EdU 5-乙炔基-2’-脱氧尿苷;BrdU 5-溴-2’-脱氧尿苷;Alexa Fluor 488 azide;Anti-BrdU antibody(DSHB,G3G4);Cell Proliferation 细胞增殖检测;CAS NO: 59-14-3;
产品信息
产品名称 | CAS NO. | 规格 | ||
5-bromo-2′-deoxyuridine (BrdU ) 5-溴-2’-脱氧尿苷 | 59-14-3 | 100mg | ||
5-bromo-2′-deoxyuridine (BrdU ) 5-溴-2’-脱氧尿苷 | 59-14-3 | 1g |
产品描述
BrdU,英文全称5-bromo-2′-deoxyuridine,中文全称5-溴-2’-脱氧尿苷,是一种合成的胸苷溴化类似物,在S期可替代胸苷选择性插入细胞DNA。BrdU通常和广泛用于测定DNA合成和标记分裂细胞,最后用来研究诱导细胞增殖的信号通路和其他生理过程。BrdU通过体外细胞培养或体内注射的方式进行探针加载,然后用抗BrdU的抗体进行特异性检测。
BrdU标记后,对组织或细胞进行固定和透化后,需要额外的DNA水解步骤(有时也称DNA变性),从而允许抗BrdU的抗体能够与插入DNA的BrdU结合。BrdU抗体能够与其他细胞标记物如Ki67,双皮质素(DCX)和NeuN联合使用来鉴定增殖细胞和新分化神经元。
产品特性
1)CAS NO:59-14-3
2)化学名:5-Bromo-1-[(2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione
3)英文同义名:5-Bromodeoxyuridine, 5-bromo-2′-deoxy-uridine,5-Bromouracil deoxyriboside,Broxuridine, 5-Bromo-1-(2-deoxy-β-D-ribofuranosyl)uracil, Br-dU, BUdR, 5-BrdU
4)中文同义名:5-溴去氧尿苷,5-溴脱氧尿苷,溴尿嘧啶苷,5-溴尿嘧啶-2’-脱氧核苷
5)分子式:C9H11BrN2O
6)分子量:307.10 g/mol
7)纯度:≥99% (HPLC)
8)外观:白色至类白色粉末
9)溶解性:溶于DMSO(20mg/ml),无水乙醇(~25mg/ml),水(10mg/ml)
保存与运输方法
保存:-20°C干燥保存,至少2年有效。
运输:冰袋运输。
使用方法
1. BrdU标记:体外标记细胞
制备BrdU储存液(10mM):称取3mg BrdU(Mw:307.10)溶于1ml去离子水,充分溶解即可。
用细胞培养基按照1:1000的比例将储存液稀释到10μMBrdU染色液,并在无菌条件下用0.2μm滤膜对染色液进行过滤除菌。
吸掉细胞内培养基并更换无菌的10μMBrdU染色液,置于CO2培养箱37ºC孵育1-24h。【注意】:BrdU孵育时间取决于细胞分裂速度。原代细胞可能要高达24h,但快速增值细胞系可能仅需1h。达到最佳信噪比的时间需要通过优化条件来确定。
吸掉细胞内染色液,用PBS清洗2次,每次至少5s。
根据标准免疫细胞化学(ICC)操作流程进行细胞固定和透化。但是在开始免疫染色前需参照下述的DNA水解步骤。
2. BrdU标记:BrdU体内标记
【注意】:BrdU体内标记方法比较多,常见的有腹腔注射法(Intraperitoneal injection)和口服法。以下为腹腔注射法的步骤,其他方法可参考文献或根据实验室固有经验操作。
用1×PBS溶解适量的BrdU配制成10mg/ml储存液,过滤除菌,按照单次用量分装冻存后待用,避免反复冻融。
对于小鼠,通用情况注射浓度为100mg/kg。
BrdU标记完成后,根据实验室已成的步骤处理动物。【注意】:BrdU插入快速分化组织比如小肠,在注射后30min就能检测到。但大多数组织可能需要高达24h才能检测到。合适的处理时间和注射剂量需要根据组织类型来优化。
3. DNA水解(DNA变性步骤)
3.1 细胞样本
用1-2.5M HCl室温孵育细胞10min-1h,实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37°C孵育可能比室温孵育效果更好
可选步骤:去除HCl,用0.1M硼酸钠缓冲液,pH 8.5室温中和30min。【注意】:0.1M硼酸钠缓冲液(pH 8.5)配置方法:称取3.8g硼酸钠(Mw=381.4)加入100ml蒸馏水,充分溶解后,用NaOH调整到所需pH。
用PBS清洗3次,每次不少于5s。
根据标准ICC操作流程继续后续染色。
3.2 组织切片
【注意】:对于石蜡切片必须先做脱蜡处理再进行DNA水解步骤。
用1-2 M HCl室温孵育切片30min-1h,实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37°C孵育可能比室温孵育效果更好。
可选步骤:去除HCl,用0.1M硼酸钠缓冲液(pH 8.5)室温中和切片10min。【注意】:0.1M硼酸钠缓冲液,pH 8.5配置方法:称取3.8g硼酸钠(Mw=381.4)加入100ml蒸馏水,充分溶解后,用NaOH调整到所需pH。
用PBS清洗3次,每次不少于5s。
根据标准IHC操作流程继续免疫染色步骤。
注意事项
1)BrdU是一种诱变剂,操作过程一定要注意防护,不要与皮肤直接接触。另戴口罩避免粉尘吸入。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关内容(与anti-BrdU的共染色)
目的:BrdU常与其他抗体联合使用以鉴定增殖和新分化神经元。常见以下3个指标:
Ki67:反映增殖的细胞标记物,细胞周期G1,S,G2和M期有Ki67表达,但静止期G0无Ki67表达。Ki67抗体能够替代或与Brdu联合使用来标记增殖神经元。
双皮质素(Doublecortin,DCX):微管相关的磷酸蛋白,由未成熟神经元表达。可与BrdU联合使用鉴定未成熟的有丝分裂后神经元。
NeuN:成熟神经元标记物,能与BrdU联合染色去鉴定新分化的神经元。
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