JC-10；JC-1；Rhodamine 123 罗丹明123； CCCP；Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位探针；CAS：47729-63-5

产品描述

JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针，是JC-1的优越替代物。与JC-1相比，具有以下几个重要优势：1）溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低；2）使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化；3）荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比；4）结果更稳定——优化探针以保证更连续性和稳定性结果。

JC-10是一种替换JC-1，用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

JC-10可用来检测大量细胞类型如神经元和心肌细胞的线粒体膜电位，也可用来研究重要的细胞生理活动，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡发生等。

本品以粉末形式提供，只需溶于DMSO配制成2mg/ml的储存液，然后用合适的缓冲液稀释到工作浓度即可使用。

产品特性

1）同义名：Enhanced JC-1;

2）分子量：~600 g/mol

3） 纯度：＞95%（HPLC）

4） 溶解性：DMSO（2mg/ml）

保存与运输方法

保存：-20℃避光保存，至少1年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1. JC-10是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。
2. JC-10染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制备

JC-10储存液制备：取本品溶于无水DMSO配制成2mg/ml储存液（比如5mg JC-10加入2.5ml DMSO），混匀后，按照单次用量分装，避光冻存，避免反复冻融。

JC-10（1×）工作液制备：取一管JC-10储存液置于室温，使其充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他缓冲液（pH 7-8，含0.02% Pluronic®F-127）配制成10-30μM的1×工作液，漩涡混匀待用。

【注意】：对于某些细胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

2. JC-10染色步骤（荧光酶标仪）

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培养孔内。

3）将整个培养板置于37℃，5% CO2孵育15-60min。【注意】：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

4）用荧光酶标仪监测Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化，计算两者荧光信号比值，以判断细胞健康程度。

【可选】：吸掉JC-10染色工作液，按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入HHBS缓冲液或其他生理缓冲液，然后再进行荧光信号分析。

3. JC-10染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）离心去上清，调整细胞密度为1-5×105细胞/管。

3）用500µl JC-10染色工作液重悬细胞。

4）室温孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光。【注意】：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

【可选】：离心后吸掉JC-10染色工作液，加入500µl HHBS缓冲液或其他合适缓冲液重悬细胞使其密度为1-5×105细胞/管，然后再进行荧光分析。

应用示例（荧光显微镜观察）：

文献来源：Yokokura S et al. Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma. BMC Cancer. 2014 Nov 26;14:882.

实验方法（线粒体膜电位去极化检测）：A total of 1 × 106cells were loaded with 10 μg/ml of JC-10 at 37°C for 30 min. Next, the cells were treated with 60 μM of CaM antagonists at 37°C for 1 h and the visualized using a fluorescence microscope (Olympus BX-51/DP-72; Olympus, Tokyo, Japan) fitted with a WIB filter (excitation, 460–490 nm; dichroic mirror, 505 nm; emission barrier filter, 510 nm).

实验结果（线粒体膜电位去极化检测）：

Fig 1. Effects of CaM antagonists on intracellular Ca2+levels and mitochondrial membrane potential. Cells were pretreated with JC-10 dye for 30 min, and subsequently incubated with CaM antagonists (60 μM) for 1 h. The cells were then visualized under a fluorescence microscope to visualize the yellow fluorescent aggregation that indicates high mitochondrial membrane potential which is distinct from the green fluorescent monomer observed at a low mitochondrial membrane potential.

	名称	规格
	JC-1 (5 mg/ml in DMSO)线粒体膜电位荧光探针	200μl
	JC-1线粒体膜电位检测试剂盒	100T
	JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential线粒体膜电位荧光探针	1mg
	JC-10线粒体膜电位检测试剂盒	100T
	CCCP (50 mM)凋亡诱导剂/质子载体	100μl
	FCCP (50 mM)凋亡诱导剂/质子载体	100μl
	Camptothecin喜树碱	100mg
	Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级	1g
	1× HHBS (Hanks’ Balanced Salt Solution with 20mM HEPES) , pH 7.2-7.4	500ml