产品名称 | 规格 | ||
JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | ||
JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl |
产品组分:
组分编号 |
组分名 |
货号(规格) |
|
1000UL | 5000UL | ||
A | JM109(DE3) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
JM109(DE3)菌株,来源于JM109,含有T7 RNA聚合酶表达基因,整合在其染色体上,故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点,JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于pET,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。
JM109(DE3)菌株基因型:endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3
产品描述
本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,6个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
- 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。
- 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
- 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
- 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
- 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
- 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
- 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。
- 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
- 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
- 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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