TMB One Solution 单组份TMB溶液；ELISA；HRP (Horseradish Peroxidas) 辣根过氧化物酶；DAB；CAS NO:64285-73-0；

酶联免疫分析技术（ELISA）广泛用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析，辣根过氧化物酶（HRP）及其偶联物是ELISA技术常用的一种酶，能催化底物如3,3’5,5′-四甲基联苯胺（TMB）发生显色反应，从而进行定量或定性分析。由于TMB比其他显色底物具更高的灵敏度且无致癌性被广泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑点杂交或免疫组化等实验，也有报道将其用于氯的检测分析。

通常TMB显色试剂由多个组分构成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不便且容易导致检测结果不稳定。本品采用全新的TMB显色技术，将所有相关试剂全部配在一个溶液，即仅由单一溶液组成，不仅简化了操作步骤，而且使检测结果更加稳定可靠。

本品专门为ELISA实验而设计。检测原理在于HRP或其他适当过氧化物酶能催化生成可溶的蓝色产物，此时通常可在370nm测定吸光度。当显色反应被酸性溶液（如0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）终止后，产物由蓝色转为黄色，此时可在450nm测定吸光度。由于本品显色敏感度高，线性浓度范围较宽，极其适合用于定量ELISA分析。

本品用于ELISA检测，每个样品通常使用0.1ml显色液，则100ml本品约检测1000个样品，500ml本品约检测5000个样品。

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1) 本品含TMB和H2O2，对人体有刺激性，请注意防护。

2) 如发现本品出现浑浊或颜色变为蓝色，请停止使用。

3) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（ELISA）

1) 使用之前，取出适量单组份TMB显色液，使其回到室温再开始使用；

2) 参考ELISA检测试剂盒的实验步骤，当与HRP标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

3) 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100μl单组份TMB显色液。

4) 室温避光孵育5-30min或更长时间（可长达24h），直至显色到预期深浅。【注意】：建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度。

5) 直接在370nm测定吸光度。或者加入100μl 0.5-2M H2SO4终止反应，随后在450nm测定吸光度。

常用问题

1. 背景显色太深

1）如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化封闭液或者和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。另一方面，使用经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

2）可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2. 没有显色或显色太弱

1）适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。

2）可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如生物素检测体系。

3）可以适当延长显色时间。

4）如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。

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