7-羟基香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯(7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester)是7-羟基香豆素-3-羧酸(7-OHCCA)的胺反应琥珀酰亚胺酯,是用来标记蛋白和核酸的一种蓝色荧光染料。这一香豆素的衍生物也越来越多的被用来标记多肽、核苷酸和碳水化合物。
产品特性
1) CAS NO:134471-24-2
2) 英文同义名:7-OHCCA SE; 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid N-Succinimidyl Ester; N-Succinimidyl 7- Hydroxycoumarin-3-carboxylate; Umbelliferone-3-carboxylic acid N-succinimidyl ester; N-Succinimidyl Umbelliferone-3- carboxylate;
3) 中文同义名:7-羟基香豆素-3-羧酸-N-琥珀酰亚胺酯;N-琥珀酰亚胺基-7-羟基香豆素-3-羧酸酯;伞形酮-3-羧酸-N-琥珀先亚胺酯;N-琥珀酰亚胺基-伞形酮-3-羧酸酯;
4) 分子式:C14H9NO7
5) 分子量:303.22
6) 含量:≥95% (HPLC)
7) Ex/Em:386/448nm (in 0.1M Tris, pH 9.0)
8) 外观:类白色至白色粉末
9) 溶解性:溶于DMSO,DMF
10)化学结构:
保存与运输方法
保存:-20ºC避光干燥保存,至少1年有效。
运输:常温运输。
注意事项
1) 荧光探针都存在淬灭的现象,在保存和使用的过程中都要注意避光。
2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
琥珀酰亚胺酯标记氨基生物分子(NHS ester labeling of amino biomolecules)
琥珀酰亚胺酯(NHS酯)(NHS ester)是一种常用的活化酯,适合用于修饰和标记存在于蛋白、多肽、氨基生物分子和DNA中的氨基。NHS酯与胺的反应具pH依赖性。低pH环境,氨基基团质子化,标记无法发生。而高于优化条件的pH环境,NHS酯快速水解,导致标记产量低。用来标记的最佳pH范围是8.3-8.5。
水是标记反应的最常用溶剂。如果NHS酯水溶性弱,可先溶于DMSO或DMF,再加入蛋白水溶液。DMF必须不含有胺类,从而应该是无臭的。
以下是NHS酯标记氨基生物分子的通用步骤,仅作参考。
1. 计算NHS酯的所需量;
2. 确定反应体系的体积;
3. 用DMSO或DMF溶解NHS酯。
【注意:低温保存的NHS酯一定要提前取出回至室温,低速离心后,再开盖使用。NHS酯固体一定要用高质量的无水有机溶剂溶解,配制成合适浓度母液,尽量现配现用,或根据单次用量分装,置于-20℃干燥冻存,避免反复冻融。】
4. 用pH 8.3-8.5的缓冲液溶解生物分子。
I)可用0.1M NaHCO₃或0.1M 磷酸缓冲液。注意pH是最重要的事。且避免缓冲液内含胺类物质,比如Tris,甘氨酸,铵离子,或稳定蛋白比如BSA。如果缓冲液内含胺类物质,可先透析到10-20mM PBS。然后按照1ml生物分子溶液加0.1ml 1M NaHCO₃得到理想的pH。低浓度叠氮钠(<3 mM)或柳柳汞(<1 mM)不会干扰标记反应。
II)当进入大规模标记(几百mg级别的NHS酯),注意由于NHS酯的水解随着时间推移,反应混合物容易发生酸化。监测pH,或之后使用更高浓度的缓冲液。
5. 加NHS酯溶液到生物分子溶液内,轻轻涡旋混匀。冰上过夜或室温至少标记4h。
6. 使用合适方法比如凝胶过滤(大分子最常用方法)来纯化标记物。沉淀和色谱是其他可选的替代方法。有机杂质(比如N-羟基琥珀酰亚胺,NHS酯,水解过程产生的酸)绝大部分都很容易被分离。对于蛋白和核酸,可用乙醇或丙酮沉淀法。
7. 纯化好的标记分子最好保存于未标记分子的相同溶剂中。为了防止标记分子变性,或延长保存周期,可添加BSA或其他稳定剂。
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名称 | 规格 | |
Coumarin香豆素 | 100g | |
Coumarin 6香豆素6 | 1g | |
Coumarin 7香豆素7 | 100mg | |
4-Hydroxycoumarin 4-羟基香豆素 | 25g | |
6-Methylcoumarin 6-甲基香豆素 | 5g | |
7-Hydroxycoumarin (Umbelliferone) 7-羟基香豆素(伞形酮) | 25g | |
7-Hydroxy-4-methylcoumarin (4-Methylumbelliferone) | 25g | |
7-Amino-4-methylcoumarin (Coumarin 120) 7-氨基-4-甲基香豆素 | 1g | |
7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid 7-羟基-3-羧基香豆素 | 200mg | |
7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester | 50mg |