Filipin III 菲律宾菌素 III；Cholesterol fluorescent probe 胆固醇荧光探针；U 18666A；polyene antibiotic 多烯抗生素；CAS NO：480-49-9；

产品信息

产品名称		规格
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针		500µg
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针		1mg
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针		5mg

菲律宾菌素 III（Filipin III）是一种五烯大环内酯抗生素，是分离自菲律宾链霉菌（S. filipinensis）培养物的四种多烯大环内酯异构体中的占比最多的一种。归因其发荧光且特异性结合胆固醇的特性，菲律宾菌素 III常常通过冷冻断裂电镜术和结合后降低的荧光来检测膜上的胆固醇。菲律宾菌素 III用在番茄细胞中，观察激活配体非依赖性的信号反应。通过菲律宾菌素 III和胆固醇的螯合活性，破坏正常和转染角质细胞的脂筏，抑制AKT信号通络。菲律宾菌素 III复合物最大激发波长是338和357nm，最大发射波长是480nm。

产品特征

1）   CAS NO.：480-49-9

2）   化学名：4S,6S,8S,10R,12R,14R,16S,27S-octahydroxy-3R-(1R-hydroxy-hexyl)17,28R-dimethyl- oxacyclooctacosa-17E,19E,21E,21E,23E,25E-pentaen-2-one

3）   同义名：16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 3,5,7,9,11,13,15,26,27- nonahydroxy-2-(1-hydroxyhexyl)-16-methyl-, 27-lactone; NSC3364; NSC-3364;

4）   分子式：C35H58O11

5）   分子量：654.8

6）   纯度：≥90%

7）   外观：固体

8）   溶解性：溶于DMSO（10mg/ml）、DMF（5mg/ml）、乙醇（1mg/ml）、DMSO:PBS(pH 7.2)(1:4)（0.2mg/ml）

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  菲律宾菌素 III与胆固醇的相互作用会改变吸收和荧光光谱，为此，在做荧光显微镜成像分析时，使用340-380nm作为激发波长，385-470nm作为发射波长。

4）  菲律宾菌素 III的荧光染色漂白非常迅速，因此，染色后样本务必尽快分析。

5）  菲律宾菌素 III溶液对光和空气都非常敏感。条件允许的话，配置好的溶液分装冻存，且充入惰性气体，-80℃分装冻存，避免反复冻融。

6）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DMSO）配置成10mg/ml（=15.2718mM）的储存液。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS或其他生理缓冲液稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2、  染色步骤（室温进行）

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   用Filipin III进行染色，验证MβCD处理后细胞膜胆固醇水平的降低。Vero细胞铺板在96孔板，用不同浓度的MβCD（2.5, 5, 7.5和10 mM）诱导处理45 min。用冰PBS清洗3次，细胞用4%多聚甲醛固定。之后，细胞膜胆固醇用稀释于PBS的50μg/ml Filipin III（储存液溶于DMSO，浓度是25mg/ml）孵育2h。高容量成像系统基于Filipin III的荧光强度来定量细胞膜胆固醇水平。【文献来源：PMID: 33224131; PMCID: PMC7667042.】

 

(B) Vero cells were plated in 96-well plates and treated with various concentrations of MβCD (2.5, 5, 7.5, and 10 mM) for 45 min. Cell membrane cholesterol was labeled with 50 μg/mL filipin III, and images were acquired with the Operetta CLSTM High-Content Analysis System.

2）   用Filipin III进行染色，验证U18666A诱导吞噬体样囊泡中的胆固醇积累。CU428和II8G-IA细胞用2μM U18666A或溶剂对照处理15min，之后加入26 μM胆固醇。1h后，样本转移到离心管，清洗后重悬于100μl Tris-HCl，加入等体积4%多聚甲醛-3.4%蔗糖室温固定15min。用PBS清洗后，重悬于100μl PBS中，加入50μg/ml Filipin III（储存液溶于DMSO，浓度是5mg/ml，充入氮气后，-80℃冻存）室温孵育1h，保持震荡，最后细胞清洗2次后，重悬于40μl PBS，滴加到载玻片上进行观察和成像分析。用UV-2A 滤波器组合观察，用Fiji软件进行成像处理和数据分析。【文献来源：Hernández, J., Gabrielli, M., Costa, J. et al. Phagocytic and pinocytic uptake of cholesterol in Tetrahymena thermophila impact differently on gene regulation for sterol homeostasis. Sci Rep 11, 9067 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-88737-z】

 

(b) Fluorescent microscopy. CU428 and II8G-IA cells were pretreated with 2 μM U18666A or vehicle for 15 min prior to the addition of 26 μM cholesterol. Untreated cells are designated as Control. After 1 h, cells were fixed, stained with Filipin and examined by fluorescence microscopy. Arrows indicate large, phagosome-like vesicles and arrowheads indicate selected small vesicles that were also observed in some cells. To improve visualization, some of the background fluorescence of CU428 cells was allowed, although II8G-IA cells required more contrast stretching as fluorescence levels were identical between treatments. Scale bar = 50 μm. Results shown are representative experiment repeated three times with similar results.

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货号	名称	规格
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