊血清封闭液于组织上（需完全覆盖组织），室温孵育10min。

2.4 倒掉或吸尽液体（不可冲洗）。

2.5 每张切片加100μl或适量宿主为小鼠的一抗（需完全覆盖组织），湿盒内孵育30-60min。

2.6 用PBS清洗3次，2 min/次。

2.7 每张切片加一滴（50μl）生物素化抗小鼠二抗（需完全覆盖组织），孵育10min。

2.8 用PBS清洗3次，2 min/次。

2.9 每张切片加一滴（50μl）HRP标记链霉亲和素（需完全覆盖组织），孵育10min。

2.10 用PBS清洗3次，2 min/次。

2.11 制备DAB显色工作液，需要现配现用，请根据具体需染色的切片数来配制。

此处为1张切片用量的配制方法：a）取2.5µl 20×DAB底物缓冲液加入到50µl蒸馏水或去离子水，混匀；b）分别取2.5µl 20×DAB底物浓缩液，2.5µl 20×过氧化氢浓缩液到a）中混合溶液，充分混匀，避光保存。

2.12 每张切片加一滴（50μl）新鲜配制的DAB显色工作液，室温显色2-5min（可在显微镜下控制显色程度）。

2.13 自来水充分冲洗；

2.14 苏木素染色液复染。盐酸酒精分化。

2.15 脱水、透明、封片、镜检。

3. 染色结果

阳性染色：在抗原定位处被染成棕黄或棕褐色。

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