EvaGreen是一种新型的绿色荧光核酸染料，因其独特的特征适用于包括qPCR和DNA熔解曲线分析、依赖解旋酶恒温扩增（tHDA）的实时监测，以及毛细管凝胶电泳等实验。EvaGreen本身基本无荧光，一旦与dsDNA结合产生强荧光。DNA结合染料呈近似荧光素FAM或SYBR Green I的最大激发和发射光谱，使其与装有488nm氩激光器或任何可见光激发波长处于该区域的仪器兼容。

与目前市场上相似的荧光素FAM或SYBR Green I等相比，EvaGreen具有以下更优越的特征：

1）   低PCR抑制性：通过一种智能化的“按需释放”DNA结合技术，比SYBR Green I呈现更低的PCR抑制性；

2）   高灵敏度：EvaGreen的低PCR抑制性使其能用更高的浓度检测，进而获得更佳的qPCR和熔解曲线分析信号；

3）   安全无毒：EvaGreen完全无细胞膜渗透性，标准艾姆斯试验显示无诱变性和毒性；

4）   与快速PCR兼容：对PCR反应的最小干扰使其能够显著缩短链延伸时间；

5）   与多重PCR兼容：在建议的使用浓度内复制子到复制子间不存在染料迁移；

6）   超凡热稳定性、化学稳定性和光稳定性：PCR缓冲液内95-100℃反应48h，未检测到染料降解。在碱性或酸性条件下稳定性很高。能承受重复的冻融次数。

7）   光谱类似于SYBR Green I：与所有主要品牌的qPCR仪器和酶系统兼容。

本品为溶于水的20× EvaGreen核酸染料，使用时仅需根据体系加量使其终浓度为1×即可。

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，也可置于-20℃保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品保存和使用过程中请注意避光。

2）   本品使用前，请置于室温回温，之后用漩涡混匀器完全混匀。本品高度稳定，但染料在保存的过程中会吸附到管壁上，漩涡混匀数秒使其充分溶解。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1．   按照以下表格配制反应体系，

【注意】：

1）   根据选择的仪器类型，加入或不加入适当浓度的参比染料ROX。

2）   根据体系内选择的Taq酶类型，对其进行优化。热启动酶能得到最好的结果，但需在合适反应体系下。

2. 根据检测样本数配制足量的上述反应体系，并加入模板DNA（10ng/25μl体系）。

3. 将以上体系混匀后分装至qPCR管内。

4. 在合适的仪器内启动qPCR反应并记录退火或延伸步骤的荧光信号。