本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，能用于多个质粒的共同转化。本试剂盒提供了完整的酵母感受态制备、储存以及转化试剂，每个试剂盒可做200次质粒的转化。

产品组分

保存与运输方法

保存：4ºC保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 酵母转化整个过程请无菌操作。
2. 使用高纯的质粒有助于提高转化效率。
3. 本品适用于酿酒酵母的转化。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、酵母感受态细胞的制备

1. 1. 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
   2. 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线，30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。
   3. 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基，30℃培养过夜。
   4. 第二天转接到含30-50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.4-0.5范围。1000g离心5min收集细胞，去上清。
   5. 用30-50ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。1000g离心5min，去上清。【注意】：若想节省准备时间，也可直接使用一周内的酵母培养产物（4℃保存），取3ml接种到50mlYPDA液体培养基过夜摇菌。之后离心收集细胞，用于下游实验。
   6. 用10ml制备液重悬和洗涤沉淀，1000g离心5min，去上清。
   7. 用0.5-1.0ml冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl分装到1.5-2ml无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。
   8. 按照缓慢冷冻的方法：①将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。【注意】：缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。

二、酵母转化

2.1 按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需360μl的混合液。

1. 1. 取360μl转化混合液加入上述制备好的感受态细胞，用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。
   2. 置于30℃水浴锅孵育40-60min，每10min轻轻混匀一次。对于一些菌种，延长孵育时间能提高转化效率，控制在3h之内。
   3. 3000g离心3min，去掉上清液。
   4. 【推荐】用0.5ml YPD Plus（MS6309-50ML）重悬沉淀，30℃摇床振荡培养30-60min。1000g离心5min，去掉上清液。
   5. 往沉淀内加入400μl无菌去离子水，重新悬浮沉淀。稀释10倍、100倍后分别转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养3-5天直至出现酵母克隆。

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