多聚赖氨酸(poly-lysine)Poly-D-lysine (Mw 70,000-150,000) 多聚D-赖氨酸(分子量:7-15万)

多聚L-赖氨酸(Poly-L-lysine,PLL);多聚D-赖氨酸(Poly-D-lysine,PDL);Gelatin明胶;Collagen Type I胶原蛋白I型;Fibronectin纤连蛋白;Matrigel基质胶;CAS:27964-99-4;

多聚赖氨酸(poly-lysine)是一种带正电荷的氨基酸聚合物,能够结合于DNA,红细胞膜或任何带负电荷蛋白,是一种非特异性的细胞粘附因子,促进细胞吸附到固相基质上。作用机理在于其可增强细胞膜表面的负电荷离子和固相基质表面(如细胞培养皿,载玻片等)的静电相互作用。当吸附到培养表面后,多聚赖氨酸提高用于细胞结合的阳离子结合位点数。多聚赖氨酸分子量的大小与粘度相关,即分子量较低,粘度较低,使用越容易;分子量较高,粘度较高,提供的粘附位点也较多。分子量>30,000的聚赖氨酸适用于促进细胞粘附到固体基质。一般实验人员倾向于分子量为70,000-150,000的聚赖氨酸,因其在粘度和作用位点上都比较理想。

多聚赖氨酸(poly-lysine)有两种常见亚型,D-和L-型。由于多聚赖氨酸是细胞结合的非特异性粘附因子,两种亚型都可用作包被固体基质,在细胞培养中都可促进细胞的贴壁生长。据报道多聚L-赖氨酸能够改善蛋白在ELISA培养板上的粘附性。然而细胞应用中,某些细胞能够水解多聚L-赖氨酸。此种情况必须使用多聚D-赖氨酸作为粘附因子,从而保护细胞不会因摄取过量L-赖氨酸而被破坏。

本品为多聚-D-赖氨酸(Poly-D-lysine),分子量为70,000-150,000,适用于细胞培养。用作细胞培养基质,推荐使用量为:对于25cm2的培养板需要0.1mg/ml的聚赖氨酸溶液约0.5ml-1.0ml。本品也能用作组织学分析时的粘片剂。

保存与运输方法

保存:−20°C干燥保存,3年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1. 在某些细胞培养应用中,一些细胞会消化多聚L-赖氨酸并吸收,摄入过多的多聚L-赖氨酸会产生一定的细胞毒性。因此,遇到这种情况建议选用多聚D-赖氨酸(Poly-D-lysine),如Poly-D-lysine (Mw70,000-150,000)(#MX0921,冻干粉)。

2. 本品以氢溴酸(HBr)的形式提供,若想去除本品中的氢溴酸,可将本品溶于中性缓冲液,透析除去盐离子。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液准备

将10mg粉末溶于2ml无菌去离子水中充分溶解后,用0.2μm低蛋白吸附的滤膜过滤除菌后,即得到5mg/ml的poly-D-lysine储存液,可直接用于细胞培养用途。为了保持多次使用造成的污染,可将储存液以单次使用量分装到无菌管子内,4℃或者-20℃保存,至少1年有效。

2. 细胞培养用包被基质

使用多聚D-赖氨酸进行细胞相关包被实验,需根据不同的细胞系和应用进行包被条件的优化。一般步骤如下:
1)使用无菌组织培养级水或者PBS将5mg/ml poly-D-lysine储存液稀释到最适合自身实验体系的包被浓度。通常情况下,常用的培养皿/板包被浓度为0.1mg/ml,即将储存液稀释50倍后使用。

2)无菌条件下包被细胞培养板,使用量0.5ml-1.0ml/25cm2。轻轻摇动板底以使其覆盖整个板面。

3)5min后,用枪移除培养板表面溶液,并用无菌组织培养级水或者PBS清洗板面;【注意】:有的情况需要1~2个小时来完成铺板,有的时候需要过夜铺板。依情况而定。

4)至少干燥2h后,方可进行细胞培养。

【注意】:如果多聚赖氨酸包被后的玻璃器皿或玻片必须除菌,可用γ-射线照射(而非高压灭菌)对其进行除菌。

【注意】:如果包被表面不平整,可用1mM醋酸镁预处理玻璃载玻片2-3h,彻底清洗干净后再开始包被。或者,玻璃载玻片用酸清洗(盐酸或硫酸),经此处理能让多聚赖氨酸溶液包被很平整。

3. 组织学研究(玻片的包被)

一般推荐0.1%(w/v)的poly-D-lysine溶液用于组织学玻片的制备。将玻片用相应浓度的多聚赖氨酸溶液处理5min后,清洗玻片并将其室温过夜干燥或者在约60℃的烤箱内烘干~1h。【注意】:此工作溶液装在塑料瓶中于4℃保存,并限制使用次数在4次以内。

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