SDS-PAGE Gel Preparation Kit SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

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产品名称 规格     
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒            1kit (30~50 gels)   

产品描述

金畔生物的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒（SDS-PAGE Gel Preparation Kit）提供了SDS-PAGE凝胶配制所需的各种试剂，用户只需准备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶（聚丙烯酰胺凝胶）。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，还可用于配制Native PAGE凝胶。

本试剂盒约能配制30-50块常规大小的PAGE胶，具体配制的量需根据器具大小来决定。

产品组分

组分编号 组分名称 组分规格            保存方法     
MP2019-A        30% Acr-Bis (29:1) 100ml 4℃避光
MP2019-B 1.5M Tris-HCl, pH8.8 100ml 室温
MP2019-C 10% SDS 5ml 室温
MP2019-D Ammonium persulfate (APS)      0.5g 室温
MP2019-E TEMED 2×1ml 4℃避光
MP2019-F 1M Tris-HCl, pH6.8 15ml 室温

保存与运输方法

保存：4℃~室温避光保存，各组分保存详见瓶子标签。1年稳定。

运输：室温运输。

注意事项

1）   过硫酸铵（Ammonium persulfate, APS）配制成10%溶液后，应分装成小份-20℃保存，通常6个月有效。同时尽量减少室温存放时间，防止失效。

2）   TEMED容易挥发，使用后请务必拧紧瓶盖。另外，凝胶凝聚的速度与温度和光照关系密切，可适当调节TEMED的用量，控制不同室内环境下凝胶凝聚的速度。

3）   TEMED易燃，具腐蚀性，请小心操作，并且注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

4）   配制PAGE胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃加速凝固。

5）   30% Acr-Bis (29:1)具轻微神经毒性，请小心操作，并且注意有效防护以避免直接接触人体。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1）   配制10% APS溶液：直接往0.5g Ammonium persulfate (APS)中加入5ml蒸馏水，充分溶解，分装成小份保存在-20℃，通常6个月内有效。 

2）   根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围（表1）。

表1 不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6% 50-150 kD
8% 30-90 kD
10% 20-80 kD
12% 12-60 kD
15% 10-40 kD
15% 10-40 kD

3）   根据表2配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶。若配制非变性胶，参考下述配方不加10% SDS即可。

表2 配制不同浓度的SDS-PAGE分离胶
分离胶浓度 凝胶体积（ml） 所需各组分体积（单位：ml）
蒸馏水 30% Acr-Bis 1.5M Tris, pH8.8 10% SDS 10% APS TEMED
6% 5 2.6 1.0 1.3 0.05 0.05 0.004
10 5.3 2.0 2.5 0.1 0.1 0.008
15 7.9 3.0 3.8 0.15 0.15 0.012
20 10.6 4.0 5.0 0.2 0.2 0.016
30 15.9 6.0 7.5 0.3 0.3 0.024
50 26.5 10.0 12.5 0.5 0.5 0.04
8% 5 2.3 1.3 1.3 0.05 0.05 0.003
10 4.6 2.7 2.5 0.1 0.1 0.006
15 6.9 4.0 3.8 0.15 0.15 0.009
20 9.3 5.3 5.0 0.2 0.2 0.012
30 13.9 8.0 7.5 0.3 0.3 0.018
50 23.2 13.3 12.5 0.5 0.5 0.03
10% 5 1.9 1.7 1.3 0.05 0.05 0.002
10 4.0 3.3 2.5 0.1 0.1 0.004
15 5.9 5.0 3.8 0.15 0.15 0.006
20 7.9 6.7 5.0 0.2 0.2 0.008
30 11.9 10.0 7.5 0.3 0.3 0.012
50 19.8 16.7 12.5 0.5 0.5 0.02
12% 5 1.6 2.0 1.3 0.05 0.05 0.002
10 3.3 4.0 2.5 0.1 0.1 0.004
15 4.9 6.0 3.8 0.15 0.15 0.006
20 6.6 8.0 5.0 0.2 0.2 0.008
30 9.9 12.0 7.5 0.3 0.3 0.012
50 16.5 20.0 12.5 0.5 0.5 0.02
15% 5 1.1 2.5 1.3 0.05 0.05 0.002
10 2.3 5.0 2.5 0.1 0.1 0.004
15 3.4 7.5 3.8 0.15 0.15 0.006
20 4.6 10.0 5.0 0.2 0.2 0.008
30 6.9 15.0 7.5 0.3 0.3 0.012
50 11.5 25.0 12.5 0.5 0.5 0.02

4）   根据表3配制5% SDS-PAGE浓缩胶（也称为上层胶）。

表3 配制5% SDS-PAGE浓缩胶
分离胶浓度 凝胶体积（ml） 所需各组分体积（单位：ml）
蒸馏水 30% Acr-Bis 1M Tris, pH6.8 10% SDS 10% APS TEMED
5% 2 1.4 0.33 0.25 0.02 0.02 0.002
3 2.1 0.5 0.38 0.03 0.03 0.003
4 2.7 0.67 0.5 0.04 0.04 0.004
6 4.1 1.0 0.75 0.06 0.06 0.006
8 5.5 1.3 1.0 0.08 0.08 0.008
10 6.8 1.7 1.25 0.1 0.1 0.01

5）   电泳：静置，等凝胶聚合后，小心拔出梳子，避免破坏加样孔。加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液（含15-20%

甲醇）。将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合，煮沸5-10min后加入样品孔。将电泳槽置于4℃或冰水浴中电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。 

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4×Tris-HCl (1.5 M Tris-HCl), pH8.8 250ml
4×Tris-HCl (0.5 M Tris-HCl), pH6.8 250ml
4×Tris-HCl/SDS (1.5 M Tris-HCl/SDS), pH8.8 250ml
4×Tris-HCl/SDS (0.5 M Tris-HCl/SDS), pH6.8 250ml
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