SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;
| 产品名称 | 规格 | ||
| SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | ||
| SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 |
货号（规格） |
|
| 1000UL | 5000UL | ||
| A | SURE Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| B | Control Vector puC19, 10 pg/µl | 10μl | 10μl |
菌株描述
SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA片段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素（KanR）和四环素（TetR）特性。
SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].
产品描述
本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。
5） 菌株本身含卡那霉素和四环素特性，携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因（CamR）的质粒转化进入SURE细胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。
6） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
7） 采用常规操作流程转化SURE感受态细胞，转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可使用标准操作流程。
8） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。
2） 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25-30min。
3） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
4） 向每个离心管中加入900 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5） 5000rpm离心1min，吸走900 μl上清，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。
【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热SOC培养基。
2） 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。
3） 加1.7μl β-ME（1.42M）到细胞内。【β-ME能提高转化效率】
4） 轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。
5） 往细胞内加入0.1-50ng目的DNA，轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。
6） 42℃热激45s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。
6） 向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
7） 吸取≤200 µl 转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。】
附表1 固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
附表2 固体和液体2-YT培养基配方
| 组分Component | 2YT（液体）/升 | 2YT（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
| 酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
| NaCl | 5g | 5g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |