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Alkaline Phosphatase from E. Coli 碱性磷酸酶，来自大肠杆菌 |
10mg |
碱性磷酸酶（Phosphatase, Alkaline，ALP，EC 3.1.3.1），是一种含两个相同亚基的二聚体，也是一种约含12%碳水化合物（6%己糖和6%其他中性糖）的糖蛋白，每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。镁离子存在情况下，ALP可达到最高酶活。AP能催化磷酸单酯水解，比如对硝基苯酚磷酸盐（pNPP）、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。
碱性磷酸酶（ALP）常用来偶联抗体和其他蛋白，从而满足ELISA、WB和组织化学检测上的应用。通常用来蛋白的去磷酸化实验，比如酪蛋白和核酸等。当需要高检测灵敏度时也能用来蛋白标记。还可用在DNA或RNA 的5′-末端去磷酸以防止自连。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后，DNA 或 RNA 还可被放射性标记磷酸盐标记（通过 T4 多核苷酸激酶）。
本品为大肠杆菌重组表达纯化所得，以硫酸铵悬液形式提供，比活力≥10U/mg protein。
产品特性
1）CAS NO：9001-78-9
2）英文同义名：Phosphatase, Alkaline; Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum); Phosphomonoesterase; Alkaline Phosphomonoesterase;
3）中文同义名：磷酸酶（碱性）；碱性磷酸单酯酶；大肠杆菌来源碱性磷酸酶；碱性磷酸酶（大肠杆菌）
4）来源：大肠杆菌（E. Coli）
5）纯化方式：盐分馏（Partially purified salt fraction）
6）外观：2.5M硫酸铵悬液，pH 8.0
7）抑制剂：螯合剂和无机磷酸盐
8）最佳pH：8.0
8）比活力：≥10 units/mg protein (25℃, pH 8.0)
9）活性单位定义：在25℃，pH8.0反应条件，每min内水解对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生成1 μmol对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定义为1个活性单位(unit)。
保存与运输方法
保存：2-8℃保存，1年稳定。
运输：冰袋运输。
注意事项
1）本品稳定性高，反应需Zn2+，Mg2+可提高酶活。在螯合剂存在条件下，100℃加热可导致酶暂时性失活，但恢复至室温酶活会恢复，必须进行苯酚处理，才能引起酶完全失活。本品最适pH约8.0，Tris等醇类化合物可提高酶活。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录1 纯化酶产品（硫酸铵悬浮液形式）使用指导
1）当硫酸铵可能会干扰酶反应，操作如下：
1.1 从冰箱内取出酶。【注：硫酸铵悬浮液产品不可冻存！！】
1.2 确保盖子拧紧，然后颠倒混匀数次得到乳白色悬浮液，此过程可能需要一分钟左右。不可涡旋或超声，因如此强烈的处理可能会引起某些酶的变性。
1.3 使用宽口枪头，吸取一部分悬浮液转移到一干净的离心管内。
1.4 约10,000~15,000x g离心10min。若是条件允许，低温（2-8℃）设置下离心。
1.5 小心吸取尽可能透明的上清液，并保留到一干净的离心管内。没有必要完全吸掉所有的硫酸铵溶液。
1.6 用适量的反应缓冲液加入沉淀中并使其溶解。
1.7 对上述得到的上清液，以及用反应缓冲液溶解的酶溶液进行蛋白含量和/或酶活力检测。
【注：具体酶的活力检测方法可见我司官网或与我们联系索取相关资料。】
2）当硫酸铵不会干扰酶反应，操作如下：
2.1 从冰箱内取出酶。【注：硫酸铵悬浮液产品不可冻存！！】
2.2 确保盖子拧紧，然后颠倒混匀数次得到乳白色悬浮液，此过程可能需要一分钟左右。不可涡旋或超声，因如此强烈的处理可能会引起某些酶的变性。
2.3 使用宽口枪头，吸取一部分悬浮液直接加入反应缓冲液中即可。
【注意：对于硫酸铵悬浮液，绝大部分的酶都是以固体形式存在。很有可能仅仅可忽略量的酶以溶于硫酸铵溶液的形式存在。】