Reactive oxygen species (ROS) 活性氧；DCFH-DA；HPF羟苯基荧光素；Mitosox 线粒体超氧化物探针；Dihydroethidium (DHE) 二氢乙锭；ROSGreenTM H2O2Probe；Life (Molecular Probe)；

CellROX Deep Red Reagent是一种检测活细胞氧化应激的新型荧光探针。此细胞膜渗透性的染料在还原态时无荧光或呈微弱荧光，一旦被活性氧物质（ROS）氧化后发明亮稳定的荧光，最大吸收/发射波长约~ 644/ 665nm（见图I.CellROX Deep Red氧化后的荧光光谱图）。其荧光信号主要定位在细胞质。CellROX Deep Red Reagent的深红色荧光信号与其他活细胞染料和GFP兼容，使其适用于多重荧光试验来测定各种细胞现象，包括与细胞毒性和细胞死亡的参数。不同于其它的ROS探针，比如H2DCFDA（MX4802-50MG），CellROX Deep Red Reagent的荧光信号经醛类固定后也能保留，使其相对于传统的ROS探针来说在应用和操作流程更加灵活。CellROX Deep Red Reagent与各种检测平台兼容，比如传统荧光显微镜、高内涵筛选仪器（HCS）、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛选（HTS）。还与各种台式仪器兼容，比如Attune™仪器。

本品以稳定、即用型的DMSO溶液形式提供，浓度为2.5mM，操作简单，与荧光显微镜的标准工作流程兼容。每管染料（50µl）足够做1个96孔板或20张爬片。适用于任何细胞类型的氧化应激检测。

保存与运输方法

保存：≤-20ºC避光保存，保持干燥，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 本品对光和空气敏感，使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 需要自行准备的材料

1. 1. 细胞和培养基
   2. 生理盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.6）
   3. 【可选】固定剂（比如，溶于PBS的3.7%甲醛）

2. 实验步骤

以下步骤专门为BPAE，HepG2, U-2 OS和RAW巨噬细胞所开发，优化后的染色工作浓度为5µM，但是此实验适用于任何细胞类型。生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记效率。在初始实验，建议设置浓度梯度，以确定最佳的实验条件和适合研究细胞类型的工作浓度。

CellROX Deep RedReagent对光和空气敏感，使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。

1. 1. 用待测化合物或药物处理细胞，孵育一定时间。【注】：待测化合物或药物处理后没有必要去除培养基。
   2. 加CellROX Deep RedReagent到细胞内使其终浓度为5µM，37℃孵育30min。
   3. 去除培养基，用PBS清洗3次。
   4. 【可选】可用3.7%甲醛固定细胞15min。需在CellROX Deep RedReagent染色2h内进行荧光信号检测。
   5. 【可选】此时可用NucBlue活细胞染料（一种细胞核复染剂）或其他复染剂如Hoechst 33342（CAT#：MX4204-10ML）对细胞染色。

应用示例

图II. CellROX Deep RedReagent测定牛肺动脉内皮细胞（BPAE）的氧化应激水平。在96孔板内接种BPAE细胞。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h【在孵育的后30min时向某些对照和维生素K3处理孔内加入超氧化物清除剂MnTBAP（100µM）】。之后细胞用CellROX Deep RedReagent（5µM）和Hoechst 33342染色，将探针加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，之后成像检测。

相关产品